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        嬰兒配方奶粉中葉黃素測(cè)定

        2011-07-12 06:05:28陶大利
        生命科學(xué)儀器 2011年5期
        關(guān)鍵詞:葉黃素丁基離心管

        陶大利

        (黑龍江省農(nóng)墾乳品檢測(cè)中心,黑龍江省哈爾濱 150078 )

        葉黃素(Lutein)(3,3-二羥基-α-胡蘿卜素)是一種萜,分子式:C40H56O2,分子量:568.85。[1]它是一種廣泛存在于蔬菜、花卉、水果與某些藻類生物中的天然類胡蘿卜素,其色澤鮮艷,著色力強(qiáng),抗氧化性好,安全無(wú)毒害,具有豐富的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,被廣泛的應(yīng)用于食品、保健品、化妝品、醫(yī)藥、煙草和動(dòng)禽類飼料的多個(gè)領(lǐng)域。[2]近些年的研究表明,葉黃素是幫助眼睛發(fā)育的關(guān)鍵營(yíng)養(yǎng)元素,它具有過(guò)濾藍(lán)光和抗氧化的作用,是嬰幼兒的“隱形太陽(yáng)鏡”。所以葉黃素被廣泛的添加到嬰幼兒配方奶粉中。本文以GB/T23209-2008(奶粉中葉黃素的測(cè)定 液相色譜-紫外檢測(cè)器)為基礎(chǔ),對(duì)方法進(jìn)行了改進(jìn),提高了對(duì)奶粉中葉黃素的提取效率。

        1 實(shí)驗(yàn)部分

        1.1 試劑

        甲醇:色譜純;甲基叔丁基醚:色譜純;丙酮:優(yōu)級(jí)純;2,6-二叔丁基對(duì)甲酚(BHT):純度大于99%;葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品;

        1.2 儀器與材料

        PE高效液相色譜儀(帶鎢燈);分析天平:感量0. 1mg;漩渦振蕩器;高速離心機(jī);

        1.3 方法

        1.3.1 處理步驟

        準(zhǔn)確稱取奶粉樣品0.5-1g(精確到0.1mg)到30mL的塑料離心管中,加入5mL 40℃水充分溶劑,用鋁箔紙包裹離心管外部(避光),加入10mL含0.1%2,6-二叔丁基甲酚(BHT)的丙酮溶液,分?jǐn)?shù)次渦旋震蕩5min,使水溶液和丙酮溶液能充分混合,再超聲10min,向離心管中加入4g氯化鈉,分?jǐn)?shù)次渦旋震蕩5min,以4000轉(zhuǎn)/min,離心5min,上清液過(guò)0.45μ m有機(jī)濾膜過(guò)濾,上機(jī)。樣品含量低時(shí)可吸取上清液5mL 30℃氮?dú)獯蹈蓾饪s至近干,再用含0.1%2,6-二叔丁基甲酚(BHT)的丙酮溶液定容至1mL。

        1.3.2 儀器條件

        a)色譜柱:C30色譜柱4.6×250,5μm;

        b)柱溫:30℃;

        c)流速:1.0mL/min;

        d)波長(zhǎng):445nm;

        e)進(jìn)樣量:40μL;

        f)流動(dòng)相:A(甲醇),B(甲基叔丁基醚)梯度洗脫見(jiàn)表1

        1.3.3 測(cè)定條件

        用葉黃素標(biāo)準(zhǔn)工作液分別進(jìn)樣,葉黃素的參考保留時(shí)間為5.47min,以標(biāo)準(zhǔn)系列工作液濃度為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。用標(biāo)準(zhǔn)工作曲線計(jì)算未知樣品的濃度,進(jìn)行結(jié)果計(jì)算,用以上條件得到的葉黃素色譜圖入下圖:圖1為葉黃素標(biāo)準(zhǔn)品圖譜,圖2為嬰兒配方奶粉譜圖

        1.3.4 計(jì)算公式

        式中 X:樣品中葉黃素的含量,μg/100g;

        C:由標(biāo)準(zhǔn)曲線中查得的試樣中葉黃素的濃度,μg/mL

        V:試樣稀釋體積,mL;

        m:試樣的質(zhì)量,g;

        2 結(jié)果

        2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

        在選定的色譜條件下,將葉黃素標(biāo)準(zhǔn)溶液配制成濃度為0.05、0.1、0.2、0.4、1.0、2.0μg/mL 6個(gè)濃度系列,在此濃度范圍內(nèi),濃度與對(duì)應(yīng)的峰面積呈線性關(guān)系,線性方程為:y=379874.03X+14289.56,相關(guān)系數(shù)R2=0.9990如圖3

        2.2 精密度與重現(xiàn)性

        選用含有葉黃素的嬰兒配方奶粉(育兒康幼兒配方奶粉)進(jìn)行6平行試驗(yàn)。結(jié)果如表2

        2.3 回收率

        選用同上的樣品(育兒康幼兒配方奶粉)分別稱取1g樣品,兩個(gè)做空白,分別在樣品中加入0.5μg、 1μg、2μg、5μg三個(gè)梯度,每個(gè)梯度做4平行(n=4)結(jié)果如表3

        由表2得出,加標(biāo)量在0.5~5μg,折算成奶粉的含量為50~500μg/100g時(shí),回收率在92.8~103.5之間,RSD%在1.2~3.5之間

        2.4 檢出限

        當(dāng)稱樣量為1g,樣品經(jīng)濃縮5倍,進(jìn)樣量為40μL時(shí),以3倍信噪比S/N計(jì)算,該方法的檢出限為5μg/100g。

        3 討論

        由于奶粉樣品呈細(xì)小的顆粒狀,如果按照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23209-2008中的處理方法,雖然也可以獲得較高的回收率,但不能將樣品包裹的葉黃素完全釋放出來(lái),造成樣品的測(cè)試結(jié)果偏低很多,并且因?yàn)槿~黃素在奶粉樣品中包埋的程度不一致,使測(cè)試結(jié)果的重現(xiàn)性很差。解決這一問(wèn)題可以先用溫水將樣品充分溶解,再用丙酮溶液提取,再用氯化鈉去飽和水溶液[3],離心使水相與丙酮溶液徹底分開(kāi)。另外葉黃素遇到光照很容易損失,所以在整個(gè)處理過(guò)程中都應(yīng)盡量避光,可以在離心管外部裹上鋁箔紙來(lái)避免光照。

        本方法處理簡(jiǎn)單,易操作,回收率和重現(xiàn)性好,適合嬰兒配方奶粉中葉黃素的測(cè)定。

        [1]梅益,中國(guó)百科全書(shū)(化學(xué)卷)Ⅱ[M].北京:中國(guó)百科全書(shū)出版社,1989.1098-1099

        [2]孫曉霞劉云鳳,章鵬飛,葉黃素在食品中的應(yīng)用.中國(guó)食品添加劑,1006-2513(2007)4-0127-05

        [3]GB/T 5009.20-2003 食品中有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的測(cè)量,6.2凈化

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