李志軍

摘要用薄層色譜法和反相高效液相色譜法對青海兩地區(qū)野生橢圓葉花錨中熊果酸含量進(jìn)行定性定量分析。結(jié)果表明,超聲法提取橢圓葉花錨中的熊果酸含量較高,青沙山地區(qū)花錨中熊果酸含量高于大通寶庫鄉(xiāng)。

關(guān)鍵詞花錨;熊果酸;反相高效液相色譜;含量測定

中圖分類號S58;Q946文獻(xiàn)標(biāo)識碼A文章編號 1007-5739(2009)11-0016-01

橢圓葉花錨(Halenia elliptica D. Don)為龍膽科花錨屬植物,是藏藥中用于治療肝膽系統(tǒng)疾病的常用植物藥,泛稱“藏茵陳”?；ㄥ^的主要化學(xué)成分為山酮(Xanthone)、黃酮(Flavone)和三萜(Triterpene)類化合物,已經(jīng)分離鑒定了15種山酮和黃酮成分。熊果酸體外對G+和G-菌及酵母菌均有抗菌活性,還有抗糖尿病、抗?jié)兗敖档脱淖饔?。近年來的研究顯示,熊果酸除具有抗突變、抗促癌、抗氧化作用外,對消化道腫瘤細(xì)胞和白血病細(xì)胞還有細(xì)胞毒和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用。

1材料與方法

1.1供試材料

供試材料為橢圓葉花錨,于2008年8月初采自青海大通寶庫鄉(xiāng)和平安青沙山,將地上部分自然陰干,粉碎后備用。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器。Waters515高效液相泵,Waters 2996DAD檢測器,Waters Empower色譜工作站,Waters色譜柱恒溫箱,WFH-203B三用紫外分析儀(上海精科實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)),電子分析天平,KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)),RT-9型中藥粉碎機(jī)(浙江省縉云縣超力機(jī)械廠生產(chǎn)),硅膠Gf 254薄層板(青島海洋化工生產(chǎn))。

1.2.2試劑。甲醇為色譜純(山東禹王實(shí)業(yè)有限公司禹城化工廠生產(chǎn)),娃哈哈純凈水,氯仿、乙酸乙酯、甲醇、濃硫酸、磷酸均為分析純。熊果酸對照品(中國藥品生物制品檢定所生產(chǎn)),純度均大于98%。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1對照品溶液制備。準(zhǔn)確稱取熊果酸對照品,加甲醇制成160μg/mL的熊果酸對照品溶液。

1.3.2樣品溶液制備。分別取兩地花錨樣品,每份樣品各2.0g,5次重復(fù)。將稱好的樣品置于具塞錐形瓶中,準(zhǔn)確加入20mL體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇,超聲處理2h,過濾,濾渣用95%的乙醇洗滌2次,合并濾液,于25mL容量瓶中定容,搖勻,靜置。取適量上述樣品液過0.45μm微孔濾膜,在選定的色譜條件下測定有效成分含量。

1.3.3熊果酸鑒別。取樣品溶液和對照品溶液各10μL點(diǎn)于同一硅膠G板上,以氯仿∶乙酯(體積比)=1∶1為展開劑,展開后取出,晾干。以硫酸∶甲醇(體積比)= 1∶2為顯色劑,置烘箱中烘至顯色清晰。在樣品色譜中,與對照品相應(yīng)的位置上,顯相同紫紅色的斑點(diǎn)。

1.3.4熊果酸含量測定的色譜條件。THERMO C18色譜柱(4.6mm×250mm,5μm);流速1.0mL/min;柱溫30℃;流動(dòng)相甲醇-0.4%磷酸(85∶15);檢測波長215nm;色譜分離圖見圖1。

2結(jié)果與分析

2.1線性關(guān)系考察

用25μL微量進(jìn)樣器吸取熊果酸160μg/mL 對照品溶液2.0μg、4.0μg、6.0μg、8.0μg、10.0μg、12.0μg注入液相色譜儀,記錄峰面積,以熊果酸對照品進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,熊果酸在0.32~1.60μg之間線性關(guān)系良好。回歸方程為y=1 025 388 x-103 368.8(R2=0.999 2)。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取熊果酸對照品溶液5μL,分別重復(fù)進(jìn)樣5次,峰面積積分值RSD為0.93%。

2.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取熊果酸樣品溶液各5μL,于0h、3h、6h、9h、12h

測定峰面積積分值,RSD為1.09%。

2.4重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

各取同一樣品5份,分別按照含量測定項(xiàng)下的方法測定,記錄熊果酸面積積分值,RSD為1.56%。

2.5加樣回收率

分別取已知含量的5份花錨樣品各約1g,精密加入熊果酸對照品,按“1.3.2”法提取,在原色譜條件下測定,計(jì)算回收率,平均回收率為96.51%。

2.6花錨樣品中熊果酸的含量

分別取每份樣品溶液10μL進(jìn)行分析,并測定峰面積積分值。計(jì)算得青沙山地區(qū)花錨熊果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.234%,大通地區(qū)花錨熊果酸質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.153%。可以看出,青沙山地區(qū)花錨品質(zhì)較好。

3結(jié)論

3.1提取方法的選擇

比較乙醇超聲和乙醇回流提取方法發(fā)現(xiàn),超聲提取熊果酸含量較高,而且超聲法所用時(shí)間短,設(shè)備簡單,操作方便。

3.2流動(dòng)相選擇

結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果并參考前人研究,甲醇和H3PO4(0.4%)作為流動(dòng)相效果較好。

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