賈方方，許躍奇，閻海濤，何曉冰，李俊營(yíng)，劉冬梅，王亞月，常 棟*

1. 商丘師范學(xué)院生物與食品學(xué)院 植物與微生物互作河南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,河南省商丘市睢陽(yáng)區(qū)文化路298 號(hào) 476000

2. 河南省煙草公司平頂山市公司，河南省平頂山市建設(shè)路263 號(hào) 467000

煙草根腐病在我國(guó)煙區(qū)普遍發(fā)生，危害嚴(yán)重。近年來(lái)，隨著我國(guó)土地集約化程度不斷提高，煙田連作更加普遍，根腐病的發(fā)生日益嚴(yán)重，甚至呈蔓延趨勢(shì)［1］。其中，鐮刀菌根腐?。‵usarium spp.）是河南煙區(qū)的主要根莖類病害，其病原菌檢出率52.60%［2］。據(jù)報(bào)道，其病原菌主要有尖孢鐮刀菌（F.oxysporum）、茄病鐮刀菌（F. solani）、半裸鐮刀菌（F.semitectum）和共享鐮刀菌（F. commune）［3］，不同地域引起該病害的致病菌存在差異［4-5］。平頂山煙區(qū)是河南的傳統(tǒng)煙區(qū)，該病害在重病煙田的發(fā)病率達(dá)30%以上，嚴(yán)重影響了煙葉產(chǎn)質(zhì)量，降低了其工業(yè)可用性［4，6］。同時(shí)，根腐病的發(fā)生會(huì)加重黑脛病的發(fā)生，進(jìn)一步擴(kuò)大損失［7］。當(dāng)前針對(duì)煙草根莖類病害的防治措施主要有采用抗病品種［8-9］、生物防治［10-11］、農(nóng)業(yè)防治［12-13］和化學(xué)藥劑防治［14-15］等，其中生物防治以其安全、高效、綠色環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)，已成為國(guó)內(nèi)外作物病害防治的重要措施。微生物菌株篩選是生物防治的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。趙娟等［16］篩選到可產(chǎn)纖維素酶和幾丁質(zhì)酶的生防鏈霉菌T22，可有效抑制番茄灰霉病病原真菌菌絲的生長(zhǎng)。郝金輝等［17］報(bào)道多黏類芽孢桿菌（Paenibacillus polymyxa）JE53 和枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）JE56 均可產(chǎn)生4 種胞外酶（纖維素酶、幾丁質(zhì)酶、葡聚糖酶和蛋白酶），掃描電鏡發(fā)現(xiàn)這2 株拮抗菌均可導(dǎo)致病原菌互隔交鏈孢（Alternaria alternata）菌絲表面粗糙，扭曲變形。羅云艷等［18］從煙草根際土壤中分離的解淀粉芽孢桿菌LY79 對(duì)煙草根黑腐病的盆栽防效達(dá)71.54%。張蒙蒙等［19］從煙草根際土壤中分離的嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌和貝萊斯芽孢桿菌可抑制煙草疫霉菌生長(zhǎng)，對(duì)煙草黑脛病的防效分別達(dá)50.5%和61.5%。原晨虹等［20］研究發(fā)現(xiàn)地衣芽孢桿菌BL-24 可有效防治煙草炭疽病，其發(fā)酵液對(duì)煙草炭疽病的田間防效達(dá)56.28%，與藥劑50%多菌靈WP的防效相當(dāng)。我國(guó)首次報(bào)道煙草鐮刀菌根腐病是在20 世紀(jì)90 年代末［21］，相比煙草黑脛病、根黑腐病和青枯病等根莖類病害［22-23］，該病的研究歷史短，化學(xué)特效藥劑和抗性煙草品種較為缺乏，針對(duì)以Fusarium spp.為病原的鐮刀菌根腐病拮抗微生物的研究也鮮見報(bào)道。為此，以平頂山煙區(qū)煙草根腐病的發(fā)病煙株及根際土壤為材料，從中分離出煙草根腐病的病原菌并鑒定，確定引起平頂山煙草根腐病的致病菌；從發(fā)病煙田的健康煙株根際土壤中篩選煙草鐮刀菌根腐病的拮抗菌，測(cè)定其生防潛力，并探討其拮抗機(jī)理及傳代培養(yǎng)穩(wěn)定性，旨在為豐富煙草鐮刀菌根腐病的生防菌種資源，開發(fā)鐮刀菌根腐病生防菌劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 病原菌的分離鑒定

煙草鐮刀菌根腐病（Fusarium spp.）病原菌尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）于2021 年分離自河南省平頂山市煙草根腐病發(fā)生煙田，由商丘師范學(xué)院植物與微生物互作河南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室分離、純化、保存、鑒定并提供。

1.2 拮抗菌株的分離、篩選和鑒定

菌株分離：分別選取平頂山煙區(qū)鐮刀菌根腐病發(fā)病較重地塊的健康煙株，采集5～10 cm深的根際土壤10份，每份1 000 g。參照Niemann的稀釋涂布平板法，將待測(cè)土壤除雜過(guò)篩（0.420 mm）后，稱取5 g加到100 mL 三角瓶中，用無(wú)菌水定容至50 mL，于28 ℃恒溫振蕩培養(yǎng)箱中，200 r/min振蕩1 h，使待測(cè)土樣充分稀釋均勻。靜止沉淀后，取上清液1 mL梯度稀釋至10-1～10-6倍，吸取各梯度溶液200 μL，用滅菌的涂布器均勻涂布在NA 培養(yǎng)基上，37 ℃恒溫培養(yǎng)48 h，以無(wú)菌水為空白對(duì)照，3 次重復(fù)。挑取生長(zhǎng)性狀不同的單菌落，多次平板培養(yǎng)和純化，直到獲得純化的單菌落，甘油保存。

菌株篩選：采用平板對(duì)峙法，用直徑1 cm 的打孔器將病原菌接種到培養(yǎng)基的中間，采用三點(diǎn)法在距平板中央2 cm等距離接種不同的土壤分離菌，以不接種分離菌為對(duì)照，于30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 d，每處理3 次重復(fù)，待對(duì)照菌落長(zhǎng)至接近培養(yǎng)皿邊緣時(shí)，測(cè)量煙草鐮刀菌根腐病病原菌菌落直徑和抑菌圈直徑。計(jì)算公式：

菌株鑒定：將分離純化菌株L210 置于LB 培養(yǎng)基上，于25 ℃培養(yǎng)，待分離菌絲長(zhǎng)成菌落，用解剖針挑取少量菌絲置于載玻片上，加入幾滴無(wú)菌水，蓋上蓋玻片制成臨時(shí)裝片，于顯微鏡（DM2500，德國(guó)徠卡顯微系統(tǒng)有限公司）下觀察菌絲及分生孢子形態(tài)；參照文獻(xiàn)［24-25］的方法對(duì)菌株進(jìn)行生理生化測(cè)定，16S rDNA序列分析［26］，對(duì)L210菌株進(jìn)行種屬鑒定。

1.3 掃描電鏡樣品的制備

制備L210 細(xì)胞懸液（1×105cfu/mL），將粗提物溶于磷酸緩沖液（pH值7.2）配制質(zhì)量濃度為50 μg/mL的粗提液。取5 μL細(xì)胞懸浮液置于載玻片，用5 μL的50 μg/mL 的粗提液處理，對(duì)照用磷酸緩沖液（pH值7.2）處理，均為24 h。將載玻片用2.5%戊二醛4 ℃固定過(guò)夜，磷酸緩沖液漂洗3 次，然后用30%、50%、70%、90%的乙醇逐級(jí)脫水1次，100%乙醇脫水2 次，每次20 min，再用乙酸異戊酯置換100%乙醇2次，每次20 min，臨界點(diǎn)干燥后噴金，用掃描電子顯微鏡（SU8010，日本日立公司）觀察菌體細(xì)胞［27］。

1.4 L210菌株代謝產(chǎn)物的測(cè)定

分別收集L210 菌株發(fā)酵液的上清液（全菌液經(jīng)12 000 r/min離心5 min，取上清液過(guò)濾）與菌體細(xì)胞破碎液T3（收集100 mL全菌液，4 ℃，6 500 r/min，離心10 min，棄上清液，加5 mL 50 mmol/L pH 值7.5 KH2PO4-K2HPO4緩沖溶液，超聲破碎）。再分別使用纖維素酶活性檢測(cè)試劑盒（YX-SH-TQ22025，上海原鑫生物科技有限公司）測(cè)定纖維素酶含量，幾丁質(zhì)酶活性檢測(cè)試劑盒（YX-W-B917，上海原鑫生物科技有限公司）檢測(cè)幾丁質(zhì)酶含量。

1.5 L210菌株發(fā)酵液對(duì)煙葉防御酶活性誘導(dǎo)試驗(yàn)

采用盆栽試驗(yàn)，在煙苗移栽后30 d 分別接種L210 發(fā)酵液原液（1.0×108cfu/mL）、10 倍（1.0×109cfu/mL）、100 倍（1.0×1010cfu/mL）發(fā)酵液10 mL，以清水處理為對(duì)照（CK），各處理設(shè)置10次重復(fù)。接種后第0、3、6、9天取第3片葉，采用鄰苯二酚法測(cè)定多酚氧化酶（PPO）活性［28］，愈創(chuàng)木酚法測(cè)定過(guò)氧化物酶（POD）活性［29］，苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性測(cè)定參考文獻(xiàn)［30］的方法。

1.6 拮抗菌株對(duì)盆栽和田間煙草尖孢鐮刀菌根腐病的防效測(cè)定

盆栽試驗(yàn)共設(shè)5 個(gè)處理?？瞻讓?duì)照（CK）：只接種病原菌。旺泰寶處理：旺泰寶（上海大井生物工程有限公司，有效菌種哈茨木霉菌，生防菌劑對(duì)照）藥液濃度為1%，每株煙澆灌65 mL。碧苗處理：碧苗（山東魯抗海柏爾生物技術(shù)有限公司，有效菌種枯草芽孢桿菌，生防菌劑對(duì)照）稀釋1 000倍后，每株煙灌根65 mL。甲霜錳鋅處理：使用58%甲霜·代錳鋅可濕性粉劑（江蘇寶靈化工股份有限公司，甲霜靈含量10%，代森錳鋅含量48%，化學(xué)藥劑對(duì)照）稀釋600倍，每株灌根20 mL。L210處理：將擴(kuò)繁培養(yǎng)的L210菌株稀釋，制成發(fā)酵液（細(xì)胞濃度1.0×108cfu/mL），采用灌根法每盆灌根20 mL。各煙株首次施用菌劑或農(nóng)藥7 d后灌根接種尖孢鐮刀菌發(fā)酵液20 mL，此后每7 d灌根1次，共灌根3次。每處理8株，各處理重復(fù)3 次，接種煙草尖孢鐮刀菌發(fā)酵液14 d 后開始調(diào)查發(fā)病情況。供試煙草品種為中煙100。

大田復(fù)篩試驗(yàn)在平頂山市白龍廟村進(jìn)行，設(shè)置除CK為自然發(fā)病外，其余處理同盆栽一致。每處理50 株，重復(fù)3 次。煙株于2021 年5 月1 日移栽，還苗后按照盆栽試驗(yàn)的10倍體積用量施用各處理，每隔15 d 灌根施用，共灌根3 次，于最后一次灌根后15 d開始調(diào)查發(fā)病情況。按照優(yōu)質(zhì)煙葉生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范進(jìn)行田間管理。參照標(biāo)準(zhǔn)GB/T 23222—2008［31］和GB/T 23224—2008［32］方法進(jìn)行煙草根腐病病情指數(shù)分級(jí)，并略做修改。計(jì)算公式：

1.7 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 13.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，采用Duncan’s法進(jìn)行數(shù)據(jù)間差異的顯著性檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 拮抗菌株的分離與篩選

從煙草的根際土壤中共分離土壤微生物512株，對(duì)尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）具有拮抗作用的共33 株，篩出率為6.44%。其中，以L210 對(duì)鐮刀菌根腐病抑制效果最好，菌株在平板對(duì)峙培養(yǎng)中產(chǎn)生了清晰的抑菌圈，抑菌直徑達(dá)71.4 mm，病原菌的菌絲稀疏，邊緣受到抑制和溶解，抑菌率為68.2%，見圖1。

圖1 菌株L210對(duì)尖孢鐮刀菌的平板對(duì)峙培養(yǎng)Fig.1 Plate confrontation culture of strain L210 against Fusarium oxysporum

2.2 菌株的種類鑒定

2.2.1 菌株的形態(tài)與生理生化特征

菌株L210經(jīng)72 h培養(yǎng)后，進(jìn)行顯微觀察和掃描電鏡觀察，結(jié)果顯示該菌菌體呈直桿狀，菌落絲狀，呈不透明的乳白色，表面干燥、褶皺、小而突起，邊緣呈鋸齒狀，菌體直徑0.5～0.8 μm，長(zhǎng)0.9～2.0 μm，端圓，無(wú)芽孢，有莢膜和鞭毛，能運(yùn)動(dòng)（圖2）。其生理生化特征見表1。該菌株為革蘭氏陰性菌，甲基紅試驗(yàn)、V-P試驗(yàn)、賴氨酸脫羧酶試驗(yàn)、葡萄糖產(chǎn)氣試驗(yàn)等結(jié)果均為陽(yáng)性；發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸，可利用檸檬酸鹽和蘋果酸；苯丙氨酸脫氨酶試驗(yàn)、過(guò)氧化氫酶活性試驗(yàn)、尿素酶活性試驗(yàn)、氧化酶活性試驗(yàn)、精氨酸雙水解酶活性試驗(yàn)、衛(wèi)矛醇產(chǎn)酸試驗(yàn)、乳糖產(chǎn)酸試驗(yàn)、D-阿東醇產(chǎn)酸試驗(yàn)、L-阿拉伯糖試驗(yàn)等結(jié)果均為陰性，不可利用丙二酸。與參考文獻(xiàn)［24-25］進(jìn)行比對(duì)，其生理生化特性與液化沙雷氏菌一致，可初步鑒定為液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。

表1 L210菌株的生理生化特性①Tab.1 Physiological and biochemical characteristics of strain L210

圖2 菌株L210電鏡下的孢子形態(tài)Fig.2 Spore morphology of strain L210 under electron microscope

2.2.2 菌株的16S rDNA擴(kuò)增及序列分析

以菌株L210 的基因組DNA 為模板（引物序列：27f：5'-AGAG TTTG ATCC TGGC TCAG-3'；1492r：5'-GGTT ACCT TGTT ACGA CTT-3'），PCR 擴(kuò)增后經(jīng)電泳檢測(cè)，得到1條約為1 kb的特異性條帶。PCR產(chǎn)物經(jīng)測(cè)序顯示：擴(kuò)增序列長(zhǎng)度為993 bp。同源性分析結(jié)果表明，L210 為腸桿菌科、沙雷氏菌屬（Serratia）（圖3）。

圖3 菌株L210的16S rDNA系統(tǒng)進(jìn)化樹Fig.3 16S rDNA phylogenetic tree of strain L210

2.3 菌株的拮抗機(jī)理分析

2.3.1 病原菌的掃描電鏡觀察

利用掃描電鏡分別對(duì)病原菌尖孢鐮刀菌和經(jīng)L210 拮抗菌發(fā)酵液處理過(guò)的病原菌進(jìn)行觀察，從圖4中可見，對(duì)照組的菌絲表面致密光滑，形狀飽滿、均勻。經(jīng)L210菌株發(fā)酵液處理后，煙草鐮刀菌根腐病病原菌菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育明顯受到抑制，菌絲表面萎縮凹陷干癟、粗糙不平整，菌絲扭曲變形，細(xì)胞質(zhì)濃縮，部分菌絲壁潰解，最終失去侵染能力。

2.3.2 拮抗菌株的代謝產(chǎn)物分析

在L210 菌株的發(fā)酵上清液以及細(xì)胞粗提物中均檢測(cè)到了幾丁質(zhì)酶和纖維素酶（表2），且均表現(xiàn)為上清液中的含量顯著高于細(xì)胞粗提物中的含量，表明該菌株能產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶和纖維素酶，具有分解幾丁質(zhì)和纖維素的能力。

表2 菌株L210的幾丁質(zhì)酶和纖維素酶含量①②Tab.2 Contents of chitinase and cellulose in strain L210（U·mL-1）

2.3.3 拮抗菌發(fā)酵液對(duì)煙苗防御酶活性的誘導(dǎo)

PPO、POD 和PAL 是3 種極為重要的防御酶，與植物的抗（耐）病性密切相關(guān)［33］。由圖5可見，不同處理間煙葉內(nèi)幾種防御酶活性變化規(guī)律整體上一致。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，PAL 和POD 表現(xiàn)為先升后降的趨勢(shì)，在接種后第6 天達(dá)到活性高峰，然后下降；PPO則表現(xiàn)為接種后0 d至3 d波動(dòng)下降，而后明顯升高，同樣在第6 天達(dá)到活性高峰后再下降。同對(duì)照相比，接種了L210菌株發(fā)酵液原液、10 倍濃度發(fā)酵液（1.0×109cfu/mL）、和100倍濃度發(fā)酵液（1.0×1010cfu/mL）均可提高3種防御酶活性，在接種后6 d和9 d，3種酶活性均顯著提高。其中，CK 的PAL 活性在第9天達(dá)到酶活高峰，接種發(fā)酵液后使酶活高峰提前。不同濃度發(fā)酵液對(duì)煙草3種防御酶活性的影響除了接種后第9 天PAL 和POD 活性以100 倍濃度最高外，其余整體表現(xiàn)為10倍濃度發(fā)酵液誘導(dǎo)下煙葉內(nèi)防御酶活性最高。

圖5 L210菌株不同濃度發(fā)酵液對(duì)煙葉PPO、POD和PAL酶活性的影響Fig.5 Effect of L210 strain fermentation at different concentrations on activities of PPO, POD and PAL in tobacco leaves

2.4 菌株對(duì)盆栽與大田病害的防效

由表3可見，CK處理發(fā)病率為100%，旺泰寶、碧苗、甲霜錳鋅和L210處理煙草鐮刀菌根腐病的發(fā)病率分別為85.7%、100%、71.4%和0；盆栽試驗(yàn)病情指數(shù)仍以CK 最高（89.3），碧苗、旺泰寶、甲霜錳鋅和L210 各處理病情指數(shù)分別為75.0、78.6、42.9 和0；各處理盆栽試驗(yàn)相對(duì)防效分別為16.0%、11.9%、51.9%和100%。以L210 處理的相對(duì)防效最高（100%），無(wú)發(fā)病煙株。

表3 菌株L210對(duì)盆栽及大田病害的防效①Tab.3 Control effects of strain L210 in pot and field experiments

大田復(fù)篩試驗(yàn)中以自然發(fā)病的處理CK 的發(fā)病率最高（11.1%），碧苗、旺泰寶、甲霜錳鋅和L210 各處理的發(fā)病率分別為4.6%、13.0%、6.2%和6.0%；病情指數(shù)分別達(dá)6.3、2.7、6.0、4.6 和1.5；各處理均有一定的防治效果，相對(duì)防效以L210最佳（77.9%），其次為微生物菌劑碧苗處理（56.4%）。

3 討論

鐮刀菌根腐病的主要致病菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）和茄病鐮刀菌（Fusarium solani）［8］，各生態(tài)區(qū)域的主要致病菌種類型不同［4-5］。本研究中明確了平頂山市煙草根腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum），該致病菌寄主范圍廣，能侵染多種作物，既可單獨(dú)侵染，亦可與煙草疫霉菌、根結(jié)線蟲混合侵染，造成煙株死亡［34］。

本研究中從煙株根際土壤中分離了1 株對(duì)尖孢鐮刀菌拮抗作用較好的菌株L210，經(jīng)鑒定為液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。沙雷氏菌屬菌株廣泛分布于自然界，是土壤、植物中的常居菌群，其次生代謝產(chǎn)物靈菌紅素（Prodigiosin，PG）可穿過(guò)細(xì)胞膜，直接抑制靶酶，誘導(dǎo)細(xì)胞產(chǎn)生自溶素，使細(xì)胞發(fā)生程序性死亡，在植物病蟲害防治方面具有巨大的應(yīng)用前景和研發(fā)價(jià)值［35-36］。

誘導(dǎo)抗性被認(rèn)為是生物防治作物病害的主要機(jī)制之一，植物抗性相關(guān)防御酶如PPO、POD和PAL活性均可用來(lái)衡量和鑒定植物的抗病性，其主導(dǎo)著生物的新陳代謝、能量轉(zhuǎn)換等催化過(guò)程，與生命活動(dòng)密切相關(guān)。PPO和PAL是苯丙烷類代謝途徑中的關(guān)鍵酶和限速酶，可直接調(diào)控酚酸形成，抑制磷酸化酶、轉(zhuǎn)氨酶、果膠酶等的合成，進(jìn)而防止病原菌繁殖擴(kuò)散；POD 是植物體內(nèi)主要的活性氧清除劑，還能通過(guò)保護(hù)酶蛋白和木質(zhì)素的合成來(lái)抵抗病原菌的入侵［37］。前人研究表明，這3 種酶與玉米對(duì)大斑病的抗性關(guān)系非常密切［38］。本研究中接種生防菌株L210的煙苗，其PPO、POD和PAL等防御酶活性的變化幅度均高于只澆灌清水的處理，尤其以接種10倍發(fā)酵液的活性最高，且在接種后6 d提前達(dá)到防御酶活性高峰，表明接種拮抗菌可誘導(dǎo)煙株抗性相關(guān)酶的表達(dá)，從而有效提高煙株對(duì)煙草根腐病的抗性。

病原真菌尖孢鐮刀菌的細(xì)胞壁以幾丁質(zhì)、纖維素為骨架，故生防細(xì)菌可通過(guò)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶、纖維素酶等胞外水解酶溶解病原真菌細(xì)胞壁，造成其菌絲崩解［39］。本研究中篩選的液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）L210，其發(fā)酵液和細(xì)胞粗提物中均含有幾丁質(zhì)酶和纖維素酶，推測(cè)拮抗菌株L210通過(guò)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶和纖維素酶等抗菌物質(zhì)，改變或降解致病菌細(xì)胞壁，使細(xì)胞發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)，細(xì)胞的滲透壓平衡遭到破壞，從而達(dá)到抑菌目的。掃描電鏡觀察顯示，經(jīng)與L210共培養(yǎng)后，尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）菌絲畸變，細(xì)胞質(zhì)濃縮，部分菌絲壁潰解，進(jìn)一步說(shuō)明拮抗菌L210可作用于真菌細(xì)胞壁，通過(guò)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶、纖維素酶等活性物質(zhì)來(lái)破壞細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，然而其抑菌作用機(jī)理還需進(jìn)一步的研究。

4 結(jié)論

①?gòu)钠巾斏綗焻^(qū)煙草根腐病發(fā)病地塊兒采集成熟期發(fā)病煙株，經(jīng)分離、純化和分子鑒定，確定平頂山市煙草根腐病的病原菌為尖孢鐮刀菌（Fusarium oxysporum）。②從煙草根際土壤中分離、篩選出尖孢鐮刀菌的高效拮抗菌L210，通過(guò)形態(tài)學(xué)、生理生化特征、16S rRNA 初步將其鑒定為腸桿菌科，沙雷氏菌屬的液化沙雷氏菌（Serratia liquefaciens）。③盆栽和大田復(fù)篩試驗(yàn)表明，該菌株L210可有效降低煙草尖孢鐮刀菌根腐病的發(fā)病率和病情指數(shù)，相對(duì)防效較好（100%和77.9%）。④在L210 的發(fā)酵液和組織破碎液中均檢測(cè)到了幾丁質(zhì)酶和纖維素酶，以發(fā)酵液中含量相對(duì)較高。L210菌株發(fā)酵液可溶解病原真菌的細(xì)胞壁，抑制菌絲的生長(zhǎng)發(fā)育，使其干癟扭曲，進(jìn)而失去侵染能力；同時(shí)，L210菌株的發(fā)酵液可顯著誘導(dǎo)提高煙苗中PPO、POD和PAL等防御酶的活性，在接種后第6 天達(dá)到活性高峰，其中以孢子濃度1.0×109cfu/mL的效果最佳。因此，該菌株可以提高煙苗抗病能力，具有較好的生防潛力。