段朝軍 關(guān)勇軍 何春梅 李 峰 肖志強(qiáng) 陳主初
摘要:為了探討DNP致癌的分子機(jī)理,鑒定出化學(xué)致癌物二亞硝基哌嗪(DNP)致人胚鼻咽上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)的基因及其活化方式。采用DNA共轉(zhuǎn)染、裸鼠致瘤性試驗(yàn)、Southern雜交、PCR測序和序列同源性比較分析等,對DNP轉(zhuǎn)化的人胚鼻咽上上皮細(xì)胞株HENE-DNP進(jìn)行研究。經(jīng)過兩輪DNA共轉(zhuǎn)染和裸鼠致瘤性實(shí)驗(yàn),Southern雜交表明,裸鼠腫瘤DNA中均含有人特異性高度重復(fù)序列Alu。用人Ha-ras、Ki-ras及N-ras癌基因特異性引物對裸鼠腫瘤DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,僅能擴(kuò)增出人Ha-ras基因相應(yīng)的片段。Southern雜交進(jìn)一步證實(shí),裸鼠腫瘤DNA中存在與人Ha-ras基因片段大小一致的雜效帶。RT-PCR產(chǎn)物測序,并將測序結(jié)果與GenBank進(jìn)行序列同源性比較分析,發(fā)現(xiàn)裸鼠腫瘤中人Ha-ras基因cDNA第26位密碼子第2位堿基發(fā)生了T→C的轉(zhuǎn)換,編碼的氨基酸由亮氨酸相應(yīng)地變換成絲氨酸。化學(xué)致癌物DNP致人胚鼻咽上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化相關(guān)的基因是Ha-ras,原癌基因c-Ha-ras激活可能是DNP轉(zhuǎn)化人胚鼻咽上皮細(xì)胞的分子機(jī)制之一。
關(guān)鍵詞:二亞硝基哌嗪;共轉(zhuǎn)染;轉(zhuǎn)化基因或癌基因
中圖分類號:R392
文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A
文章編號:1007-7847(2005)01-0084-06