林宏遠(yuǎn)，鄧湘琴，崔超宇，譚駿嵐，龍夢(mèng)玲，宋程，梁慧

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208； 2.湖南省腫瘤醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410013

結(jié)直腸癌的發(fā)病呈上升趨勢(shì)，我國(guó)結(jié)直腸癌發(fā)病率在常見(jiàn)惡性腫瘤中為第4位，死亡率為第5位[1]。近年研究表明，結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展與免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子等免疫介質(zhì)的紊亂密切相關(guān)[2]。在結(jié)直腸癌腫瘤組織中浸潤(rùn)了大量的免疫細(xì)胞，包括自然殺傷細(xì)胞(natural killer cell，NK)、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(regulatory cells，Treg)等，同時(shí)分泌大量的免疫促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞因子和免疫抑制相關(guān)細(xì)胞因子參與結(jié)直腸癌免疫微環(huán)境的調(diào)控。在結(jié)直腸癌腫瘤免疫微環(huán)境中，NK細(xì)胞及免疫促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-2(interleukin-2，IL-2)、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor alpha，TNF-α)有利于維持正常的免疫功能，發(fā)揮抗腫瘤免疫作用，拮抗結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展。Treg細(xì)胞及免疫抑制相關(guān)細(xì)胞因子 IL-10、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(transforming growth factors-β，TGF-β)則引發(fā)免疫逃逸，抑制抗腫瘤免疫作用，促進(jìn)了大腸癌的發(fā)生發(fā)展[3]。前期臨床研究證實(shí)，腸復(fù)方治療晚期大腸癌有效，可提高患者瘤體控制率，延長(zhǎng)無(wú)疾病進(jìn)展時(shí)間，提高遠(yuǎn)期生存獲益[4]，提高晚期大腸癌患者外周血中NK細(xì)胞數(shù)量和CD4/CD8比值，改善患者的細(xì)胞免疫功能[5]。前期研究提示，在荷瘤小鼠瘤體和外周血中，腸復(fù)方對(duì)髓源抑制性細(xì)胞(myeloid-derived suppressor cells，MDSCs)有明顯的抑制作用，增加瘤體中CD4+、CD8+T細(xì)胞的水平，從而提高機(jī)體免疫狀態(tài)、抑制腫瘤發(fā)生[6]?；诖?，為進(jìn)一步探討腸復(fù)方的組方規(guī)律，本研究擬探索其不同治則發(fā)揮抗腫瘤作用及對(duì)腫瘤組織免疫微環(huán)境的影響。

1 材料

1.1 細(xì)胞及動(dòng)物小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞株CT26，購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)，編號(hào)ZQ0190。BALB/c小鼠，4～6周齡，50只(實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)：4300470059729；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用編號(hào)：00190458)，購(gòu)自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(湘) 2016-0002。在湖南省腫瘤醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心SPF條件下飼養(yǎng)，予以自由飲食。本研究獲得中南大學(xué)湘雅醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，倫理批號(hào)：2019-18。

1.2 藥物及試劑香菇菌多糖片(湖北廣仁藥業(yè)有限公司，規(guī)格：10 mg/片，批號(hào)：1903010)；腸復(fù)方(黨參10 g，黃芪30 g，白術(shù)15 g，陳皮10 g，麥芽 15 g，雞內(nèi)金15 g，薏苡仁30 g，香附15 g，郁金15 g，莪術(shù)15 g，土鱉蟲(chóng)15 g，半枝蓮30 g，蛇舌草30 g，壁虎10 g，茯苓10 g，女貞子10 g，甘草5 g)、健脾益氣扶正(黨參10 g，白術(shù)15 g，茯苓10 g，黃芪30 g，女貞子10 g，雞內(nèi)金15 g，麥芽15 g，甘草5 g)、祛濕化瘀解毒(陳皮10 g，薏苡仁30 g，香附15 g，郁金 15 g，莪術(shù)15 g，半枝蓮30 g，蛇舌草30 g，土鱉蟲(chóng) 15 g，壁虎10 g)(以上中藥均購(gòu)自湖南省腫瘤醫(yī)院中藥房)。RPMI 1640培養(yǎng)基(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：RNBH5043)；胰蛋白酶(上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：C0201)；胎牛血清(美國(guó)Gibco公司，批號(hào)：10099-141)；青霉素鏈霉素混合液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：SV30010)；MTT試劑(美國(guó)Sigma公司，批號(hào)：M2128)；IL-10抗體(美國(guó)Proteintech公司，批號(hào)：20850-1-AP)；TNF-α抗體(美國(guó)Proteintech公司，批號(hào)：60291-1-Ig)；IL-2 抗體(美國(guó)Proteintech公司，批號(hào)：26156-1-AP)；Foxp3抗體(英國(guó)Abcam公司，批號(hào)：ab215206)；TGF-β抗體(英國(guó)Abcam公司，批號(hào)：ab215715)；NK1.1抗體(美國(guó)eBioscience公司，批號(hào)：11-594-81)；40 ng·L-1多聚甲醛(上海碧云天生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：P0099)；二步法試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：PV-9000)；DAB試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，批號(hào)：ZLI-9018)。

1.3 儀器超凈工作臺(tái)(北京亞泰隆，型號(hào)：YT-CJ-2NB)；二氧化碳培養(yǎng)箱(上海三藤儀器，型號(hào)：DH-160I)；倒置生物顯微鏡(北京中顯恒業(yè)儀器，型號(hào)：DSZ2000X)；流式細(xì)胞分析儀(Beckman公司)；搖床(中國(guó)江蘇其林貝爾，型號(hào)：TS-92)；包埋機(jī)(常州中威電子儀器，型號(hào)：BMJ-A)；切片機(jī)(浙江金華益迪試驗(yàn)器材，型號(hào)：YD-315)；蓋玻片、載玻片(海門遠(yuǎn)泰公司，型號(hào)：DY89-1，AY89-2)；臺(tái)式冷凍離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司，型號(hào)：TGL-18R)。

2 方法

2.1 藥物制備將購(gòu)買的中藥經(jīng)湖南省腫瘤醫(yī)院藥劑科鄒霞藥師鑒定后使用。溫水浸泡1 h，水量超出藥物3～5 cm，大火煮沸后轉(zhuǎn)小火煎30 min，趁熱過(guò)濾，藥渣按前法再煎煮2次，將3次藥液混勻、過(guò)濾，恒溫水浴箱上濃縮為扶正祛邪組濃度為3.6 g·mL-1、扶正組濃度為1.4 g·mL-1、祛邪組濃度為2.2 g·mL-1，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 建模、動(dòng)物分組及給藥方法常規(guī)復(fù)蘇CT26細(xì)胞，將細(xì)胞培養(yǎng)含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)液中；置于37 ℃、5%CO2培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)并傳代。用0.25%胰蛋白酶消化收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞，使用PBS液配制成細(xì)胞密度為 1×107mL-1的單細(xì)胞懸液。取細(xì)胞濃度為1×107mL-1的CT26細(xì)胞懸液0.1 mL，即接種細(xì)胞數(shù)為1×106mL-1，分別注射到BALB/c小鼠的右腋下，建立小鼠結(jié)腸癌皮下移植瘤模型。按隨機(jī)數(shù)字表法將造模成功的50只小鼠隨機(jī)分模型組、扶正祛邪組、扶正組、祛邪組和香菇多糖組，每組10只。于造模后第7天皮下種植瘤生長(zhǎng)至1 cm左右時(shí)開(kāi)始干預(yù)，按 70 kg 人腸復(fù)方使用劑量給予小鼠相應(yīng)等效劑量，扶正祛邪組按照每日使用劑量為36 g·kg-1灌胃給藥，扶正組每日使用劑量為14 g·kg-1、祛邪組每日使用劑量為22 g·kg-1，小鼠香菇菌多糖片使用劑量為 5.2 mg·kg-1，模型組給予蒸餾水。以上藥液每次灌胃0.2 mL，每天灌胃1次，每周5 d，連續(xù)干預(yù)4周。

2.3 對(duì)荷瘤小鼠的體質(zhì)量及抑瘤率的影響常規(guī)每周測(cè)定各組小鼠體質(zhì)量。干預(yù)結(jié)束后頸椎脫臼法處死小鼠，剝離腫瘤，稱重記錄，并計(jì)算各組藥物的抑瘤率。

抑瘤率(%)=(1-實(shí)驗(yàn)組平均瘤質(zhì)量/模型組平均瘤質(zhì)量)×100%

2.4 流式檢測(cè)小鼠瘤體中NK細(xì)胞水平每組隨機(jī)選取5只小鼠，剝離瘤體組織，采用無(wú)菌眼科剪將瘤體組織剪碎，移液槍吹散，將含組織的懸液過(guò)200目細(xì)胞濾網(wǎng)，300 r·min-1離心 5 min得到沉淀，棄上清，PBS重懸收集細(xì)胞沉淀。每個(gè)瘤體細(xì)胞懸液樣本吸取1×106個(gè)細(xì)胞，加入500 μL的Binding Buffer懸浮細(xì)胞，加入的NK1.1流式抗體染色，避光孵育30 min，300 r·min-1離心5 min，棄上清后用PBS清洗2次，用1%多聚甲醛定容至300 μL，過(guò)350目濾網(wǎng)。4 ℃避光保存，流式上機(jī)檢測(cè)。

2.5 免疫組化檢測(cè)小鼠瘤體Treg、IL-10、TGF-β、IL-2、TNF-α的表達(dá)每組隨機(jī)選取5只小鼠，脫頸處死小鼠、剝離瘤體，石蠟固定包埋瘤體，間隔5 μm進(jìn)行石蠟連續(xù)切片20張，每隔5張取一張表，插入固定，BSA封閉，分別滴加Treg、IL-10、TGF-β、IL-2、TNF-α抗體，4 ℃過(guò)夜，孵育二抗。DAB顯色，脫水，透明，封片，顯微鏡下陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞核，為棕黃褐色。顯微鏡下每張切片選擇3個(gè)視野，放大400倍下觀察視野中陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)個(gè)數(shù)，取多個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。免疫組化染色圖像結(jié)果使用IPP(Image-Pro Plus 6.0)軟件進(jìn)行分析。測(cè)量集成光密度及面積，用平均光密度評(píng)價(jià)Treg、IL-10、TGF-β、IL-2、TNF-α的表達(dá)水平。

平均光密度(IOD)=集成光密度/面積

3 結(jié)果

3.1 對(duì)腸癌荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響與模型組同期比較，治療第28天扶正祛邪組、扶正組、香菇多糖組小鼠體質(zhì)量顯著升高(P<0.01，P<0.05)，而祛邪組小鼠體質(zhì)量顯著降低(P<0.01)。與治療第0天比較，各組在治療后第28天，小鼠體質(zhì)量均有不同程度地降低，其中模型組、祛邪組降低最為顯著(P<0.01)，香菇多糖組小鼠體質(zhì)量亦有降低(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 不同治則對(duì)腸癌荷瘤小鼠體質(zhì)量的影響

3.2 對(duì)腸癌荷瘤小鼠抑瘤率的影響與模型組比較，扶正組、香菇多糖組小鼠瘤質(zhì)量顯著減輕(P<0.05)，抑瘤率顯著升高，扶正祛邪組、祛邪組小鼠瘤質(zhì)量極顯著減輕(P<0.01)，抑瘤率極顯著升高。見(jiàn)表2。

表2 不同治則對(duì)腸癌荷瘤小鼠抑瘤率的影響

3.3 對(duì)腸癌荷瘤小鼠瘤體中NK細(xì)胞含量的影響通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，與模型組比較，扶正祛邪組、扶正組、祛邪組瘤體中NK細(xì)胞的水平顯著升高(P<0.01)，香菇多糖組雖低于模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)圖1。

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組；與模型組比較，**P<0.01

3.4 對(duì)腸癌荷瘤小鼠瘤體Treg、IL-10、TGF-β的影響與模型組比較，扶正組、香菇多糖組小鼠瘤體中Treg、IL-10、TGF-β的水平顯著降低(P<0.05)，扶正祛邪組和祛邪組極顯著降低(P<0.01)；與香菇多糖組比較，扶正組小鼠瘤體中Treg、IL-10、TGF-β的水平均明顯降低(P<0.05)，扶正祛邪組和祛邪組顯著降低(P<0.01)；與扶正祛邪組比較，扶正組與祛邪組小鼠瘤體中Treg、IL-10、TGF-β的水平均顯著升高(P<0.01，P<0.05)。見(jiàn)圖2、圖3、圖4及表3。

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組

表3 不同治則對(duì)荷瘤小鼠瘤體Treg、IL-10、TGF-β表達(dá)的影響 值)

3.5 對(duì)腸癌荷瘤小鼠瘤體IL-2、TNF-α表達(dá)的影響與模型組比較，祛邪組、香菇多糖組小鼠瘤體中IL-2、TNF-α表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，扶正祛邪組、扶正組極顯著升高(P<0.01)；與香菇多糖組比較，祛邪組小鼠瘤體中 IL-2、TNF-α表達(dá)水平顯著升高(P<0.05)，扶正祛邪組、扶正組極顯著升高(P<0.01)；與扶正祛邪組比較，扶正組小鼠瘤體中 IL-2、TNF-α表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)，祛邪組極顯著降低(P<0.01)。見(jiàn)圖5、圖6及表4。

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組

注：A：模型組；B：扶正祛邪組；C：扶正組；D：祛邪組；E：香菇多糖組

表4 不同治則對(duì)荷瘤小鼠瘤體IL-2、TNF-α表達(dá)的影響

4 討論

近年來(lái)，隨著民眾飲食結(jié)構(gòu)的變化與癌癥篩查技術(shù)的進(jìn)步，結(jié)直腸癌發(fā)病率呈逐步上升趨勢(shì)[7]。越來(lái)越多的證據(jù)表明，結(jié)直腸癌患者存在免疫抑制現(xiàn)象，現(xiàn)免疫治療成為繼手術(shù)、放療、化療后第四大治療方式。多項(xiàng)研究證實(shí)，中醫(yī)藥以其多靶點(diǎn)、增效減毒等優(yōu)勢(shì)，在改善結(jié)直腸癌患者免疫功能方面取得了顯著的療效[8]。中醫(yī)并無(wú)“腸癌”這一病名，根據(jù)其臨床癥狀和體征，歸屬于“腸結(jié)”“癥瘕”等范疇，是多種病因共同作用下的結(jié)果。其發(fā)病為本虛標(biāo)實(shí)，脾氣虧虛是大腸癌發(fā)病內(nèi)在基礎(chǔ)，濕熱瘀毒為其發(fā)病重要條件，治療應(yīng)以“抗癌解毒、扶正祛邪”為基本原則[9]。腸復(fù)方以“健脾益氣扶正、祛濕化瘀解毒”立法，在既往臨床應(yīng)用和實(shí)驗(yàn)研究中均證實(shí)腸復(fù)方對(duì)于結(jié)直腸癌的治療療效顯著。本研究進(jìn)一步觀察不同組分對(duì)腫瘤生長(zhǎng)、瘤體免疫細(xì)胞及免疫相關(guān)細(xì)胞因子的調(diào)控作用，分析不同治則在腸癌治療中所發(fā)揮的作用，進(jìn)一步明確腸復(fù)方不同治則在免疫調(diào)控中的作用及其療效機(jī)制，為臨床配伍提供科學(xué)依據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)腸復(fù)方健脾益氣扶正法偏重于穩(wěn)定小鼠體質(zhì)量，但對(duì)腸癌瘤體的抑制作用不明顯。祛濕化瘀解毒法偏重于抑制瘤體生長(zhǎng)，但并不能穩(wěn)定小鼠的體質(zhì)量，反而使體質(zhì)量下降。而健脾益氣扶正法和祛濕化瘀解毒法在穩(wěn)定瘤體質(zhì)量、控制瘤體生長(zhǎng)方面均有明顯優(yōu)勢(shì)。究其原因，脾胃為后天之本，氣血生化之源，脾胃之氣健，則飲食攝納正常，氣血生化有源，推測(cè)健脾益氣扶正治法發(fā)揮了主要作用。研究證實(shí)，益氣健脾類中藥可有效改善大腸癌術(shù)后患者的免疫功能及胃腸功能，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力，調(diào)節(jié)胃腸動(dòng)力，進(jìn)一步穩(wěn)定體質(zhì)量[10]。而活血化瘀中藥可通過(guò)抑制腫瘤血管生成、抑制腫瘤細(xì)胞增殖、提高機(jī)體免疫力等直接抗腫瘤[11]，但化瘀解毒中藥寒涼、辛散，久用易損傷脾胃、耗散氣血，傷及正氣[12]，故祛濕化瘀解毒法的小鼠體質(zhì)量下降明顯，但其抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用較優(yōu)。扶正祛邪組荷瘤小鼠不但體質(zhì)量穩(wěn)定，而且抑瘤率高，全方配伍既能發(fā)揮抑瘤抗癌作用，又能發(fā)揮減輕化瘀解毒藥物傷正的副反應(yīng)，發(fā)揮最大的治療效應(yīng)。

結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤免疫微環(huán)境密切相關(guān)，腫瘤微環(huán)境是指腫瘤局部浸潤(rùn)的免疫細(xì)胞、間質(zhì)細(xì)胞及所分泌的活性介質(zhì)等與腫瘤細(xì)胞共同構(gòu)成的局部?jī)?nèi)環(huán)境[13]。研究顯示，腫瘤微環(huán)境中的免疫細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子具有多種協(xié)助腫瘤發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)行為，包括參與腫瘤局部血管生成、協(xié)助腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移及免疫逃逸等[14-18]。以Treg細(xì)胞及IL-10、IL-6、TGF-β等細(xì)胞因子促進(jìn)了大腸癌的發(fā)生發(fā)展。Treg細(xì)胞是一類抑制免疫應(yīng)答的Th細(xì)胞亞群，腫瘤細(xì)胞可利用Treg細(xì)胞實(shí)現(xiàn)免疫逃逸[19-20]。IL-10和TGF-β可誘導(dǎo)Treg分化，Treg細(xì)胞亦可通過(guò)釋放IL-10、TGF-β等免疫抑制相關(guān)細(xì)胞因子參與腫瘤細(xì)胞的免疫耐受和免疫抑制。TGF-β是NK細(xì)胞抗腫瘤應(yīng)答的主要抑制因子之一，在多種腫瘤患者的瘤體中發(fā)現(xiàn)TGF-β的含量較正常人體高[21]。另一方面，在結(jié)直腸癌免疫微環(huán)境中，T細(xì)胞、NK細(xì)胞等細(xì)胞及其分泌的細(xì)胞因子如IL-2、IFN-γ、TNF-α發(fā)揮抗腫瘤免疫作用，拮抗結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展。NK細(xì)胞作為機(jī)體固有免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞，其殺傷活性無(wú)MHC限制，不依賴抗體，在腫瘤微環(huán)境中表達(dá)增高[22-23]。NK細(xì)胞可以調(diào)節(jié)核轉(zhuǎn)錄因子的活性，從而影響細(xì)胞因子的基因表達(dá)，抑制IL-2、TNF-α基因轉(zhuǎn)錄，從而調(diào)節(jié)免疫功能[24]。IL-2可促進(jìn)T細(xì)胞增殖，刺激NK細(xì)胞生長(zhǎng)，并增強(qiáng)其殺瘤活性，TNF-α不僅對(duì)多種腫瘤細(xì)胞在體外具有細(xì)胞毒作用，可通過(guò)對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用來(lái)發(fā)揮抗腫瘤作用。中醫(yī)藥對(duì)于腫瘤免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)具有重要意義。研究發(fā)現(xiàn)，玉屏風(fēng)散增強(qiáng)lewis肺癌小鼠中腫瘤浸潤(rùn)的NK細(xì)胞，降低腫瘤微環(huán)境中NK免疫抑制相關(guān)細(xì)胞因子 TGF-β及 IL-10，進(jìn)而增強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤的殺傷活性[25]。同時(shí)免疫細(xì)胞分泌大量的細(xì)胞因子如IL-2、TNF-α、IL-10、TGF-β等參與結(jié)直腸癌免疫微環(huán)境的調(diào)控[26]。許榮忠等[27]發(fā)現(xiàn)祛邪治則和扶正祛邪治則均可調(diào)控肺癌患者的免疫功能，而祛邪治則在抑制MDSCs和Treg方面作用更強(qiáng)。研究發(fā)現(xiàn)，肝癌全方及其不同治法拆方通過(guò)改變細(xì)胞增殖和周期，從而發(fā)揮抑制肝癌的作用[28]。健脾消癌方含藥血清能抑制HCT116細(xì)胞遷移及侵襲，以健脾益氣為治則的健脾消癌方可能通過(guò)抑制Akt/mTOR信號(hào)通路的激活，從而抑制細(xì)胞增殖、侵襲遷移，發(fā)揮抗結(jié)腸癌及抗復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移作用[29]。本研究結(jié)果推測(cè)，腸復(fù)方不同組分可能通過(guò)上調(diào)NK細(xì)胞及IL-2、TNF-α，下調(diào)Treg及 IL-10、TGF-β的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)免疫調(diào)節(jié)，從而抑制瘤體生長(zhǎng)。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)，扶正祛邪組、扶正組小鼠瘤體中NK細(xì)胞及IL-2、TNF-α的表達(dá)水平顯著增加。腸復(fù)方扶正祛邪組以及祛邪組小鼠瘤體中Treg及IL-10、TGF-β的表達(dá)水平顯著降低。在控制瘤體、抑制腫瘤生長(zhǎng)及瘤體免疫細(xì)胞因子正向及負(fù)向調(diào)控方面，健脾益氣扶正加祛濕化瘀解毒組均有明顯優(yōu)勢(shì)，推測(cè)健脾益氣扶正加祛濕化瘀解毒法降低免疫抑制作用主要來(lái)源于其祛濕化瘀解毒法組分，而增強(qiáng)免疫促進(jìn)作用主要來(lái)源于其中健脾益氣扶正法組分。對(duì)免疫功能的調(diào)節(jié)得益于健脾益氣扶正法、祛濕化瘀解毒法的共同作用，不同治則協(xié)同作用，從而提高機(jī)體免疫、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。