呂紅雨，周 越，舒 皝，王偉隆,2,3，黃旭雄,2,3*

(1.上海海洋大學(xué)，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201306；2.上海海洋大學(xué)，上海市水產(chǎn)養(yǎng)殖工程技術(shù)研究中心，上海 201306；3.上海海洋大學(xué)，水產(chǎn)科學(xué)國家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306)

多不飽和脂肪酸(PUFA)是含有兩個(gè)或多個(gè)雙鍵的脂肪酸，其中n-3 PUFA 和n-6 PUFA 是重要的PUFA。蝦體自身合成n-3 PUFA 和n-6 PUFA的能力有限，需從食物中獲取來滿足機(jī)體正常需求，因此，n-3 PUFA 中的主要脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3)和n-6 PUFA 中的主要脂肪酸(C18:2n-6、C20:4n-6)被認(rèn)為是蝦類重要的必需脂肪酸[1-3]。n-3 PUFA 和n-6 PUFA 具有高度的生物活性，參與機(jī)體多種生理生化反應(yīng)，如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、脂質(zhì)代謝、炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞分裂的調(diào)節(jié)等[4-8]。研究發(fā)現(xiàn)，n-3 PUFA 和n-6 PUFA 的合成與分解共用相同的酶系統(tǒng)，n-3 PUFA 的增加將導(dǎo)致n-6 PUFA 的合成減少[9]。然而，n-3 PUFA 和n-6 PUFA 在生物病理炎癥和受體信號(hào)調(diào)控中有著不同的作用[10-13]。因此飼料中合適的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比例對(duì)于養(yǎng)殖動(dòng)物保持正常生長和生理狀態(tài)尤為重要。在以混合油脂為脂肪源時(shí)，飼料中花生四烯酸水平(C20:4n-6)影響凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)的生長性能和免疫相關(guān)基因表達(dá)，但作用效果受飼料中EPA 和DHA 水平的影響[14]。日本沼蝦(Macrobrachium nipponense)生長性能在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為1.04時(shí)有最佳表現(xiàn)[15]。類似的生長結(jié)果在大菱鲆(Scophthalmus maximus)[16]、許氏平鲉(Sebastes schlegelii)[17]和黃河鯉(Cyprinus carpio haematopterus)[18]中均有發(fā)現(xiàn)。研究還發(fā)現(xiàn)，飼料中較高的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會(huì)降低虹鱒(Oncorhynchus mykiss)抗SAV-1 病毒的能力[19]。

羅氏沼蝦(M.rosenbergii)由于其生長迅速，個(gè)體大、肉質(zhì)好、味道鮮美，是世界上熱門的養(yǎng)殖水產(chǎn)品。研究表明，當(dāng)羅氏沼蝦飼料中脂肪含量為5%～9%，可顯著提高增重率和特定生長率[20-21]。魚油(FO)和大豆油(SO)是水產(chǎn)上常用的脂肪源，隨著環(huán)境保護(hù)和可持續(xù)發(fā)展的理念不斷被接受，以植物油全部或部分替代魚油是飼料研發(fā)的重要內(nèi)容。然而魚油和大豆油分別富含n-3 PUFA(如C20:5n-3 和C22:6n-3)和n-6 PUFA (如C18:2n-6)[22-23]。飼料中不同n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值是否影響及對(duì)羅氏沼蝦生長性能的影響程度尚待進(jìn)一步驗(yàn)證。本實(shí)驗(yàn)在保持油脂總量的基礎(chǔ)上調(diào)整配方中豆油和魚油的比例，配制5 組實(shí)驗(yàn)飼料，以探究飼料中n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦生長性能、肌肉組分、血清生化等影響，為羅氏沼蝦飼料中合理使用脂肪源提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼料制作

實(shí)驗(yàn)飼料配方及營養(yǎng)組成如表1 所示，通過改變配方中豆油和魚油的比例調(diào)節(jié)飼料的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值，共配制5 組等氮等脂飼料。飼料原料購自浙江粵海飼料有限公司。所有原料經(jīng)破碎后，過80 目篩網(wǎng)，按照飼料配方比例混勻后加水調(diào)成團(tuán)塊狀，采用絞肉機(jī)擠壓成面條狀，于陰涼通風(fēng)處晾干并制成不同規(guī)格的顆粒，抽真空密封于-20 °C 冰箱保存待用。為降低飼料制作過程中PUFA 的氧化，油脂中添加抗氧化劑(2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚，BHT)，同時(shí)以α-淀粉為糖源，以保證未經(jīng)后熟化處理的實(shí)驗(yàn)飼料在水中有良好的穩(wěn)定性。各組實(shí)驗(yàn)飼料的脂肪酸組成見表2。D1～D5 組飼料的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值分別為0.37、0.59、0.93、1.51 和4.38。

表1 實(shí)驗(yàn)飼料組成及營養(yǎng)水平(干物質(zhì))Tab.1 Ingredients and nutrient levels of the experimental diets (dry matter) %

表2 實(shí)驗(yàn)飼料脂肪酸組成(干物質(zhì))Tab.2 Fatty acid compositions of the experimental diets (dry matter) mg/g

1.2 實(shí)驗(yàn)蝦及養(yǎng)殖管理

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)在上海海洋大學(xué)濱海養(yǎng)殖基地進(jìn)行，蝦苗經(jīng)30 d 暫養(yǎng)后，挑選規(guī)格整齊、健康的羅氏沼蝦幼蝦[平均體重(0.44±0.02) g] 800 尾，隨機(jī)分配到20 個(gè)網(wǎng)箱(1.0 m×1.0 m×1.0 m)內(nèi)，每網(wǎng)箱內(nèi)投放40 尾幼蝦。分別投喂5 組飼料，每組設(shè)4個(gè)平行。每天分別于7:00、12:00 和18:00 投喂，日投喂量約占蝦體重的5%～8%，并根據(jù)攝食情況及生長階段進(jìn)行微調(diào)。養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)持續(xù)8 周，養(yǎng)殖期間每周換水2 次，每次換水量1/4。連續(xù)充氣保持水體溶解氧含量＞6 mg/L，pH 為7.8～8.5，氨氮含量＜0.2 mg/L，水溫為(30±2) °C，水體鹽度為0。實(shí)驗(yàn)過程中操作人員嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理規(guī)范，并按照上海海洋大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)制定的規(guī)章制度執(zhí)行 。

1.3 樣品采集

養(yǎng)殖實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，饑餓24 h，稱重并統(tǒng)計(jì)存活數(shù)，計(jì)算增重率(WGR)、存活率(SR)、特定生長率(SGR)以及餌料系數(shù)(FCR)。每網(wǎng)箱隨機(jī)取8尾蝦，用一次性注射器從圍心腔抽取血淋巴置于1.5 mL 離心管中，用消毒的鑷子取肝胰腺于10 mL 離心管，將抽過血和取過肝胰腺的蝦剝殼取肌肉，分別置于液氮罐和冰塊中帶回實(shí)驗(yàn)室，血淋巴解凍后低溫離心(4 °C，3 500 r/min，10 min)制備血清，用于后續(xù)測(cè)定分析。各類生長指標(biāo)計(jì)算方法：

式中，Wf為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的總重量(g)；Wi為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的總重量(g)；Nf為實(shí)驗(yàn)結(jié)束后網(wǎng)箱中羅氏沼蝦存活的尾數(shù)；Ni為實(shí)驗(yàn)開始時(shí)網(wǎng)箱中羅氏沼蝦的尾數(shù)；Wd為實(shí)驗(yàn)開始到實(shí)驗(yàn)結(jié)束網(wǎng)箱中所投喂飼料的干重(g)；t為養(yǎng)殖周期(d)。

1.4 樣品檢測(cè)分析

飼料和肌肉中的水分含量采用105 °C 烘箱干燥恒重法檢測(cè)(GB/T 6435—2014)；總脂肪采用氯仿-甲醇法檢測(cè)(GB/T 6433—2006)；灰分采用550 °C馬弗爐灼燒法檢測(cè)(GB/T 6438—2007)；粗蛋白質(zhì)采用凱氏定氮法檢測(cè)(GB/T 6432—2018)。

蝦體肌肉及飼料脂肪酸組成測(cè)定采用三氟化硼甲酯化法。將蝦肌肉及飼料樣品冷凍干燥后，采用氯仿-甲醇(V∶V=2∶1)抽提總脂肪，加入1 mL正己烷將所得總脂溶解，加入1 mL 未甲酯化的C19作為內(nèi)標(biāo)，真空干燥4 h；加入2 mL 14 %三氟化硼甲醇溶液，100 °C 水浴25 min；然后加入2 mL 甲醇和2 mL 苯，100 °C 水浴25 min；再加入1 mL 蒸餾水和1 mL 正己烷，振蕩混勻后3 500 r/min 離心5～10 min，取上清液，使用氣相-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。以脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma)的保留時(shí)間和分析圖譜對(duì)樣品脂肪酸進(jìn)行定性分析，按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算各脂肪酸的絕對(duì)含量：

式中，Cx表示某脂肪酸在樣品中的含量(mg/g)；C19為內(nèi)標(biāo)物濃度(mg/mL)；V19為內(nèi)標(biāo)物加入的體積(mL)；M19為內(nèi)標(biāo)物甲酯分子量；S19為內(nèi)標(biāo)物的峰面積；Mx為某脂肪酸甲酯的分子量；Sx為某脂肪酸的峰面積；m為樣品重量(g)。

血清及肝胰腺生化指標(biāo)采用試劑盒測(cè)定(南京建成生物工程研究所)。將肝胰腺在冰水浴中用生理鹽水按1∶9 (重量比)勻漿，勻漿液于3 500 r/min、4 °C 離心10 min，取上清液。并按照試劑盒的說明書測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)、血清銅藍(lán)蛋白、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(T-CHO)、總蛋白(TP)、葡萄糖(GLU)、蛋白酶、脂肪酶、α-淀粉酶等生理指標(biāo)。

1.5 數(shù)據(jù)分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)果用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)的方式表示，使用SPSS 25.0 軟件中的單因素方差分析(One-Way ANOVA)分析數(shù)據(jù)的差異，當(dāng)差異顯著時(shí)進(jìn)一步用Duncan 氏方法比較各處理之間的差異，P＜0.05 表示差異顯著。脂肪酸的相關(guān)性分析采用雙變量相關(guān)分析(Bivariate Correlations)。

2 結(jié)果

2.1 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦生長性能的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的升高，羅氏沼蝦FW、WGR 和SGR 均先升后降，其中D3 組最高，且顯著高于D1、D2 和D5 組(P＜0.05)。D3 組的FCR 顯著低于D2 (P＜0.05)，但與其他組沒有顯著差異(P＞0.05)。飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA比值對(duì)羅氏沼蝦存活率無顯著影響(P＞0.05) (表3)。采用折線模型回歸分析，羅氏沼蝦幼蝦WGR 在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.94 時(shí)最大，而羅氏沼蝦幼蝦SGR 在飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.86 時(shí)最大(圖1)。

圖1 飼料中n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值與羅氏沼蝦幼蝦增重率(a)和特定生長率(b)的回歸分析Fig.1 Regression analysis of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio and the WGR (a)/ SGR (b) of juvenile M.rosenbergii

表3 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦幼蝦生長性能的影響Tab.3 Effect of dietary n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on the growth performance of juvenile M.rosenbergii

2.2 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦肌肉組分的影響

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)蝦體肌肉水分、粗蛋白質(zhì)和灰分含量均無顯著影響(P＞0.05)；肌肉總脂肪含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增加先升后降，在D3 組達(dá)到最高，且顯著高于其他組(P＜0.05) (表4)。

表4 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦幼蝦肌肉常規(guī)組分的影響Tab.4 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on the muscular composition of juvenile M.rosenbergii %

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦肌肉脂肪酸含量有顯著影響(P＜0.05) (表5)。D5 組SFA 含量最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)；D4組MUFA 含量最高，并顯著高于D1 和D2 組(P＜0.05)；隨飼料 n-3 PUFA/n-6 PUFA比值的增加，羅氏沼蝦肌肉n-3 PUFA 含量上升，在D5 組達(dá)到最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)；而n-6 PUFA含量顯著下降(P＜0.05)，在D5 組降到最低；肌肉n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的升高而上升，在D5 組達(dá)到最高，并顯著高于其他組(P＜0.05)。

表5 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦幼蝦肌肉脂肪酸組成的影響(干物質(zhì))Tab.5 Effect of dietary n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on muscular fatty acid profiles of juvenile M.rosenbergii (dry matter) mg/g

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的上升，蝦體肌肉中脂肪酸與飼料中對(duì)應(yīng)脂肪酸多數(shù)呈正相關(guān)，只有C16:1n7 和ΣPUFA 呈負(fù)相關(guān)。在正相關(guān)中的相關(guān)程度也有不同，其中ΣSFA、C18:3n3 和C20:5n3呈顯著相關(guān)(P＜0.05)，C18:2n6、C22:5n3、Σn-6PUFA 和n-3/n-6 呈極顯著相關(guān)(P＜0.01) (表6)。

表6 飼料脂肪酸與肌肉脂肪酸的相關(guān)性分析結(jié)果Tab.6 Correlation analysis results of fatty acids in feed and corresponding fatty acids in muscle

2.3 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦抗氧化能力的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的上升，羅氏沼蝦血清T-SOD 活性、T-AOC 和血清CP 含量均先升后降，其中T-SOD 活性和T-AOC 在D3 組達(dá)到最大，血清CP 含量在D4 組達(dá)到最大，與D3 組沒有顯著差異(P＞0.05)，但顯著高于D1、D2 和D5 組 (P＜0.05)。血清MDA 含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值上升而增加，在D5 組達(dá)到最大，并顯著高于D1、D2 和D3 組(P＜0.05)。對(duì)羅氏沼蝦肝胰腺抗氧化能力的分析表明，T-SOD活性和T-AOC 分別在D4 和D3 組達(dá)到最大。MDA含量在D5 組達(dá)到最大(表7)。

表7 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦抗氧化能力的影響Tab.7 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on antioxidant capacities of juvenile M.rosenbergii

2.4 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦血清生化指標(biāo)的影響

飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦血清TP 和GLU 含量無顯著影響(P＞0.05)；羅氏沼蝦血清AST 和ALT 活性均在D3 組降到最低，與D4 組無顯著差異(P＞0.05)，但顯著低于其他組(P＜0.05)；羅氏沼蝦血清TG 和T-CHO 含量在D1組達(dá)到最大，并顯著高于其他組(P＜0.05) (表8)。

表8 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦幼蝦血清生化參數(shù)的影響Tab.8 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on serum biochemical indicators of juvenile M.rosenbergii

2.5 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦肝胰腺消化酶活性的影響

隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增大，羅氏沼蝦肝胰腺蛋白酶活性和脂肪酸合成酶活性均先升后降，在D3 組達(dá)到最大，并顯著高于其他組(P＜0.05)；脂肪酶活性在D5 組達(dá)到最大，并顯著高于D1、D2 和D3 組(P＜0.05)，但與D4 組沒有顯著差異(P＞0.05)；淀粉酶活性先降后升，在D3 組降到最低，且顯著低于D1、D4 和D5 組(P＜0.05) (表9)。

表9 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦幼蝦肝胰腺消化酶活性的影響Tab.9 Effect of n-3 PUFA/n-6 PUFA ratio on hepatopancreas digestive enzyme activities of juvenile M.rosenbergii

3 討論

3.1 飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦生長性能的影響

在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦存活率無顯著影響，但攝食D3 組飼料(n-3 PUFA/n-6 PUFA=0.93)的羅氏沼蝦表現(xiàn)出最大的增重率和最小的飼料系數(shù)。折線回歸分析表明，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.94或0.86 時(shí)羅氏沼蝦表現(xiàn)出最大的增重率或特定生長率，表明飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值有利于羅氏沼蝦的生長。Teshima 等[24]發(fā)現(xiàn)飼料中C18：3n-3 與C18：2n-6 比值為0.083 時(shí)能顯著提高羅氏沼蝦增重率。對(duì)日本沼蝦[15]和黃河鯉[18]的研究也表明，飼料中保持適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值(1.04 和1.09)也可促進(jìn)其生長，提高增重率。適宜飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的實(shí)驗(yàn)組蝦體生長性能的提高可能與脂質(zhì)代謝運(yùn)轉(zhuǎn)的改善有關(guān)。攝食n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93(D3 組)飼料的羅氏沼蝦肝胰腺中蛋白酶和脂肪酸合成酶表現(xiàn)出最大的活性，表明飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會(huì)促進(jìn)羅氏沼蝦對(duì)食物中蛋白質(zhì)的消化和脂肪的有效沉積，而過高或過低均會(huì)使蝦體消化能力和脂肪沉積能力變?nèi)?。譚青等[16]證實(shí)大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚飼料中保持適宜n-3/n-6 LC-PUFA 比例也可顯著提高蛋白酶和脂肪酸合成酶活性。大量研究表明，飼料中適宜的必需脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3、C18:2n-6 和C20:4n-6)可促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，從而達(dá)到促生長作用[1-2,14]。而在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的變化實(shí)際上是由飼料中所有脂肪酸的變化所產(chǎn)生的。因此，推測(cè)在適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 添加量下，實(shí)驗(yàn)組蝦體脂質(zhì)代謝運(yùn)轉(zhuǎn)的改善可能與該組飼料滿足了蝦體對(duì)必需脂肪酸(C18:3n-3、C20:5n-3、C22:6n-3、C18:2n-6 和C20:4n-6)的需要量有關(guān)。低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組的羅氏沼蝦生長較差，一方面與這些實(shí)驗(yàn)組蝦體消化能力和脂肪沉積能力變?nèi)跤嘘P(guān)，另一方面，推測(cè)與低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的飼料處理組蝦體沒有攝入足夠的C≥20PUFA 有關(guān)。低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D1 和D2)中含有高量C18 PUFA (18.6 和11.47 mg/g)和較少的C20-PUFA，高n-3 PUFA/n-6 PUFA (D5)比值飼料組中含有高量C20-PUFA (13.85 mg/g)和較少的C18-PUFA，而淡水蝦由C18-PUFA向C20-PUFA 的轉(zhuǎn)化能力較弱。C20-PUFA 是細(xì)胞膜重要的組成部分，飼料C20-PUFA 的缺乏影響蝦體達(dá)到最大生長速率[25]。過高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組羅氏沼蝦生長下降，除了高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組羅氏沼蝦對(duì)食物中蛋白質(zhì)消化和脂肪沉積變?nèi)跤嘘P(guān)外，推測(cè)還與食物中的n-3 PUFA 與n-6 PUFA 競(jìng)爭(zhēng)酶系統(tǒng)有關(guān)。在生物體內(nèi)缺乏Δ3 脫氫酶，n-3 和n-6不飽和脂肪酸不能相互轉(zhuǎn)化，且代謝是相互競(jìng)爭(zhēng)的[9,26]，而高水平的n-3 或n-6 會(huì)抑制對(duì)方的正常代謝，影響生長性能。

飼料 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為 0.93 時(shí)(D3 組)可促進(jìn)羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積，比值過高或過低均會(huì)對(duì)羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積有明顯的抑制作用，這一現(xiàn)象在其他養(yǎng)殖動(dòng)物上也得到了驗(yàn)證[6,15-16,18,27]。本研究中D3 組羅氏沼蝦肝胰腺脂肪酸合成酶活性顯著高于其他組，也進(jìn)一步證實(shí)飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值可促進(jìn)羅氏沼蝦肌肉粗脂肪有效沉積。同時(shí)，不同組羅氏沼蝦肌肉中絕大多數(shù)脂肪酸的變化與其攝食飼料對(duì)應(yīng)脂肪酸變化呈正相關(guān)，其中n-3 PUFA、EPA、DHA、C18:2n6 和n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值呈顯著正相關(guān)，說明蝦體肌肉脂肪酸組成受飼料中脂肪酸組成的影響，這在凡納濱對(duì)蝦[28]、虹鱒[29]和大西洋鮭(Salmo salar)[30]等養(yǎng)殖品種中都得到了證實(shí)。

3.2 飼料中不同 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦抗氧化能力的影響

過量的氧自由基誘導(dǎo)產(chǎn)生的MDA 是判斷細(xì)胞氧化損傷程度的指標(biāo)。Jin 等[5]發(fā)現(xiàn)黑棘鯛(Acanthopagrus schlegelii)攝食高水平的n-3 PUFA 飼料會(huì)顯著提高其肝臟中MDA 的濃度。相比高水平的n-6 PUFA，高水平的n-3 PUFA 更容易使細(xì)胞膜脂質(zhì)過氧化的敏感性提高[31]。本研究中，高水平的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D5)含有高水平的n-3 PUFA (14.62 mg/g)，低水平的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組(D1)含有高水平的n-6 PUFA (16.20 mg/g)，羅氏沼蝦血清和肝胰腺中MDA 含量隨飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的增加而上升，表明攝食高n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值的飼料加深了蝦體內(nèi)氧化損傷。SOD 是內(nèi)源性抗氧化防御系統(tǒng)的關(guān)鍵酶，可以保護(hù)細(xì)胞和組織免受氧化損傷[32]。T-AOC 是指機(jī)體可以清除體內(nèi)產(chǎn)生各種氧自由基的能力[33]。血清銅藍(lán)蛋白也具有清除體內(nèi)過氧化自由基的作用[34]。在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93～1.51 時(shí)肝胰腺和血清SOD 活性、T-AOC 以及血清CP 含量均達(dá)到最大。表明飼料中適宜n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會(huì)提升羅氏沼蝦抗氧化能力，過高或過低都會(huì)產(chǎn)生不利的影響。攝食高水平(D5)和低水平(D1和D2) n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料組的羅氏沼蝦抗氧化能力下降，推測(cè)可能與高水平的n-3 PUFA 或n-6 PUFA 及其比例不平衡導(dǎo)致的氧化應(yīng)激引起的炎癥反應(yīng)有關(guān)。有研究表明，長期攝入過量的n-3 PUFA 或n-6 PUFA 會(huì)使蝦體出現(xiàn)過度的炎癥反應(yīng)[16]，引起機(jī)體氧化應(yīng)激，使細(xì)胞過氧化物酶和體脂肪氧化相關(guān)基因表達(dá)量升高，并伴隨炎癥水平的升高，而炎癥會(huì)危害機(jī)體包括免疫和抗氧化機(jī)能的正常發(fā)揮[35]。

3.3 飼料中不同 n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值對(duì)羅氏沼蝦血清生化指標(biāo)的影響

AST 和ALT 是機(jī)體內(nèi)重要的轉(zhuǎn)氨酶，參與機(jī)體內(nèi)氨基轉(zhuǎn)運(yùn)，肝臟中較多，但當(dāng)肝臟組織發(fā)生病變?cè)斐杉?xì)胞膜通透性增強(qiáng)時(shí)會(huì)進(jìn)入到血液中[36-37]。在本研究中，飼料n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.93 時(shí)，羅氏沼蝦血清中AST 和ALT 酶含量最低，表明飼料不適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA比值會(huì)增加肝胰腺細(xì)胞的損傷。Jin 等[38]在黑棘鯛中也發(fā)現(xiàn)，飼料中適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會(huì)明顯降低血清中AST 和ALT 的含量。攝食過高或過低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料的羅氏沼蝦肝胰腺細(xì)胞損傷與脂代謝運(yùn)轉(zhuǎn)有關(guān)。飼料中適宜的脂肪酸比例會(huì)促進(jìn)脂質(zhì)代謝的運(yùn)轉(zhuǎn)[16]，減少肝胰腺中脂肪的過度沉積，進(jìn)而減少羅氏沼蝦肝胰腺中細(xì)胞的損傷。

此外，當(dāng)肝臟受外界因素影響發(fā)生病理或生理變化時(shí)，血清T-CHO 和TG 濃度會(huì)迅速增加[38]，因此血清中T-CHO 和TG 濃度可反映出肝臟的健康狀況。在大西洋鮭[39]和大菱鲆[40]飼料中保持低水平的n-3 LC-PUFA 時(shí)，其血清中極低密度脂蛋白和甘油三酯含量顯著升高。本研究也得到類似結(jié)果，低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值組(D1)的沼蝦血清T-CHO 和TG 含量顯著高于其他組，說明飼料低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值會(huì)影響羅氏沼蝦肝胰腺的健康。攝食低n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值飼料的羅氏沼蝦血清T-CHO 和TG 升高的原因可能是蝦體沒有攝入足夠的n-3 PUFA。高含量的n-3 LC-PUFA 攝入可減少肝臟中極低密度脂蛋白和甘油三酯的分泌，促進(jìn)血漿中極低密度脂蛋白和甘油三酯的清除，進(jìn)而降低血清中甘油三酯和極低密度脂蛋白濃度[41]。

飼料適宜的n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值可顯著提升羅氏沼蝦生長性能和抗氧化能力，對(duì)增重率和特定生長率進(jìn)行折線回歸，建議羅氏沼蝦幼蝦飼料中最適n-3 PUFA/n-6 PUFA 比值為0.86～0.94。

（作者聲明本文無實(shí)際或潛在的利益沖突）