楊彥秋　蔡正勇　柳繼三

近年來,食用菌生產(chǎn)發(fā)展迅速,成為農(nóng)民增收的良好途徑,在食用菌生產(chǎn)中,制種環(huán)節(jié)尤為重要,制種技術(shù)中比較重要的兩個(gè)方面是:

一?無菌操作技術(shù)

無菌操作是食用菌制種工作成敗的關(guān)鍵?它包括兩方面內(nèi)容:一是制種過程中使用的全部材料是無菌的;二是必須采用無菌操作方法(也包括培養(yǎng)條件)兩者結(jié)合起來,才能保證制種的全部過程是無菌的,才能培養(yǎng)出純菌種?

1?高溫滅菌

(1)火焰滅菌

接種環(huán)?接種鉤?接種鏟?鑷子等金屬器皿可直接在酒精燈火焰上燒灼滅菌,試管口?瓶口也要通過火焰達(dá)到滅菌目的?方法簡(jiǎn)單迅速,滅菌徹底?

(2)常壓蒸汽滅菌

將滅菌物品(培養(yǎng)料)放在蒸籠內(nèi)蒸煮?從開鍋(100℃)開始算起,連續(xù)加熱開鍋4~12h達(dá)到徹底滅菌?個(gè)體戶或菌種廠自制的滅菌灶,在生產(chǎn)原種?栽培種或栽培菌袋時(shí),均采用此法滅菌?此法簡(jiǎn)單?適用?成本低?

(3)高壓蒸汽滅菌

高壓蒸汽滅菌是生物滅菌技術(shù)中應(yīng)用最廣,滅菌時(shí)間短,效果最佳的滅菌技術(shù),原理是根據(jù)蒸汽溫度隨壓力增加而提高,壓力越大溫度越高的原理?水在封閉的滅菌器中(高壓滅菌鍋中),通過加熱使滅菌器中的水產(chǎn)生水蒸汽,在排除滅菌器內(nèi)冷空氣后,關(guān)閉排氣閥,蒸汽不能逸出,增加了滅菌器中的壓力,水的沸點(diǎn)或蒸汽的溫度隨之上升,因而獲得了比100℃更高的溫度,達(dá)到有效滅菌的目的?一般培養(yǎng)基在高壓滅菌器中待壓力升到1.05kg/cm2(121℃)時(shí)滅40min,也可在1.5kg/cm2?(126℃)滅30min,達(dá)到徹底滅菌,如滅固體培養(yǎng)料在1.5kg/cm2滅菌1~2h即可?高壓滅菌器有手提式?立式?臥式等多種型號(hào)?熱源有電源?煤?煤氣?蒸汽等等?

2?紫外線殺菌

波長(zhǎng)在2600~2800A?的紫外線有很強(qiáng)的殺菌能力?電子通過水銀蒸汽可產(chǎn)生波長(zhǎng)2357A?的紫外線,以此制成的紫外線燈管,殺菌力強(qiáng)而穩(wěn)定?距被照物體20~30cm照射3~5min,即可殺死細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)體,十幾分鐘可殺死細(xì)菌的芽孢?紫外線燈管在生產(chǎn)實(shí)踐中應(yīng)用較廣,用于空氣消毒,但穿透力不大,只能用于表面消毒?接種室?接種箱?手術(shù)室?藥廠等均可安裝?接種箱安15w,接種室可視大小安30w或100w,照射30min即可達(dá)到滅菌目的?紫外線對(duì)眼黏膜?視神經(jīng)?皮膚等均有殺傷力,故不能在開著的紫外線燈下工作,必要時(shí)需穿防護(hù)衣帽,并戴上有色眼鏡工作?

3?化學(xué)藥物殺菌

(1)甲醛(福爾馬林):40%甲醛溶液用于接種箱?接種室?培養(yǎng)室熏蒸消毒,用量6~8ml/m3,加熱時(shí)揮發(fā)產(chǎn)生氣體對(duì)空氣殺菌?有兩種方法:①直接加熱熏蒸:關(guān)閉門窗,按空間大小稱其用量,倒入鐵或鋁盒中,放在酒精燈上或電爐上加熱,揮發(fā)出甲醛氣體密閉24h;②氧化熏蒸:高錳酸鉀與甲醛混合熏蒸,因?yàn)楦咤i酸鉀是一種氧化劑,與甲醛混合時(shí)發(fā)生氧化還原反應(yīng),使甲醛揮發(fā)為氣體,甲醛與高錳酸鉀比例為2∶1,將甲醛倒入瓷碗中,再按2∶1比例加入高錳酸鉀,混合后立即產(chǎn)生氣體?甲醛熏蒸應(yīng)在使用前24h進(jìn)行?

甲醛蒸氣對(duì)眼黏膜?呼吸道有強(qiáng)烈的刺激作用,且有毒,熏蒸后短時(shí)間不能入室工作,待甲醛蒸氣散消后才能入室工作?

(2)硫磺:常用在接種室?培養(yǎng)室熏蒸?用量15g/m3,關(guān)閉門窗,點(diǎn)燃熏蒸,密閉12h?

(3)高錳酸鉀:0.1%的高錳酸鉀,用于工具?器皿和手的消毒?

(4)來蘇兒(煤酚皂液):3%的來蘇兒,用于器皿或室內(nèi)噴霧消毒?

(5)石碳酸:3~5%的石碳酸,用于器皿消毒或室內(nèi)噴霧消毒?

(6)新潔爾滅:0.1~0.25%的新潔爾滅,用于器皿消毒或室內(nèi)噴霧消毒?

(7)75%酒精:接種時(shí)用于擦手或瓶口等?

(8)石灰:石灰分生石灰和熟石灰兩種?熟石灰配成l%~3%石灰水,用于地面?墻壁消毒;生石灰用于地面?墻壁消毒?畦底可撒石灰粉消毒,菌床?菌磚等局部發(fā)現(xiàn)雜菌可撒石灰粉消毒?

(9)多菌靈或托布津:生料栽培時(shí)用0.1%~0.2%多菌靈或托布津拌入料中防止雜菌污染?

(10)苯菌特:是一種高效低毒廣譜的內(nèi)吸殺菌劑,用法同多菌靈?

以上消毒藥品可根據(jù)情況選用,為避免雜菌產(chǎn)生抗藥性,可輪換使用,以提高殺菌效果?

二?無菌操作

為避免雜菌污染,菌種韻移接?分離?接種工作要求在一個(gè)相對(duì)無菌環(huán)境下,通過無菌操作進(jìn)行?小規(guī)模的可在無菌箱內(nèi)進(jìn)行,工作量稍大的,可在超凈工作臺(tái)上或無菌室內(nèi)進(jìn)行?

1?無菌室(接種室)的設(shè)計(jì)與要求

無菌室應(yīng)分里外兩間?里間為接種室,面積5~6m2;外間為緩沖間,面積為2~3m2,兩間高度均為2~2.5m,過大不易保持無菌狀態(tài)?房間的地板?墻壁?天棚要平整光滑,便于擦洗消毒;門設(shè)拉門,門窗能關(guān)嚴(yán)密閉?接種室?緩沖間均應(yīng)安裝紫外線燈?接種室應(yīng)備有酒精燈?火柴?接種鉤?接種鏟?剪刀?鑷子?75%酒精棉球等等;緩沖間應(yīng)備有工作服,托鞋?帽子?口罩?消毒藥品?噴霧器等等?

2?接種箱的設(shè)計(jì)與要求

接種箱是木柜鑲玻璃結(jié)構(gòu),大小不一,一般為100cm×70cm×50cm?要求嚴(yán)密,操作口要安裝套袖,箱上方裝15w紫外光燈,兩側(cè)設(shè)有能開關(guān)并且嚴(yán)密的門,以便取放接種物品?

接種室?接種箱要保持清潔,使用前進(jìn)行消毒?

消毒方法:

(1)熏蒸:用甲醛,硫磺或甲醛與高錳酸鉀混合進(jìn)行熏蒸,按空間大小稱其用量,關(guān)閉門窗密閉24h,熏蒸完畢,打開門,待甲醛氣體擴(kuò)散后,再入室工作?

(2)噴撒:用3%來蘇兒或5%石碳酸向地面噴撒,向空氣噴霧以及擦洗桌面進(jìn)行消毒?

(3)超凈工作臺(tái):超凈工作臺(tái)是利用多層濾板過濾空氣,使操作臺(tái)上的空氣得以凈化,是接種的良好設(shè)備?操作臺(tái)安有15w紫外線燈,接種前照射30min,關(guān)燈后工作?