王梅 姜峰 陳火星

（1.濟源市農(nóng)業(yè)科學研究所，河南濟源，454650；2.山東費縣農(nóng)業(yè)局；3.濟源市公路局）

沂州木瓜外植體滅菌技術(shù)研究

王梅1姜峰2陳火星3

（1.濟源市農(nóng)業(yè)科學研究所，河南濟源，454650；2.山東費縣農(nóng)業(yè)局；3.濟源市公路局）

利用沂州木瓜新長出10 d左右的嫩莖，采用不同消毒劑、滅菌時間對沂州木瓜進行初代培養(yǎng)試驗，結(jié)果表明，沂州木瓜外植體的消毒在75%酒精10 s和0.1%升汞1.5 min的條件下效果最佳。

沂州木瓜 外植體 組織培養(yǎng)

木瓜栽培已有2 000多年的歷史，沂州木瓜為我國北方木瓜中別具特色的可食性珍品。沂州木瓜適應性強，病蟲害少，耐粗放管理，極具觀賞價值，是園林綠化的理想樹種[1]，也是我國特有的珍稀水果之一，有很高的食用價值和藥用價值。沂州木瓜常規(guī)繁育主要采用播種、扦插和嫁接[2～5]，繁育速度較慢，為了加快該優(yōu)良品種的推廣進程，研究沂州木瓜的快繁技術(shù)具有重要意義。由于沂州木瓜獲得無菌培養(yǎng)物有一定難度，所以本試驗利用沂州木瓜嫩莖作為外植體進行組織培養(yǎng)，從而篩選出沂洲木瓜微體快繁的最佳滅菌時間及消毒劑，總結(jié)沂洲木瓜的外植體技術(shù)，以期為加快發(fā)展沂州木瓜組織培養(yǎng)奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

沂州木瓜來源于河南省濟源市農(nóng)業(yè)科學研究所。

1.2 試驗方法

①沂州木瓜外植體不同消毒劑試驗 將沂州木瓜新長出10 d左右的嫩莖去掉葉片，置于小燒杯中用流水沖洗20 min，然后在無菌室的超凈工作臺上用75%酒精漂洗10 s，再分別用0.1%升汞消毒液浸泡7 min，15%次氯酸鈣，10%溴水消毒；共3個處理，每處理3次重復。

②不同消毒劑消毒時間試驗 將沂州木瓜新長出10 d左右的嫩莖去掉葉片，置于小燒杯中用流水沖洗20 min，然后在無菌室的超凈工作臺上用75%酒精漂洗10 s，再分別用0.1%升汞消毒液浸泡6，5，2，1.5，1 min；共5個處理，每處理3次重復。

1.3 培養(yǎng)條件

培養(yǎng)溫度為（25±2）℃，日光燈照射時間12 h/d左右，光照強度為2 000 lx左右。

2 結(jié)果與分析

2.1 沂州木瓜外植體不同消毒劑的使用效果

外植體的消毒在組織培養(yǎng)中是十分重要的，是建立無菌培養(yǎng)的第一步，不同植物，甚至同一株植物不同部位的組織帶菌種類和程度都不同，它們對不同種類、不同濃度消毒劑的敏感度也不一樣。消毒劑的使用既要把材料上的病菌殺滅，又要易被蒸餾水沖洗掉或自行分解，而且不會損傷或輕微損傷組織，影響其生長。

將沂州木瓜新長出嫩莖去掉葉片，流水沖洗20 min，然后用3種消毒劑進行處理，效果見表1。從表1可以看出，這3種消毒劑效果都不是很好，75%酒精10 s，0.1%升汞7 min無污染現(xiàn)象，但將沂州木瓜新長出嫩莖全部殺死，說明雖然0.1%升汞消毒效果好，但是對植物體的毒害性比較大，這與王利民等[6]研究結(jié)果相似，說明滅菌時間過長。在多種植物組織培養(yǎng)過程中，都可以用0.1%升汞來消毒，且效果較好，但消毒時間要適當控制。用次氯酸鈣、溴水消毒雖然有一定的成活率，但污染率較高，分別達56.7%和76.7%。

2.2 不同消毒時間對外植體滅菌效果的影響

由表2可以看出，對外植體采用常規(guī)滅菌措施時，在用75%酒精漂洗10 s基礎上，再用0.1%升汞處理6 min，雖然污染率僅有3.8%，但是材料褐化嚴重，外植體萌發(fā)成活率僅為6.7%，80%以上外植體被升汞殺死。0.1%升汞處理5 min，污染較小，材料沒有褐化的情況，但成活率僅為52.5%。0.1%升汞處理2 min，污染較小，材料沒有褐化的情況，成活率為55.0%。0.1%升汞處理1.5 min，污染稍大，但材料沒有褐化的情況，且成活率為59.5%。0.1%升汞處理1 min，雖然沒有褐化的情況但污染較嚴重，成活率不高。因此對木瓜外植體的滅菌處理在用75%酒精漂洗10 s的基礎上，應選擇0.1%升汞處理1.5 min，效果較好。其次為0.1%升汞處理2 min。

成活率隨著HgCl2處理時間的增加而先增加后降低，表明過長時間的HgCl2接觸會損傷外植體[7]。因此對沂州木瓜外植體的處理比其他植物更難掌握，時間太短，污染難以控制；時間太長，對組織產(chǎn)生毒害導致芽的萌發(fā)困難。本試驗結(jié)果表明，外植體萌發(fā)采用75%酒精處理10 s，再用0.1%升汞1.5 min

3 小結(jié)與討論

對于從田間直接采取的沂州木瓜外植體，由于攜帶大量的微生物，在進行組織培養(yǎng)時，如何成功的對其滅菌，是進行后續(xù)研究的前提[8]。同時由于莖段比較幼嫩，在滅菌過程中極易被滅菌劑損傷，造成外植體無法萌發(fā)。為了保證成功地進行培養(yǎng)，在篩選最佳滅菌措施時，不僅要考慮無污染率，更應考慮滅菌后材料的萌發(fā)率[9]。既要保證較低的污染率，又要得到較低的褐變率。另外，污染率不但與消毒時間有關，而且和操作過程中的每個環(huán)節(jié)及外植體的帶菌程度、外植體結(jié)構(gòu)等因素都有關；而褐變率也不只是與消毒時間有關，也與外植體基因型、幼嫩程度、殘留消毒液多少等因素有關，因此，在實際應用中，可根據(jù)外植體幼嫩程度，適當延長或縮短消毒時間。本試驗中，沂州木瓜外植體的滅菌處理在75%酒精10 s基礎上，選擇0.1%升汞1.5 min，效果較好。的滅菌處理，可達到59.5%的成活率。

表1 幾種消毒劑對沂州木瓜外植體的消毒效果

表2 0.1%升汞不同滅菌時間對外植體的滅菌效果

圖1 0.1%升汞不同消毒時間對外植體污染率和成功率的影響

[1]管恩樺，王瑞良，張雷，等.適合園林綠化的果樹品種——沂州木瓜[J].煙臺果樹，2008（2）：35-36.

[2]周根土.宣木瓜豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].經(jīng)濟林研究，2003，21（4）：85-86.

[3]劉大勇，于萬俊，趙翠華，等.曹州木瓜早實豐產(chǎn)栽培技術(shù)[J].煙臺果樹，2003（1）：45.

[4]佟金紅，許金蘭，許國臣，等.木瓜引種栽培試驗初報[J].河北林業(yè)科技，2003，2（4）：3-5.

[5]劉貴利，徐同印.皺皮木瓜的栽培技術(shù)[J].時珍國醫(yī)國藥2003，14（5）：319-320.

[6]王利民，周毅，陳龍友，等.植物組織培養(yǎng)中消毒劑的運用[J].貴州師范大學學報：自然科學版，2002，20（1）：15-17.

[7]趙賢慧，劉慶華，張德鋒.紅金銀花組織培養(yǎng)外植體滅菌的研究[J].江蘇林業(yè)科技，2007，34（1）：23-25.

[8]李群，杜文平.植物組織培養(yǎng)中控制污染技術(shù)研究[J].四川林業(yè)科技，1999，20（4）：22-26.

[9]王子成，李忠愛，鄧秀新.柑橘成年態(tài)莖段外植體消毒方法研究[J].河南大學學報：自然科學版，2005，35（2）：57-60.

Studies on the Selection Technology of Yizhou Pawpaw Explants

WANG Mei1,JIANG Feng2,CHEN Huoxing3
(1.Jiyuan Institute of Agricultural Sciences,Jiyuan,Henan 454650;2.Shandong Fei County Bureau of Agriculture; 3.Jiyuan Highway Bureau)

The 10 d new buds of Yizhou pawpaw were used as the explants.These explants were cultured primarily with different disinfectors and different sterilizing time.The results showed that it was the best for the explants to treat with 75%alcohol for 10 s and 0.1%HgCl2for 1.5 min.

Pawpaw;Explant;Tissue culture

10.3865/j.issn.1001-3547.2009.24.006

王梅（1984-），研究實習員，主任，主要從事花卉苗木栽培技術(shù)及組織培養(yǎng)技術(shù)研究，電話：13838905692，0391-6609532。E-mail：wangmei6868@126.com

2009-11-03