楊元鳳 ，熊高才，黎豫川，羅玉玲，張敬杰

(1貴州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院，貴州 貴陽 550003；2貴州省第三人民醫(yī)院，貴州 貴陽 550000；3貴州中醫(yī)藥大學，貴州 貴陽 550025)

據(jù)現(xiàn)有資料顯示，腎病的種類較多，如慢性腎功能衰竭證、原發(fā)性腎病綜合癥、繼發(fā)性腎病及糖尿病腎病等[1]，其中慢性腎功能衰竭是由多種因素引起的進行性、不可逆的功能性損害，據(jù)統(tǒng)計，慢性腎功能衰竭預后較差，不僅危及患者生命，而且給全球衛(wèi)生保健帶來沉重的負擔[2]，因此尋找新的治療策略尤為重要。近年來中藥因其副作用小、療效好在治療慢性腎功能衰竭上被廣泛應(yīng)用[3-4]。鹿苓安腎顆粒為貴州中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院的協(xié)定處方，是根據(jù)慢性腎功能衰竭證屬氣陰虧虛型的證候擬方，主要由鹿血晶、茯苓、石斛、白術(shù)等藥物組成。且已有相關(guān)研究證實鹿血晶、茯苓、石斛、白術(shù)等在治療腎損傷或腎陰虧虛中均具有顯著的療效[5-10]。根據(jù)《中藥、天然藥物急性毒性研究技術(shù)指導原則》[11]，在鹿苓安腎顆粒藥效研究的基礎(chǔ)上，對鹿苓安腎顆粒進行急性毒性實驗，觀察動物在接受過量鹿苓安腎顆粒所產(chǎn)生的的急性中毒反應(yīng)，為鹿苓安腎顆粒的后續(xù)毒性實驗或臨床使用劑量提供參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

SPF清潔級的Wistar大鼠20只，7～9周齡，雌雄各一半，體重為170～200 g，購買于北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司(生產(chǎn)許可證號為：SCXK(京)2021-0011)。大鼠生長環(huán)境為：12 h/12 h明暗交替，室溫為21～24℃，濕度為：40%～65%，分籠飼養(yǎng)，每籠1只大鼠。

1.2 實驗方法

1.2.1 鹿苓安腎顆粒的制備

茯苓、石斛、白術(shù)三味藥材，裝入2層滅菌過濾袋，加8倍量的水(第一次加水10.5倍)，浸泡1小時，煎煮2次，每次45 min，合并煎液，濾過。濾液常壓濃縮至相對密度為1.25～1.28(70℃)的浸膏，浸膏加入鹿血晶混勻后，與適量可溶性淀粉混合均勻，20目篩制粒，濕顆粒60 ℃干燥3 h，14目篩整粒，制成1000 g顆粒，即得。

1.2.2 急性毒性預實驗

按照半數(shù)急性毒性實驗要求先進行毒性實驗預實驗預測本品的致死量(LD50)。Wistar大鼠20只，標記，稱重，按體質(zhì)量隨機分為鹿苓安腎顆粒組和空白對照組，每組雌、雄各半，禁食不禁水12 h后，給藥組以本品可供灌胃的最大濃度(0.5 g/mL)，大鼠灌胃可承受的最大體積(20 mL/kg)，給藥后自由進食和飲水，對照組給予等容積的蒸餾水，連續(xù)觀察14 d。實驗結(jié)束后根據(jù)每組動物死亡數(shù)量，查詢霍恩氏表(Horn氏)求得大鼠的半數(shù)致死量(LD50)及其95%可信區(qū)間。

在實驗過程中若大鼠未出現(xiàn)任何中毒癥狀或中毒癥狀不明顯，因該劑量遠大于中藥無毒劑量標準(LD50>50 g/kg)，則初步說明鹿苓安腎顆粒無毒副作用或毒副作用不明顯，此時可使用該劑量直接進行正式實驗。若大鼠出現(xiàn)中毒癥狀則需根據(jù)具體結(jié)果，重新設(shè)定給藥梯度。

1.2.3 急性毒性正式實驗

Wistar 大鼠20 只適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，隨機分為正常組與用藥組，每組10只，雌雄各半。用藥組每日間隔6 h分2次給予10 g/kg 鹿苓安腎顆粒灌胃，正常組給予等體積水灌胃，連續(xù)觀察14 d。

1.2.4 觀察指標

每天都對兩組大鼠稱重并記錄，包括進食量以及飲水量。

大鼠14 d觀察期結(jié)束后，摘除眼球取血，使用血常規(guī)分析儀對各組大鼠分別進行血常規(guī)白細胞(WBC)、紅細胞(RBC)、血紅蛋白(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細胞(LYM)的檢測。

1.2.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 22.3統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標準差(x±s)表示，組間數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性預實驗結(jié)果

大鼠灌胃給予鹿苓安腎顆粒后，觀察到用藥組和對照組大鼠活動均減少，30 min 內(nèi)兩組大鼠均迅速恢復正常，飲食飲水正常，觀察期內(nèi)無動物死亡，連續(xù)7 d 觀察中均未見不良反應(yīng)，其背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見異常；未見任何中毒癥狀，無動物死亡，提示本品的安全范圍較大。

2.2 鹿苓安腎顆粒對大鼠體質(zhì)量的影響

如表1所示，雌性用藥組與雌性對照組比較、雄性用藥組與雄性對照組比較，不同時間的大鼠體質(zhì)量差異均無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠體質(zhì)量無影響。

2.3 鹿苓安腎顆粒對大鼠進食量的影響

由表2可見，用藥組與對照組比較，不同時間點雌、雄性大鼠體進食量均無明顯差異(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠進食量無影響。

2.4 鹿苓安腎顆粒對大鼠飲水量的影響

用藥組與對照組比較，各時間點雌、雄性大鼠體飲水量差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠飲水量無影響，見表3。

表1 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠體質(zhì)量的影響(x±s，g)Tab.1 Effect of Luling Anshen granule on body weight of rats

表2 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠進食量的影響(x±s，m/g)Tab.2 Effect of Luling Anshen granule on food intake of rats

表3 鹿苓安腎顆粒急毒實驗對大鼠飲水量的影響(x±s，V/mL)Tab.3 Effect of Luling Anshen granule on water intake of rats

2.5 鹿苓安腎顆粒對大鼠血常規(guī)指標的影響

用藥組與對照組比較，雌、雄性大鼠體白細胞數(shù)(WBC)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白數(shù)(HGB)、血小板(PLT)以及淋巴細胞絕對值(LYM)差異無統(tǒng)計學意義(P均>0.05)，說明給藥后，鹿苓安腎顆粒對大鼠的血常規(guī)指標無影響，詳見表4。

表4 鹿苓安腎顆粒對大鼠血常規(guī)指標量的影響Tab.4 Effect of Luling Anshen granule on blood routine indexes of rats

3 討論

鹿苓安腎顆粒主要由鹿血晶、茯苓、白術(shù)、石斛等中藥組成，石斛又名仙斛蘭韻、不死草、還魂草，其中流蘇石斛是石斛的主要來源之一[8-9]，具益胃生津，滋陰清熱之功。石斛得鹿血晶則津液精血生化有源，鹿血晶得石斛則咸熱之性大減，養(yǎng)陰之力更強，為佐藥。白術(shù)有運脾燥濕、燥濕利水、化濁之效[12-13]，得茯苓則健脾功效更著，茯苓得白術(shù)又增利水滲濕之效，亦為佐藥，綜觀全方，彼此兼顧，互為輔助，相得益彰，共奏養(yǎng)陰生津、健脾益氣之功。鹿血晶、茯苓、白術(shù)、石斛等中藥具有廣泛的藥理作用，臨床應(yīng)用前景廣闊，因此通過動物實驗開展鹿苓安腎顆粒的體內(nèi)急性毒性研究，有利于產(chǎn)品的開發(fā)，以期為臨床鹿苓安腎顆粒的研究應(yīng)用提供新的理論依據(jù)。

在本研究預實驗中，灌胃給予大鼠最大濃度的鹿苓安腎顆粒，發(fā)現(xiàn)在觀察期內(nèi)各組大鼠均無死亡，且各組大鼠背毛、膚色、鼻、眼、口腔分泌物均未見明顯異常，各組均未見不良反應(yīng)和中毒癥狀，這提示鹿苓安腎顆粒的安全范圍較大。接著在急性毒性正式實驗中，我們連續(xù)兩周每天對各組大鼠體質(zhì)量、進食量、飲水量以及血常規(guī)相關(guān)指標進行檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，用藥組與對照組比較，雌、雄性大鼠的體質(zhì)量、進食量、飲水量以及白細胞數(shù)(WBC)、紅細胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白數(shù)(HGB)、血小板(PLT)、淋巴細胞絕對值(LYM)均無明顯差異，提示鹿苓安腎顆粒不影響大鼠體質(zhì)量、進食量、飲水量以及血常規(guī)相關(guān)指標水平，表明鹿苓安腎顆粒無明顯的急性毒性反應(yīng)，臨床使用的安全范圍較大。