范賢林　芮昌輝

摘要以蟲(chóng)酰肼25～80ug／ml．汰選棉鈴蟲(chóng)種群26代，用兩種生物測(cè)定方法對(duì)汰選后的棉鈴蟲(chóng)種群測(cè)定其抗藥性。以浸葉法測(cè)定的I．C”值汰選前為33．8168ug／mI，汰選24代后達(dá)到914．181 3 Fg／mI抗性指數(shù)為27．03倍，與對(duì)照種群的LC,。102．427 4l~g／mI。比較，校正抗性指數(shù)為G．93倍；用飼料混合法測(cè)定的lc值汰選前為73．8416~g／mL，汰選24代后達(dá)到833．027 8~g／mI。，抗性指數(shù)為11．26倍，與對(duì)照種群的lc105．889 ug／mI。比較，校正抗性指數(shù)為7．87倍，表明棉鈴蟲(chóng)汰選種群對(duì)蟲(chóng)酰肼的抗性水平呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。

關(guān)鍵詞有害生物化學(xué)防治；蟲(chóng)酰肼；棉鈴蟲(chóng)；抗藥性汰選

中圖分類號(hào)S 481．4

昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殺蟲(chóng)作用方式獨(dú)特，是一類具有良好選擇性的新型殺蟲(chóng)劑。由于這類藥劑主要是通過(guò)擾亂昆蟲(chóng)正常生長(zhǎng)發(fā)育而使昆蟲(chóng)致死，一般認(rèn)為昆蟲(chóng)不易對(duì)其產(chǎn)生抗藥性，與傳統(tǒng)殺蟲(chóng)藥劑也不容易產(chǎn)生交互抗性。然而事實(shí)證明，害蟲(chóng)具有克服任何殺蟲(chóng)劑的能力，對(duì)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑也不例外。

蟲(chóng)酰肼(tebufenozide)是昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑中的重要品種之一，其殺蟲(chóng)作用機(jī)理是模擬昆蟲(chóng)蛻皮激素功能，在不該蛻皮時(shí)產(chǎn)生蛻皮反應(yīng)，由于不正常蛻皮而導(dǎo)致幼蟲(chóng)脫水、饑餓而死亡。本試驗(yàn)通過(guò)棉鈴蟲(chóng)(Helicover扣armzgera Htibner)對(duì)蟲(chóng)酰肼的抗藥性汰選，以期了解害蟲(chóng)對(duì)蟲(chóng)酰肼抗藥性的發(fā)生和發(fā)展規(guī)律，為該類藥劑的科學(xué)合理利用提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1．1供試蟲(chóng)源

1998年6月下旬采自河北、河南和山東省6個(gè)縣市的棉鈴蟲(chóng)在室內(nèi)飼養(yǎng)3年供試。

1．2供試藥劑

20％蟲(chóng)酰肼懸浮劑(tebufenozide，米滿，美國(guó)羅門哈斯公司產(chǎn)品)。

1．3汰選方法

將20％蟲(chóng)酰肼懸浮劑用水稀釋至一定濃度，將油菜葉用清水洗凈晾干后，浸入藥液中搖晃10s，取出，自然晾干，放人底部加有消毒濾紙的培養(yǎng)皿中，再將棉鈴蟲(chóng)初孵幼蟲(chóng)(孵化12h以內(nèi)未取食)加入浸過(guò)藥液的油菜葉上，每皿200頭，取食2～3d后，將活蟲(chóng)移人人工飼料中繼續(xù)飼養(yǎng)至下一代再進(jìn)行汰選。汰選過(guò)程中，視抗性發(fā)展情況逐漸提高藥劑濃度，考慮到用該殺蟲(chóng)劑汰選之后存在殺蟲(chóng)作用的后效應(yīng)，因此以汰選后幼蟲(chóng)至化蛹的校正死亡率作為汰選強(qiáng)度的參考指標(biāo)。每代汰選2000～3000頭，分別計(jì)算汰選期內(nèi)幼蟲(chóng)的死亡率、化蛹率及羽化率。棉鈴蟲(chóng)飼養(yǎng)方法參照范賢林等方法。

1．4抗性水平測(cè)定

汰選前用飼料混合法和浸葉法分別測(cè)定蟲(chóng)酰肼對(duì)棉鈴蟲(chóng)種群未汰選時(shí)的毒力，在汰選5—26代期間，每汰選4～5代分別用上述兩種方法進(jìn)行測(cè)定，并同時(shí)測(cè)定同期飼養(yǎng)的未汰選的對(duì)照種群。

1．4．1飼料混合法

將蟲(chóng)酰肼用水稀釋成6個(gè)系列濃度與半固體人工飼料分別均勻混合，加入直徑1．5cm、深1．7 cm的24孔試驗(yàn)盒中，每孔1ml，加蓋后備用。選擇棉鈴蟲(chóng)2齡中期(4日齡)幼蟲(chóng)，接人試驗(yàn)盒中，用不加藥劑的飼料作為空白對(duì)照，每孔1頭，加保險(xiǎn)膜并加盒蓋，用皮筋扎緊。每濃度重復(fù)3—4次，每次測(cè)定幼蟲(chóng)500—600頭。處理后將實(shí)驗(yàn)盒放人溫度(27±1)℃、光照強(qiáng)度為2 000—3 0001x、光周期為L(zhǎng)//D＝14h//10h、相對(duì)濕度80％一90％的恒溫培養(yǎng)箱中，取食72h后，檢查測(cè)定試蟲(chóng)死亡數(shù)。

1．4．2浸葉法

將蟲(chóng)酰肼用水稀釋成6～7個(gè)系列濃度的藥液，將新鮮油菜葉片清洗晾干后，用打孔器打成圓片分別浸入各個(gè)濃度的藥液中，搖晃10s后取出自然晾干，分別加入24孔試驗(yàn)盒中，每孔加入棉鈴蟲(chóng)2齡幼蟲(chóng)1頭，同時(shí)用不浸藥劑的菜葉作為對(duì)照處理。重復(fù)次數(shù)比飼料混合法增加1倍，加保鮮膜并加蓋后，放人培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件同飼料混合法相同，72h后檢查各處理的幼蟲(chóng)死亡數(shù)。

以上兩方法的幼蟲(chóng)死亡判斷標(biāo)準(zhǔn)：用撥針輕觸蟲(chóng)體完全不動(dòng)者為死亡。用幾率值分析法計(jì)算毒力回歸線及LC值，抗性指數(shù)(resistantratio，RR)為汰選后與汰選前LC值的比值，校正抗性指數(shù)為汰選種群與同期測(cè)定的對(duì)照種群IC。值的比值。

2試驗(yàn)結(jié)果

2．1棉鈴蟲(chóng)對(duì)蟲(chóng)酰肼抗藥性汰選及其后期發(fā)育情況

經(jīng)過(guò)預(yù)備試驗(yàn)，確定最初汰選濃度為25ug／mL，汰選時(shí)間為2d。汰選3代后，取食時(shí)間由2d增加為3d。從第4代以后，汰選時(shí)間均為3d，同時(shí)每汰選幾代后就增加汰選濃度，在每代汰選后，幼蟲(chóng)死亡率基本保持在50％～70％的汰選壓下，至26代時(shí)濃度已增加到80ug／mL。表1結(jié)果表明，該種群對(duì)蟲(chóng)酰肼的敏感性在逐漸下降。

經(jīng)蟲(chóng)酰肼汰選，對(duì)棉鈴蟲(chóng)后期發(fā)育的影響主要表現(xiàn)在化蛹率。試驗(yàn)結(jié)果顯示，存活幼蟲(chóng)的化蛹率較低，各代化蛹率僅為20％～50％，而同期飼養(yǎng)的對(duì)照種群的化蛹率為75％～90％，前者明顯低于后者。但對(duì)蛹的羽化率影響較小，基本保持在60％～90％，而且隨著汰選次數(shù)的增加，健康成蟲(chóng)的羽化率從第1代的57．8％到第26代的96．o％，呈現(xiàn)逐漸升高的趨勢(shì)(見(jiàn)表1)。

2．2棉鈴蟲(chóng)汰選種群對(duì)蟲(chóng)酰肼的抗性水平測(cè)定

用浸葉法測(cè)定棉鈴蟲(chóng)汰選種群，在汰選5、10、19、24代后與未汰選時(shí)的測(cè)定結(jié)果比較，抗性指數(shù)分別為2．26、14．06、25．24、27．03倍。與同期測(cè)定的對(duì)照種群測(cè)定結(jié)果比較，校正抗性指數(shù)分別為2．21、4．12、6．55、8．93倍(表2)。

采用飼料混合法的測(cè)定結(jié)果見(jiàn)圖1。對(duì)汰選8、12、16、20代和24代的種群進(jìn)行測(cè)定，LC值由汰選前的74ug／mL，至汰選24代后達(dá)到833ug／mL。后者與前者比較抗性指數(shù)為11．26倍；與同期測(cè)定的對(duì)照種群的LC106Ug／mL比較，校正抗性指數(shù)為7．87倍(圖1)。

以上兩種測(cè)定方法對(duì)棉鈴蟲(chóng)汰選種群的測(cè)定結(jié)果均表明，連續(xù)的選擇壓力，使棉鈴蟲(chóng)對(duì)蟲(chóng)酰肼已產(chǎn)生了一定抗性適應(yīng)，表現(xiàn)出對(duì)蟲(chóng)酰肼的敏感性明顯降低，繼續(xù)選擇將會(huì)使該棉鈴蟲(chóng)種群抗藥性不斷升高。

3結(jié)論與討論

試驗(yàn)表明，用蟲(chóng)酰肼汰選棉鈴蟲(chóng)存在后效應(yīng)，除汰選期間有50％～60％的死亡率外，幼蟲(chóng)的化蛹率也明顯降低，對(duì)于正常蛹的羽化率沒(méi)有較大影響。因此在蟲(chóng)酰肼實(shí)際應(yīng)用中，于棉鈴蟲(chóng)低齡幼蟲(chóng)階段及時(shí)把握防治時(shí)機(jī)，不僅可以大量殺滅害蟲(chóng)，還可利用藥劑的后效應(yīng)減少幼蟲(chóng)的正常化蛹量，從而大幅度降低下代的種群數(shù)量。

本試驗(yàn)針對(duì)蟲(chóng)酰肼主要是胃毒作用的特點(diǎn)，采用兩種方法進(jìn)行抗性水平測(cè)定。其中浸葉法較接近于田間防治方法，有利于反映田間實(shí)際狀況。不利方面是，植物葉片受季節(jié)、生長(zhǎng)部位和新鮮程度等因素影響，對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性有一定影響。而飼料混合法通過(guò)對(duì)各個(gè)環(huán)節(jié)的嚴(yán)格操作。降低了干擾因素的影響，得到的結(jié)果重復(fù)性好。通過(guò)兩種試驗(yàn)方法相互驗(yàn)證均取得相似的結(jié)果，即汰選種群對(duì)蟲(chóng)酰肼已經(jīng)出現(xiàn)敏感性明顯降低趨勢(shì)。

昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑由于其高選擇性特點(diǎn)，可在害蟲(chóng)綜合防治中發(fā)揮重要作用。探索害蟲(chóng)對(duì)其產(chǎn)生抗藥性的速度和如何克服抗性的發(fā)展，是保持其良好使用價(jià)值的重要研究?jī)?nèi)容。本試驗(yàn)結(jié)果初步證明了在不斷的強(qiáng)選擇壓下，棉鈴蟲(chóng)種群的抗性指數(shù)逐漸廠升，顯示棉鈴蟲(chóng)對(duì)蟲(chóng)酰肼表現(xiàn)出有抗藥性發(fā)展趨勢(shì)，作者期望繼續(xù)汰選出抗性水平較高的抗性品系，為進(jìn)一步的研究工作，如生物學(xué)特性、種群遺傳、抗性機(jī)理及治理策略等奠定基礎(chǔ)。