袁　潔　楊學(xué)輝　何海永　金　星

摘要采用生長(zhǎng)速率法測(cè)定了采自貴州省26個(gè)縣(市)不同年份稻瘟病標(biāo)樣175個(gè)稻瘟病菌單孢菌株對(duì)稻瘟靈的抗藥性。結(jié)果表明，貴州省主要稻區(qū)都有抗稻瘟靈菌株出現(xiàn)，但大部分抗性菌株的抗藥性表現(xiàn)為低抗水平。黔東南、貴陽(yáng)、遵義地區(qū)抗性菌株頻率明顯高于其他幾個(gè)地區(qū)，其抗性菌株頻率分別為10．86％、10．29％和8．00％。

關(guān)鍵詞植物保護(hù)學(xué)；稻瘟病菌；稻瘟靈；抗藥性

中圖分類號(hào)紀(jì)80年代中國(guó)引進(jìn)稻瘟靈(富士一號(hào)，isoprothio－lane；)以來(lái)，由于其高效、內(nèi)吸特性使之成為全國(guó)稻區(qū)防治稻瘟病的主要藥劑。但是，經(jīng)過(guò)20多年的廣泛使用，稻瘟病菌田間抗性日益嚴(yán)重。根據(jù)袁潔等的研究，貴州省稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈敏感性已下降。為了明確貴州不同稻區(qū)稻瘟病菌抗藥性菌株的抗性水平和分布情況以及稻瘟靈在生產(chǎn)上繼續(xù)使用前景，從2001年開(kāi)始進(jìn)行貴州省水稻主產(chǎn)區(qū)稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的抗藥性研究。

1材料和方法

1．1供試菌株和藥劑

2001—2004年在貴州省8個(gè)地區(qū)26個(gè)縣(市)100多個(gè)品種上采集穗頸瘟病標(biāo)樣200余份。通過(guò)單孢分離，獲得400多個(gè)單孢菌株，選擇其中175個(gè)有效單孢分離菌進(jìn)行抗藥性測(cè)定，其中包括貴陽(yáng)地區(qū)23株，遵義地區(qū)23株，黔東南州49株，畢節(jié)地區(qū)23株，黔南州14株，黔西南州26株，六盤(pán)水地區(qū)14株，銅仁地區(qū)3株。

40％稻瘟靈乳油(富士一號(hào))，日本農(nóng)藥株式會(huì)社生產(chǎn)，浙江海寧化丁實(shí)業(yè)有限公司分裝。

1．2測(cè)定方法

將供試藥劑配成一定濃度的稀釋液，各取1mL藥液至直徑9 cm的培養(yǎng)皿中，再加入9mL酵母淀粉培養(yǎng)基，混勻后制成遞度為4、5、6．67、10、20、40ug／mL。的含藥平板。

將預(yù)培養(yǎng)7d的稻瘟病菌菌落制成直徑為5mm的菌碟，挑取菌碟置于含藥平板中央，28℃恒溫培養(yǎng)，以不含藥平板為空白對(duì)照，8d后測(cè)量各處理的菌落直徑，計(jì)算藥劑對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制百分率。

1．3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

通過(guò)各處理濃度的對(duì)數(shù)(x)和菌絲生長(zhǎng)抑制率的幾率值(y)進(jìn)行回歸分析，計(jì)算出稻瘟靈對(duì)各參試菌株的抑制中濃度EC,o值，根據(jù)病菌的敏感性頻率分布建立稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的敏感基線，確定抗性水平和抗性菌株頻率。

抗性水平＝供試菌株ECso／敏感基線?？剐运健?為敏感菌株；1<抗性水平≤3為低抗菌株；3<抗性水平≤lo為中抗菌株；抗性水平>10為高抗菌株。根據(jù)抗性水平將參試菌株劃分為敏感性菌株和抗性菌株。再根據(jù)抗性菌株在群體中的出現(xiàn)頻率計(jì)算出抗性菌株頻率?？剐跃觐l率＝抗性菌株／供試菌株X100％。

2結(jié)果與分析

2．1不同地區(qū)稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的敏感性

從表l知，不同地區(qū)的稻瘟病菌群體對(duì)稻瘟靈的敏感性有一定差異，其中遵義地區(qū)菌株的敏感性最差，平均EC為9．27ug／mL，其次是貴陽(yáng)地區(qū)(8．39"8／mI。)、六盤(pán)水地區(qū)(7．32ug／mL)、黔東南州(EC＝6．85 ug／mL)、黔南州(EC＝6．66ug／mL)、黔西南州(EC＝6．23ug／mL)、畢節(jié)地區(qū)(ECso＝6．02 PZ／mL)、銅仁地區(qū)(EC＝4．47ug／mL)。

2．2敏感基線的建立

采用生長(zhǎng)速率法測(cè)得2001—2003年的146株稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的敏感性呈連續(xù)性分布(圖1)，EC值最小為1．33ug／mL最大為24．58ug／mL，相差18．48倍。不同敏感性的頻率分布呈不規(guī)則的正態(tài)分布(圖2)，說(shuō)明其中一部分菌株已表現(xiàn)抗藥性。求得左側(cè)正態(tài)分布峰的平均EC＝6．8027--5．7947ug／mL(P＝0．05)，根據(jù)野生敏感型病原群體對(duì)藥劑敏感性為正態(tài)分布的原理，本研究將6．8027ug／mI。定為稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的敏感基線。

2．2抗藥性測(cè)定及抗性評(píng)價(jià)

利用本研究建立的敏感基線對(duì)2001—2004年貴州省不同地區(qū)的175個(gè)稻瘟病菌株進(jìn)行抗藥性測(cè)定，結(jié)果表明(表2)，8個(gè)地區(qū)從田間均分離到了抗性菌株，抗性菌株頻率分別為黔東南lo．86％、貴陽(yáng)10．29％、遵義8．00％、畢節(jié)5．7l％、黔西南5．14％、黔南4．57％、六盤(pán)水3．43％和銅仁o．57％。大部分菌株的抗性水平集中在l一3倍，個(gè)別菌株抗性水平達(dá)到3倍以上。從表2看出，最高抗性水平和抗性菌株頻率出現(xiàn)較高的地區(qū)主要在黔東南、貴陽(yáng)和遵義，最高抗性水

平分別為：遵義3．61、黔東南2．87和貴陽(yáng)2．13；抗性菌株頻率分別為：遵義8．co％、黔東南10．S6％、貴陽(yáng)10．29％。這一結(jié)果與貴州省稻瘟病的發(fā)生和防治基本吻合，因?yàn)檫@3個(gè)地區(qū)的水稻生產(chǎn)和病害防治水平都相對(duì)較高。

3討論

彭云良等測(cè)定稻瘟病菌對(duì)稻瘟靈的抗性是以15ug／mL濃度下病菌生長(zhǎng)抑制率小于或大于57．26％來(lái)確定抗性或敏感菌株的。本研究表明，146個(gè)菌株中對(duì)稻瘟靈最敏感菌株的EC僅為1．33ug／mL而且4ug／mL濃度下對(duì)稻瘟病菌的生長(zhǎng)抑制率達(dá)到75％以上。146個(gè)菌株對(duì)稻瘟靈的敏感性分布呈連續(xù)性，病菌群體敏感性頻率分布呈、祁之秋等‘建立病原菌對(duì)正態(tài)分布，平均EC。為(6．802 7i5.794 7)ug／mL(P＝0．05)。參考周明國(guó)殺菌劑敏感性墓線的方法和原理，將6．8027ug／mL定為敏感基線，比較符合貴州省田間稻瘟病菌群體對(duì)稻瘟靈的實(shí)際抗性水平，該基線的建立可作為今后田間抗藥性監(jiān)測(cè)的依據(jù)。

利用本研究制定的敏感基線對(duì)貴州省主要稻區(qū)175個(gè)稻瘟病菌株的抗藥性測(cè)定結(jié)果表明，貴州省8個(gè)地區(qū)都有抗稻瘟靈菌株出現(xiàn)，但其抗性水平主要集中在低抗水平。因此，只要加強(qiáng)田間抗藥性監(jiān)測(cè)，注意與其他農(nóng)藥的交替和輪換使用，稻瘟靈在貴州稻區(qū)仍可作為防治稻瘟病的有效藥劑使用。