趙君楠，車 麗，趙 毅，馬勤清

(1.中鹽工程技術(shù)研究院有限公司，天津 300450；2.天津長(zhǎng)蘆海晶集團(tuán)有限公司，天津 300450)

1 前言

海藻營(yíng)養(yǎng)豐富，其含有的色素、脂肪酸、多糖、酚、氨基酸、碘化物等活性物質(zhì)具有抗氧化、抗菌、免疫調(diào)節(jié)等多種生物學(xué)功能，因而國(guó)內(nèi)海藻產(chǎn)業(yè)逐年擴(kuò)大[1-3]。而將藻類濃縮汁添加進(jìn)食用鹽，既增加了食用鹽鮮味口感，又獲得了氨基酸的補(bǔ)充，同時(shí)存在易于消化吸收的有機(jī)碘，在國(guó)內(nèi)受眾多消費(fèi)者追捧[4]。

海藻加碘鹽中氨基酸含量是急需明確的指標(biāo)，其檢測(cè)方法研究更是迫在眉睫，與食品中氨基酸檢測(cè)不同的是，高濃度食用鹽作為一種基質(zhì)會(huì)影響檢測(cè)色譜柱，低濃度海藻加碘鹽樣品又會(huì)影響檢測(cè)準(zhǔn)確性。文章選取最佳檢測(cè)處理上樣濃度，進(jìn)行方法的檢出限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度評(píng)估，為廣大生產(chǎn)商及消費(fèi)者提供可靠檢測(cè)方法及數(shù)據(jù)支撐。

2 試驗(yàn)方法

2.1 儀器與試劑

(HITACHI)日立全自動(dòng)氨基酸分析儀L-8900，氮吹儀，電子天平，烘箱，冰箱等；MC緩沖溶液pH試劑盒，茚三酮顯色液，5%磺基水楊酸，6 mol/L鹽酸(優(yōu)級(jí)純)，0.02 mol/L鹽酸(優(yōu)級(jí)純)，混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)等。實(shí)驗(yàn)用水為娃哈哈純凈水。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

取混合氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)1 mL定容至25 mL容量瓶，即為2 nmol/20 μL。

2.3 方法

稱取樣品5 g，稱準(zhǔn)至0.000 1 g，加6 mol/L的鹽酸10 mL，冷凍15 min以趕氣，充氮后于烘箱中110 ℃酸水解22 h，冷卻定容至25 mL，取0.5 mL溶液氮吹至近干，加1.0 mL 0.02 mol/L鹽酸后過(guò)濾待測(cè)。

3 結(jié)果與分析

3.1 食用鹽濃度評(píng)估

采用以下食用鹽濃度進(jìn)行試驗(yàn)，其藻類濃縮汁添加后，氨基酸總量為65 mg/kg，根據(jù)圖1的數(shù)據(jù)可知，0.02 g食用鹽稱樣量?jī)x器未出峰，而0.1 g、0.5 g、1 g、2 g四種稱樣量下氨基酸總量的結(jié)果偏差較大，3 g、5 g、6 g稱樣量時(shí)結(jié)果可接受，回收率在99.1%～102.5%，但同時(shí)考慮到食鹽溶解度、鹽酸對(duì)氯化鈉的同離子效應(yīng)及儀器色譜柱耐受度，確定食用鹽稱樣量為5 g。

圖1 食用鹽稱樣量評(píng)估試驗(yàn)Fig.1 Evaluation test on sample weight of edible salt

3.2 方法檢出限及定量限評(píng)估

采用目視評(píng)價(jià)法評(píng)估檢出限。以優(yōu)級(jí)純氯化鈉做基質(zhì)，模擬食用鹽稱樣量的條件，分別加標(biāo)準(zhǔn)溶液如表1。各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)分子量見(jiàn)表2。實(shí)驗(yàn)所得檢出限及定量限見(jiàn)表3 。

表1 添加不同濃度標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)Tab.1 Adding reference materials of different concentrations

表2 各氨基酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的摩爾質(zhì)量Tab.2 The molar mass of each amino acid reference material

表3 方法中各氨基酸檢出限和定量限Tab.3 The detection limit and quantitative limit of each amino acid in the method

3.3 方法精密度評(píng)估

選擇兩個(gè)濃度，對(duì)每個(gè)濃度的樣品分別測(cè)定7次，做重復(fù)性評(píng)估，測(cè)試結(jié)果變異系數(shù)(CV值)見(jiàn)表4。結(jié)果符合GB/T 27417-2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》要求。

表4 方法精密度評(píng)估測(cè)試結(jié)果變異系數(shù)(CV值)Tab.4 Method precision was used to evaluate the coefficient of variation of test result

3.4 方法正確度評(píng)估

在已知空白樣品基礎(chǔ)上加標(biāo)準(zhǔn)溶液，氨基酸總量的回收率見(jiàn)表5，結(jié)果符合GB/T 27417-2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》要求。

表5 方法正確度評(píng)估氨基酸總量回收率Tab.5 The accuracy of the method was used to evaluate the recovery rate of total amino acid

3.5 樣品檢測(cè)

采用三種海藻加碘鹽進(jìn)行檢測(cè)，三種鹽信息如表6。檢測(cè)結(jié)果如表7，在實(shí)際海藻加碘鹽的氨基酸總量檢測(cè)時(shí)，門冬氨酸和谷氨酸為主要氨基酸，檢測(cè)結(jié)果同時(shí)能夠滿足GB 5009.124-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中氨基酸的測(cè)定》對(duì)精密度的要求，即“在重復(fù)性條件下，獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過(guò)算數(shù)平均值的12%”。

表6 樣品明細(xì)Tab.6 Sample detail

表7 樣品檢測(cè)結(jié)果Tab.7 Sample test results

續(xù)表7 (Continue)

4 結(jié)論

通過(guò)該方法驗(yàn)證，進(jìn)行了16種氨基酸檢測(cè)的檢出限、定量限、精密度、準(zhǔn)確度評(píng)估，均可滿足國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)要求，同時(shí)做的海藻加碘鹽樣品結(jié)果也可滿足相關(guān)國(guó)標(biāo)要求，為廣大消費(fèi)者進(jìn)行數(shù)據(jù)理論支持。