摘要 采用生長速率法測(cè)定了黃皮植株甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌等12種植物病原真菌的生物活性，研究結(jié)果表明：黃皮植株甲醇提取物，對(duì)香蕉炭疽病菌和辣椒炭疽病菌等有一定的活性；在10mg/mL的濃度下，黃皮果核、樹皮、枝葉和花索的甲醇提取物，對(duì)香蕉炭疽病菌菌絲生長的抑制率分別為88.83％、84.61％、72.23％和50.11％；黃皮果核甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 mg/mL。黃皮果核甲醇提取物的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取組分對(duì)香蕉炭疽病菌的活性研究表明，氯仿層的活性最高，抑制率為86.11％。黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物對(duì)香蕉炭疽病菌的EC₅₀為2.37 mg/mL。

關(guān)鍵詞 黃皮；香蕉炭疽病菌；抑真菌活性

中圖分類號(hào) S482.292

黃皮為蕓香科(Rutaceae)黃皮屬(Clausena)植物，具有廣泛的藥理活性，國內(nèi)外學(xué)者對(duì)此進(jìn)行了深入的研究。本屬植物全世界約有30種，分布于熱帶、亞熱帶地區(qū)，我國有近10種，分布于長江以南各省，以云南南部、廣東、廣西、四川、海南及臺(tái)灣等省分布較為集中，資源豐富，中藥中應(yīng)用較廣。該屬植物在我國自古即為藥用，古代及現(xiàn)代的中草藥書籍中多有收載，民間應(yīng)用更為廣泛。藥理研究表明：黃皮屬植物具有保肝、降脂、解痙、抑菌及抗癌等生物活性。本文就黃皮甲醇提取物對(duì)幾種植物病原真菌的抑制作用報(bào)道如下。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 植物材料

采自華南農(nóng)業(yè)大學(xué)殺蟲植物標(biāo)本園內(nèi)，經(jīng)鑒定為黃皮[Clausena lansium(Lour．)Skeels]。

1．1．2 供試菌種

稻瘟病菌(Pyricularia grisea)、辣椒炭疽病菌(Colletotrichum capsici)、水稻紋枯病菌(Rhizoctoniasolani)、香蕉炭疽病菌(Colletotrichum musae)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)等為本實(shí)驗(yàn)室保存菌種；玉米莖基腐病菌(Fusarium rose- um f.sp.cerealis)、玉米大斑病菌(Exserohilumturcicum)、小麥根腐病菌(Bipolaris sorokiniana)、白菜黑斑病菌(Alternaria brassicae)、蔥紫斑病菌(Alternaria porii)、棉花黃萎病菌(Verticilliumdahliae)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfetum)為華南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物病理學(xué)系提供。

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 甲醇提取物的制備

將采集的新鮮黃皮果核、樹皮、枝葉和花索分別陰干，50℃烘干，經(jīng)粉碎機(jī)粉碎(40～60目篩)，所得植物粉用密封袋于遮光處保存?zhèn)溆?。定量稱取黃皮果核、莖和葉柄粉，用甲醇在避光處浸泡提取，濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至于，4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1．2．2 生物活性測(cè)定方法

采用菌絲生長速率法，用10％丙酮將植物提取物配制成一定濃度的供試藥液，制成所需濃度的帶毒培養(yǎng)基；以混入相同體積的lO％丙酮作為對(duì)照。在直徑為7.5 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)加入適量PDA培養(yǎng)基，接人供試病菌培養(yǎng)。待菌絲即將長滿整個(gè)培養(yǎng)皿時(shí)，在培養(yǎng)皿邊緣菌絲生長旺盛處用打孔器打取直徑為0.5 cm的菌餅，接種于帶毒培養(yǎng)基中央(有菌絲的一面向下)，每培養(yǎng)皿放置1個(gè)菌餅，每處理重復(fù)3次。置于25℃電熱恒溫培養(yǎng)箱黑暗培養(yǎng)。采用十字交叉法測(cè)定菌落直徑，按以下公式計(jì)算抑制率：

抑制率＝[(CK菌落直徑-0.5)-(處理菌落直徑-0.5)]/(CK菌落直徑-0.5)×100％。

1．2．3 抑菌譜的測(cè)定

以香蕉炭疽病菌、辣椒炭疽病菌等12種病原真菌為供試病菌，用1.2.2的方法，在10 mg/mL濃度下，測(cè)定黃皮植株甲醇提取物的抑菌作用效果。

1．2．4 黃皮抑菌活性物質(zhì)的初步分離

用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇分別萃取黃皮果核甲醇提取物，合并相應(yīng)提取液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干。測(cè)定不同萃取組分在5 mg/mL的濃度下對(duì)香蕉炭疽病菌的活性。

2 結(jié)果與分析

2．1 黃皮植株粗提物的抑菌效果

從表1可以看出，黃皮植株甲醇提取物均有一定的抑菌活性，在10 mg/mL的濃度下，對(duì)12種植物病原病菌等存在一定的抑制活性，其中黃皮植株甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌和辣椒炭疽病菌菌絲的生長抑制率分別為85.53％和81.32％。

2．2 黃皮果核甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌的抑制

作用

結(jié)果表明(表2)，不同濃度黃皮果核甲醇提取物均對(duì)香蕉炭疽病菌有一定的抑制作用，1.25 mg/mL的濃度下的抑制率分別為32.21％，而20 mg/mL的濃度下抑制率為93.57％。抑制率與甲醇提取物濃度成正相關(guān)。黃皮果核甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 nag/mL。

2．4 黃皮果核甲醇提取物的萃取成分對(duì)香蕉炭疽

病菌的活性

結(jié)果表明(表3)，在5 mg/mL的濃度下，氯仿、正丁醇層、石油醚和乙酸乙酯均對(duì)香蕉炭疽病菌有一定的抑制活性，抑制率分別為86.12％、81.34％、65.69％和10.53％，氯仿層的活性明顯高于其他萃取層。而水層卻存在促進(jìn)生長活性，水相的抑制率為-12.64 9/6。

2．5 黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物對(duì)香蕉炭

疽病菌的活性

結(jié)果表明(表4)，不同濃度的黃皮果核甲醇提取物的氯仿萃取物均對(duì)香蕉炭疽病菌有一定的抑制作用，0 .312 5 mg/mL的濃度下的抑制率為10.20％，而5 mg/mL的濃度下抑制率為85.08％。抑制率與濃度成正相關(guān)。各個(gè)濃度的抑制率之間有顯著的差異。

3 討論

目前，醫(yī)藥界對(duì)黃皮各組織的化學(xué)成分均已進(jìn)行了研究，并作了相關(guān)報(bào)道。但這些研究大多是醫(yī)藥界為了確定其藥用價(jià)值而進(jìn)行的，應(yīng)用于農(nóng)業(yè)上的研究較少。朱亮鋒等曾對(duì)齒葉黃皮果核的精油進(jìn)行了化學(xué)成分的鑒定，其精油的愛草腦含量高達(dá)93.1 9/5，對(duì)7種霉菌具有較強(qiáng)的抑菌活性。

已有醫(yī)學(xué)工作者指出川黃柏樹皮、果核和愈傷組織對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸桿菌都有較好的抑菌效果。A.Chakraborty等研究了黃皮中咔唑類生物堿的抑菌活性，結(jié)果表明：這類化合物不僅對(duì)革蘭氏陰性、陽性菌有良好的抑制活性，同時(shí)對(duì)真菌也有明顯的抑制活性。說明此類化合物具有潛在的抗菌應(yīng)用價(jià)值，將黃皮提取物應(yīng)用于農(nóng)業(yè)植物病害的防治上將為殺菌劑的發(fā)展開辟一條新路。

本研究結(jié)果表明黃皮果核的甲醇提取物對(duì)香蕉炭疽病菌的EC₅₀為4.34 mg/mL。進(jìn)一步用氯仿萃取黃皮果核甲醇提取物，在5 mg/mL的濃度下，對(duì)香蕉炭疽病菌菌絲生長的抑制率為85.08％，氯仿層對(duì)香蕉炭疽病菌的EC₅₀為2.13 mg/mL，比同濃度的黃皮果核甲醇粗提物活性提高了1.70倍。

本研究證實(shí)黃皮果核的甲醇提取物中含有具有抑真菌活性的次生物質(zhì)，進(jìn)一步研究表明，該活性物質(zhì)溶于氯仿、石油醚、正丁醇等有機(jī)溶劑，對(duì)香蕉炭疽病病原菌敏感，對(duì)進(jìn)一步開發(fā)利用黃皮資源具有一定的指導(dǎo)意義，但是關(guān)于他的作用方式、作用機(jī)理有待于進(jìn)一步的研究。