陳海城,謝平霖△,方炳雄,余彩瑤,莊蓓麗

廣東省揭陽市普寧市人民醫(yī)院:1.精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)中心;2.檢驗(yàn)科,廣東揭陽 515300

泌尿生殖道支原體(以下簡稱支原體)和高危型人乳頭瘤病毒(HR-HPV)是引起女性泌尿生殖道感染的兩種常見的性傳播疾病病原體[1]。支原體在泌尿生殖道感染中常以解脲支原體(Uu)和人型支原體(Mh)為主[2],其不僅常引起非淋菌性陰道炎,還可導(dǎo)致不孕不育等[3],其耐藥菌株的增加也給臨床治療增加了困難[4]。而HR-HPV感染不僅僅是宮頸癌的主要危險(xiǎn)因素之一,還會影響女性陰道微生態(tài)的穩(wěn)態(tài)[5]。為了探討HR-HPV感染與支原體感染及其耐藥率的關(guān)系,以期為臨床對HR-HPV感染、支原體感染的診療提供一定的參考,本研究對2021年5月至2022年12月來本院就診且同時進(jìn)行支原體檢測、支原體藥敏試驗(yàn)和HR-HPV檢測患者的檢測結(jié)果進(jìn)行回顧性分析,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2021年5月至2022年12月在本院就診且同時進(jìn)行HR-HPV檢測、支原體檢測和支原體藥敏試驗(yàn)的疑似泌尿生殖道感染女性患者共9 662例作為研究對象,患者平均年齡為(37.2±11.2)歲。所有患者在標(biāo)本采集前1周內(nèi)未全身或局部使用抗菌藥物。

1.2儀器與試劑 支原體檢測和藥敏試驗(yàn)所采用的支原體鑒定、支原體藥敏試驗(yàn)的試劑盒由珠海市麗拓生物科技股份有限公司生產(chǎn);HR-HPV檢測則使用產(chǎn)自潮州凱普生物化學(xué)有限公司的磁珠法提取試劑盒、人乳頭瘤病毒核酸擴(kuò)增試劑盒、人乳頭瘤病毒雜交檢測試劑盒。儀器主要有潮州凱普生物化學(xué)有限公司的全自動核酸提取儀(HBNP-4801A)、北京東勝創(chuàng)新生物科技有限公司的PCR擴(kuò)增儀(ETC811)和潮州凱普生物化學(xué)有限公司的全自動核酸分子雜交儀(HBHM-900A)等。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本采集 嚴(yán)格按照試劑說明書的標(biāo)本要求采集標(biāo)本。用陰道張開器暴露宮頸,使用無菌棉拭子采集宮頸分泌物標(biāo)本(即取宮頸內(nèi)口1～2 cm的單層柱狀上皮細(xì)胞)用于支原體鑒定、藥敏試驗(yàn);然后再用宮頸刷在宮頸口輕輕搓動,旋轉(zhuǎn)幾周,確保取得足夠量的脫落細(xì)胞,并將其放入專用取樣管中,用于人乳頭瘤病毒檢測。標(biāo)本采集后于2 h內(nèi)送檢。

1.3.2檢測方法 使用培養(yǎng)法進(jìn)行支原體的檢測,使用稀釋法進(jìn)行12種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)。12種抗菌藥物包括第1代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(紅霉素和交沙霉素)、第2代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(羅紅霉素、克拉霉素和阿奇霉素)、四環(huán)素類藥物(四環(huán)素、強(qiáng)力霉素和美滿霉素)和喹諾酮類藥物(氧氟沙星、司帕沙星、左氧氟沙星和諾氟沙星)。HR-HPV的檢測方法為PCR反向點(diǎn)雜交法,檢測的高危型分型有16、18、52、53、39、45、56、58、59、66、68、31、33、35、51,共15種。嚴(yán)格按照試劑說明書要求進(jìn)行支原體檢測、支原體藥敏試驗(yàn)和HR-HPV檢測。

1.3.3結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)

1.3.3.1支原體鑒定、藥敏試驗(yàn)結(jié)果判讀 先判讀質(zhì)控孔的試驗(yàn)結(jié)果,如質(zhì)控結(jié)果在控,再根據(jù)試劑盒說明書判讀支原體鑒定、藥敏試驗(yàn)的結(jié)果;如果質(zhì)控失控,則本次檢測無效。

1.3.3.2HR-HPV結(jié)果判讀 先判讀陰陽質(zhì)控、IC質(zhì)控點(diǎn)、空白質(zhì)控點(diǎn)的結(jié)果,再根據(jù)試劑盒說明書判讀人乳頭瘤病毒分型檢測結(jié)果;如質(zhì)控失控,則本次檢測無效,需重新采樣檢測。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS26.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和百分率表示,組間比較采用χ2檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1支原體與HR-HPV的感染情況 在9 662例患者中,HR-HPV的陽性率為15.3%(1 482/9 662),支原體的陽性率為44.7%(4 321/9 662),二者的混合感染率為9.6%(931/9 662)。在HR-HPV與支原體的混合感染中,以HR-HPV與Uu的混合感染為主,其在HR-HPV與支原體混合感染中的占比[64.9%(604/931)]明顯高于HR-HPV+Mh感染[4.3%(40/931)]以及HR-HPV+Uu+Mh感染[30.8%(287/931)]的占比,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=755.1、216.2,P<0.05)。

此外,HR-HPV在支原體陽性患者中的陽性率[21.5%(931/4 321)]明顯高于其在支原體陰性患者中的陽性率[10.3%(551/5 341)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=231.1,P<0.05);而支原體在HR-HPV陽性患者中的陽性率[62.8%(931/1 482)]也明顯高于其在HR-HPV陰性患者中的陽性率[41.4%(3 390/8 180)],差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=231.1,P<0.05);其中單獨(dú)Uu感染、單獨(dú)Mh感染、Uu+Mh感染在HR-HPV患者中的陽性率也均明顯高于在HR-HPV陰性患者中的陽性率(χ2=39.5、21.5、188.6,P<0.05)。見表1。

表1 HR-HPV陽性患者與HR-HPV陰性患者的支原體感染情況比較[n(%)]

2.2HR-HPV陽性患者的支原體藥敏試驗(yàn)結(jié)果 在HR-HPV陽性患者支原體感染中,12種抗菌藥物的藥敏試驗(yàn)結(jié)果存在差異,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其中支原體對喹諾酮類藥物的敏感性普遍較低(敏感性≤10.0%),而對大環(huán)內(nèi)酯類藥物中的交沙霉素和四環(huán)素類藥物中的強(qiáng)力霉素、美滿霉素最為敏感(敏感率≥96.0%)。此外支原體耐藥率高的藥物則為喹諾酮類藥物中的氧氟沙星、諾氟沙星,其耐藥率分別為85.4%、97.2%。見表2。

表2 HR-HPV陽性患者感染的支原體藥敏試驗(yàn)結(jié)果(%)

2.3HR-HPV陽性與陰性患者的支原體藥敏試驗(yàn)結(jié)果比較 HR-HPV與支原體混合感染時,在單獨(dú)Uu感染中,HR-HPV陽性患者對第2代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素)和喹諾酮類藥物(氧氟沙星、諾氟沙星)的耐藥率明顯高于HR-HPV陰性患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而對其他7種藥物(四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、美滿霉素、紅霉素、交沙霉素、司帕沙星、左氧氟沙星)的耐藥率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在單獨(dú)Mh感染以及Uu+Mh感染中,HR-HPV陽性患者與HR-HPV陰性患者對12種抗菌藥物的耐藥率差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3。

表3 HR-HPV陽性與陰性患者的支原體耐藥率比較(%)

3 討 論

HR-HPV感染和支原體感染威脅著女性泌尿生殖道系統(tǒng)的健康[6],雖然有報(bào)道支原體感染與HR-HPV感染存在某種程度的相互影響[7],但ZHANG等[8]的研究表明二者并不存在相關(guān)性,可見在支原體感染與HR-HPV感染之間的關(guān)系尚未明確。

在本研究中,支原體的陽性率為44.7%,低于楊書才等[9]報(bào)道的支原體檢出率(53.6%),且HR-HPV的感染率(15.3%)也低于馬俊鳳等[10]報(bào)道的HR-HPV檢出率(27.75%),這可能與不同地區(qū)人民的生活環(huán)境、生活習(xí)慣以及性觀念不同有關(guān)。在本研究HR-HPV感染的患者中支原體陽性率(21.5%)明顯高于HR-HPV陰性患者(10.3%),且在支原體感染患者中HR-HPV的陽性率(62.8%)也明顯高于支原體陰性患者(41.4%),說明HR-HPV感染與支原體感染之間某種程度上相互影響,這可能是因?yàn)镠R-HPV對宮頸細(xì)胞的侵襲[11]和支原體產(chǎn)生的過氧化氫、超氧化物自由基對宿主細(xì)胞及陰道微生態(tài)的損害[12]等原因,導(dǎo)致陰道微生態(tài)的相對穩(wěn)態(tài)失衡,使患者泌尿生殖系統(tǒng)更易受到其他微生物的感染。除此之外,二者密切相關(guān)也可能是由于HR-HPV、支原體都可通過性傳播途徑感染[13],而感染性傳播疾病的患者可能存在性活躍,比普通患者也更易接觸并感染其他的性病病原體。本研究顯示,在HR-HPV與支原體的混合感染中,以HR-HPV與Uu的混合感染為主,這與劉達(dá)彬等[14]的報(bào)道(支原體的主要感染類型為Uu)相符。

此外,本研究通過對HR-HPV感染患者的支原體藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn),HR-HPV與支原體混合感染時,支原體最為敏感的藥物是四環(huán)素類藥物(強(qiáng)力霉素、美滿霉素)和第1代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(交沙霉素),敏感率≥96.0%,與曾俊萍等[15]的報(bào)道大致相同,說明強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素在支原體治療中具有很好的效果;而支原體對喹諾酮類藥物的敏感性則普遍偏低,且其耐藥率高的藥物是喹諾酮類藥物中的氧氟沙星、諾氟沙星,提示喹諾酮類藥物不適合用于支原體的一線治療,其耐藥原因可能與支原體的Ⅱ型拓?fù)洚悩?gòu)酶發(fā)生基因突變等原因有關(guān)[16]。

除此之外,本研究對HR-HPV陽性和陰性患者的支原體藥敏試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),在單獨(dú)Mh感染以及Uu+Mh感染中,HR-HPV陽性患者與HR-HPV陰性患者對12種抗菌藥物的耐藥率并無明顯差異;但在單獨(dú)Uu感染中,HR-HPV患者對羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、諾氟沙星的耐藥率明顯高于HR-HPV陰性患者,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而對其他7種藥物(四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、美滿霉素、紅霉素、交沙霉素、司帕沙星、左氧氟沙星)的耐藥率則無明顯差異。這可能是因?yàn)镠R-HPV或HR-HPV的某種分泌產(chǎn)物影響了羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、諾氟沙星等抗菌藥物對Uu的作用過程,間接導(dǎo)致了Uu對這5種抗菌藥物的耐藥性增強(qiáng)。

其中,HR-HPV感染提高了Uu對第2代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素)的耐藥率,而對第1代大環(huán)內(nèi)酯類藥物(紅霉素、交沙霉素)耐藥率無影響。目前微生物對大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥物耐藥機(jī)制主要包括細(xì)菌產(chǎn)生的滅活酶對大環(huán)內(nèi)酯類藥物結(jié)構(gòu)的破壞以及作用靶位改變(即核糖體亞單位改變)等[17]。而第2代大環(huán)內(nèi)酯類藥物是對紅霉素等第1代大環(huán)內(nèi)酯環(huán)類藥物進(jìn)行化學(xué)改造的衍生物[18],提示HR-HPV可能會產(chǎn)生某種破壞大環(huán)內(nèi)酯類藥物結(jié)構(gòu)的滅活物質(zhì),而這種滅活物質(zhì)主要針對進(jìn)行化學(xué)改造后的第2代大環(huán)內(nèi)酯類藥物結(jié)構(gòu),而對未進(jìn)行化學(xué)改造的第1代大環(huán)內(nèi)酯類藥物結(jié)構(gòu)無明顯影響。

此外,HR-HPV與支原體混合感染時,羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、諾氟沙星在HR-HPV作用下在單獨(dú)Uu感染時耐藥率升高,但HR-HPV陽性、陰性患者對Uu+Mh感染時的耐藥率卻無明顯變化,這可能與Mh本身對這5種抗菌藥物的高耐藥率[19]有關(guān)。

綜上所述,HR-HPV感染與支原體感染之間存在聯(lián)系,臨床上發(fā)現(xiàn)支原體感染時應(yīng)警惕是否同時存在HR-HPV感染,可有效預(yù)防宮頸癌;而對于支原體合并HR-HPV感染的情況,可選用強(qiáng)力霉素、美滿霉素、交沙霉素或根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用合適藥物對支原體感染進(jìn)行有效治療。此外,HR-HPV感染可提高Uu對一些抗菌藥物的耐藥率,其提高耐藥性的機(jī)制尚未明確,因此對于Uu合并HR-HPV感染時,即使藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示Uu對羅紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素、氧氟沙星、諾氟沙星敏感,也應(yīng)避免應(yīng)用此類抗菌藥物進(jìn)行Uu感染的治療。