亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        中子背散射譜儀在蛋白質(zhì)動力學(xué)研究中的應(yīng)用

        2022-07-12 04:59:44顧旭東郭宏宇儲祥薔
        現(xiàn)代物理知識 2022年1期
        關(guān)鍵詞:背散射譜儀中子

        顧旭東 郭宏宇 儲祥薔

        (1.中國工程物理研究院研究生院 100193;2.中國科學(xué)院高能物理研究所 100049;3.散裂中子源科學(xué)中心 523803)

        蛋白質(zhì)是美妙生命世界的基礎(chǔ),承擔(dān)了生物體內(nèi)絕大多數(shù)的工作,其表現(xiàn)出的多樣性與專一性彰顯了大自然的深奧與智慧。然而,要真正理解生命的奧秘,就要揭開蛋白質(zhì)這一復(fù)雜生物大分子的神秘面紗。蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域雖然存在重大的機遇,但也面臨巨大的挑戰(zhàn)①。蛋白質(zhì)是由約20種氨基酸組成的肽鏈經(jīng)過折疊、組裝構(gòu)成的具有多級結(jié)構(gòu)的生物大分子??臻g結(jié)構(gòu)對蛋白質(zhì)的功能具有決定性作用,但是僅依靠蛋白質(zhì)的靜態(tài)結(jié)構(gòu)并不能完全理解蛋白質(zhì)的工作機理。這是因為包括整體柔性、結(jié)構(gòu)域運動、局部受限運動在內(nèi)的蛋白質(zhì)的動力學(xué)行為也會對蛋白質(zhì)的功能起到重大的影響。因此,從靜態(tài)結(jié)構(gòu)-動力學(xué)行為-生物學(xué)功能相互關(guān)聯(lián)的角度去研究蛋白質(zhì),可以加深對蛋白質(zhì)分子機理的認識,并已成為研究者之間的共識②③。在蛋白質(zhì)動力學(xué)的研究中,中子散射憑借許多獨特的優(yōu)勢占據(jù)了不可替代的地位。

        中子在蛋白質(zhì)研究中最大的優(yōu)勢在于中子對氫元素的高度敏感性。氫原子是蛋白質(zhì)中數(shù)目最多的原子,參與形成的氫鍵深刻地影響著蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)和運動方式。然而氫原子只有一個電子,很難被X 光、電子等實驗手段檢測到。不同的是,中子直接被原子核散射,對氫原子有非常好的響應(yīng)。氫原子對中子的非相干散射截面比生物體系中常見的其他原子高一個數(shù)量級④。非相干散射信號本質(zhì)上反映了原子的自相關(guān)性,因而非常適合動力學(xué)的研究。此外,中子具有分辨同位素的能力且對氫和氘的散射截面差異巨大。用氘原子取代蛋白質(zhì)或溶劑中的氫原子給實驗設(shè)計提供了一個新的自由度,并且蛋白質(zhì)的部分氘代技術(shù)已使得研究特定位點的運動成為可能。中子因其高穿透力、電中性、低能量的特點,相較于X光和冷凍電鏡,更易在不破壞蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的前提下完成對其結(jié)構(gòu)及動力學(xué)的原位探測。

        蛋白質(zhì)在不同時間空間尺度上的變化過程可用不同的中子散射技術(shù)進行研究,如圖1 所示。發(fā)生在納秒到微秒時間尺度和原子到分子空間尺度的結(jié)構(gòu)域動力學(xué)過程,可以通過中子自旋回波技術(shù)研究;發(fā)生在皮秒到納秒時間尺度上的分子內(nèi)部的弛豫運動,可以用準(zhǔn)彈性中子散射技術(shù)研究;發(fā)生在飛秒到皮秒時間尺度的原子振動帶來的聲子激發(fā),可以用非彈性中子散射技術(shù)觀測。這些不同空間尺度上的動態(tài)過程共同實施促成了蛋白質(zhì)的功能,可根據(jù)實驗?zāi)繕?biāo)選擇合適的實驗技術(shù)來研究不同時間尺度的動態(tài)過程。

        圖1 用以研究蛋白質(zhì)不同時間空間尺度結(jié)構(gòu)和運動信息的中子散射技術(shù)⑤

        準(zhǔn)彈性中子散射技術(shù)廣泛使用背散射譜儀研究蛋白質(zhì)體系的動力學(xué)問題。中子背散射譜儀(NBS)具有高能量分辨率以及與蛋白質(zhì)局部弛豫運動相當(dāng)?shù)挠^測時間窗口(ps-ns)。蛋白質(zhì)在這一時間尺度上的弛豫運動被認為與分子活性高度相關(guān)⑥。國際上已有的中子背散射譜儀包括:澳大利亞核科學(xué)和技術(shù)組織(ANSTO)的EMU(圖2),法國勞厄-朗之萬研究所(ILL)的IN13 和IN16B,德國尤利希中子科學(xué)中心(JCNS)的SPHERES,美國國家標(biāo)準(zhǔn)局中子研究中心(NCNR)的高通量背散射譜儀(HFBS),美國橡樹嶺國家實驗室(ORNL)的BASIS,英國散裂中子源(ISIS)的IRIS,日本加速器研究中心(J-PARC)的DNA 等。背散射譜儀的數(shù)量在全球范圍內(nèi)仍顯得稀少,這使得其實驗機時成為一種寶貴的研究資源。幸運的是位于東莞的中國散裂中子源(CSNS)正在籌建中國第一臺中子背散射譜儀,這將大幅推動國內(nèi)中子科學(xué)和相關(guān)領(lǐng)域的發(fā)展。

        圖2 EMU譜儀現(xiàn)場照片⑦

        一、背散射譜儀的原理

        中子準(zhǔn)彈性散射通過記錄中子被樣品散射前后的波矢變化(圖3)和能量轉(zhuǎn)移來獲得樣品的空間和運動信息。一般通過不同位置的3He探測器記錄散射前后中子出射方向相對入射方向的變化來獲得波矢轉(zhuǎn)移Q,而能量轉(zhuǎn)移通過記錄入射和出射的中子波長來獲得。

        圖3 波矢轉(zhuǎn)移示意圖

        在脈沖中子源上大多使用飛行時間技術(shù)確定中子波長,在反應(yīng)堆源上大多使用布拉格衍射(如下式)確定中子波長

        背散射譜儀高分辨率的實現(xiàn)利用了布拉格衍射束的波長擴散Δλ隨散射角2θ增大至180°而減小的事實,正如下式的布拉格定律的誤差傳遞公式所顯示的那樣⑧。

        公式中d表示晶面間距。在背散射情況下,θ接近90°,散射角帶來的誤差接近于0,因而能量分辨率最高。包括HFBS,Emu 在內(nèi)的大多數(shù)背散射譜儀使用了曲面Si(111)晶體作為入射中子的單色器和出射中子的能量分析器,這樣可以實現(xiàn)小于1μeV的能量分辨率⑨。如果使用平面Si(111)晶體,可進一步提高分辨率,但會犧牲通量并且導(dǎo)致分辨率譜線偏離高斯分布。在ILL的IN16B上也提供了GaAs作為進一步提高分辨率的選項⑩。

        圖4以NCNR的HFBS譜儀為例展示了背散射譜儀的原理。經(jīng)過多普勒單色器的能量為E=E0+ΔE的入射中子被樣品散射后,垂直入射到分布于球形空間的單晶分析陣列,根據(jù)布拉格定律只有能量為的中子被分析晶體反射,其余能量的中子穿過分析器被后方的吸收材料吸收。被分析器反射后的中子被樣品附近的探測器收集到。由此可以測得中子能量轉(zhuǎn)移為ΔE,散射矢量Q可以由入射波長和散射角度算出。由背散射譜儀的工作原理可知,背散射譜儀在一個時間點只能探測一個能量轉(zhuǎn)移的信號。為了得到能量轉(zhuǎn)移譜,需要隨時間改變?nèi)肷渲凶拥哪芰?,在反?yīng)堆源上這項工作由多普勒單色器完成。多普勒單色器使用與分析器相同的單晶,在靜止條件下,分析器反射的中子能量為E0,此時得到的是彈性散射信號。通過改變晶體溫度以改變晶面間距d或是將多普勒單色器沿束流方向做周期性機械運動,可以調(diào)制反射中子的能量為E=E0+ΔE。背散射譜儀探測能量覆蓋的范圍±ΔEmax取決于多普勒單色器可以提供的移動速度或溫度范圍⑦。

        圖4 背散射譜儀HFBS原理示意圖?

        在散裂中子源上,由于束流本身帶有能量展寬的脈沖信號,可用長導(dǎo)管分離不同速度的中子并通過飛行時間計算出能量。由于調(diào)制入射中子能量方式的差異,通常飛行時間中子背散射譜儀(TOF-NBS)會有更大的測量能量范圍?。圖5 展示了英國散裂中子源上的TOF-NBS譜儀IRIS的布局示意圖。

        圖5 英國散裂中子源上的TOF-NBS譜儀IRIS的布局示意圖?

        二、數(shù)據(jù)分析原理

        (1)能域分析:

        中子背散射譜儀得到的信號是中子計數(shù)關(guān)于能量轉(zhuǎn)移ΔE和散射矢量Q的函數(shù),通過空樣品皿矯正、探測器效率矯正、對Q和ΔE按需求重新分組(rebin)、歸一化等步驟,可以獲得動態(tài)結(jié)構(gòu)因子S(Q,ω),其中ω與能量轉(zhuǎn)移ΔE的關(guān)系為ΔE=?ω。動態(tài)結(jié)構(gòu)因子包含了樣品的空間約束和動力學(xué)在內(nèi)的信息?。背散射譜儀的能量分辨率在μeV 量級,能量轉(zhuǎn)移的范圍可從μeV到meV,對應(yīng)的時間尺度為皮秒到納秒,這個尺度主要觀測的是蛋白質(zhì)的局部弛豫運動,例如蛋白質(zhì)主鏈和側(cè)鏈的擴散和旋轉(zhuǎn),這些運動信息是蛋白質(zhì)的固有特征,與蛋白質(zhì)功能的實現(xiàn)息息相關(guān)。

        為了深入分析動態(tài)結(jié)構(gòu)因子中的信息,通常的處理方法是將S(Q,ω)拆分成兩部分的貢獻:

        其中A(Q)被稱為彈性非相干結(jié)構(gòu)因子(EISF),提供了實驗觀測的時間窗口內(nèi)原子所受空間約束的信息。這些原子不與中子發(fā)生能量交換或其運動不在時間觀測窗口內(nèi),因此反映在動態(tài)結(jié)構(gòu)因子中的貢獻是一個代表彈性散射的δ函數(shù)。由于背散射能譜觀測到的主要是氫的非相干信號,因此描述EISF 的模型通??紤]了一個原子在特定約束條件下的運動,比如在無法穿透的球殼中的自由擴散,拋物線勢,在圓上的特定位點的跳躍等。L(Γ,ω)包含了時間窗口內(nèi)所有運動原子的信息,通??梢杂靡粋€或多個洛倫茲函數(shù)來描述。洛倫茲函數(shù)的半高半寬(HWHM)Γ(Q)稱為有效弛豫常數(shù)。在原子做最簡單的菲克擴散的情況下,有?!豎2。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)中的原子處在一個復(fù)雜的能量景觀下,Γ的形式也會發(fā)生顯著的變化,為此有許多模型被提出,包括跳躍擴散模型?,在高斯勢阱中的擴散模型?,拉伸指數(shù)衰減模型KWW函數(shù)?等。

        (2)時域分析:

        將動態(tài)結(jié)構(gòu)因子S(Q,ω)作ω →t的傅里葉變換到時域(圖6),可以獲得中間散射函數(shù)(Intermediate scattering function,ISF)F(Q,t),ISF 是一種密度-密度關(guān)聯(lián)函數(shù),它的物理含義表示了氫原子在t時刻的位置與它自身在0時刻的位置的關(guān)聯(lián)性。這一函數(shù)為研究者揭示蛋白質(zhì)分子弛豫動力學(xué)提供了重要工具。值得一提的是,中間散射函數(shù)可以通過分子動力學(xué)模擬直接獲得,這使得背散射譜儀的實驗數(shù)據(jù)可以方便地與模擬結(jié)果聯(lián)系起來。

        圖6 飛行時間中子背散射(TOF-NBS)譜儀BASIS上測得的能域數(shù)據(jù)(a)動態(tài)結(jié)構(gòu)因子S(Q,ω)可以通過傅里葉變換轉(zhuǎn)換成時域中的中間散射函數(shù)ISF(b)?

        在時域分析中也有一系列模型被提出。由于蛋白質(zhì)和玻璃形成液體在許多方面有著共同的動力學(xué)行為,因此可以借用描述液體的模態(tài)耦合理論?(Mode-Coupling Theory,MCT)來描述蛋白質(zhì)的動力學(xué)行為,這種方法已經(jīng)在多項研究中被證明有效?-?。按照MCT理論,ISF可以用以下漸進式擬合:

        其中τβ和τα分別是β和α弛豫的特征時間,分別對應(yīng)了蛋白質(zhì)動態(tài)過程中的局域運動和結(jié)構(gòu)域運動,中子背散射譜儀的時間觀測尺度(ps-ns)通常比α弛豫的時間尺度(μs-ms)短得多,因此α弛豫項近似為1。從MCT 模型中得到的弛豫時間是描述蛋白質(zhì)動力學(xué)的重要參數(shù),可以幫助我們理解蛋白質(zhì)的作用機理。

        (3)均方位移(MSD):

        在不依賴模型的分析方法中,利用背散射譜儀的彈性掃描模式對全體原子均方位移(MSD)進行測量也可以提供關(guān)于內(nèi)部結(jié)構(gòu)所受空間約束的信息。均方位移記錄了蛋白質(zhì)中原子在一段時間的運動后偏離初始位置的程度,由于中子準(zhǔn)彈性散射觀測蛋白質(zhì)主要得到的是氫的非相干信號,因此實驗所得的MSD代表了所有氫原子運動距離平方的平均。MSD 可以從德拜沃倫因子(Debye-Waller factor)計算得出,德拜沃倫因子的表達式為

        實驗中德拜沃倫因子可以通過計算彈性散射強度Iel(Q,T,ω=0)和它在低溫極限下的值Iel(Q,T=0,ω=0)的比獲得。

        作ln(SH(Q,ω=0))vs.Q2圖,對小Q部分線性擬合所得的斜率即MSD,只取小Q部分?jǐn)M合是因為德拜沃倫因子的推導(dǎo)中含有高斯近似,高斯近似只在小Q范圍內(nèi)成立?。

        MSD在生物學(xué)中又稱為B因子,可以表征蛋白質(zhì)的不同部分的相對振動?。盡管MSD 得到的信息是平均的,無法得到底層的動力學(xué)信息,但可以借此表征蛋白質(zhì)整體的“柔軟程度”?。MSD提供了一種模型無關(guān)的監(jiān)測變化的手段,允許我們實時,快速地測量升溫和降溫過程中的動力學(xué)信息。這一點彌補了準(zhǔn)彈性散射達到統(tǒng)計質(zhì)量的數(shù)據(jù)所需的時間過長的缺陷,為我們提供了一種有力的研究手段。

        三、應(yīng)用舉例

        隨著中子背散射譜儀在蛋白質(zhì)研究中的強大功能被越來越多的研究者認識到,近年來依托背散射譜儀的研究工作在該領(lǐng)域產(chǎn)生了一大批有價值的研究成果。以下對幾個具有前景和參考價值的工作做些簡要介紹。

        儲祥薔研究組研究了一種來自深海嗜熱菌的寡聚蛋白?。在NCNR的高通量背散射譜儀(HFBS)和飛行時間譜儀(DCS)上,他們利用準(zhǔn)彈性中子散射技術(shù)研究了目標(biāo)蛋白在100 ps~2 ns時間尺度上的弛豫動力學(xué)。結(jié)果揭示:該嗜熱蛋白相比于作為對照物的嗜溫蛋白溶菌酶在高壓條件下具有更好的結(jié)構(gòu)靈活性和快得多的弛豫運動。這一結(jié)果歸因于嗜熱蛋白的高度對稱和封閉的寡聚結(jié)構(gòu),導(dǎo)致高壓條件下嗜熱蛋白的能量景觀的扭曲效應(yīng)與嗜溫蛋白顯著不同(圖7)。這項工作為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性提供了實驗依據(jù),相關(guān)研究發(fā)表在2015年的PNAS上。

        圖7 嗜熱蛋白(IPPase)和嗜溫蛋白(HEWL)變性相圖及能量景觀示意圖?

        法國的Giorgio Schiro 研究小組利用中子準(zhǔn)彈性散射研究了結(jié)合水的平移擴散與本質(zhì)無序蛋白功能實現(xiàn)的關(guān)聯(lián)性?。結(jié)合水和蛋白質(zhì)運動的關(guān)聯(lián)性已經(jīng)多次被發(fā)現(xiàn),理解表面結(jié)合水的生物效應(yīng)對深入刻畫蛋白質(zhì)動力學(xué)過程具有重大意義④。這項工作利用中子散射實驗的優(yōu)勢,研究蛋白質(zhì)和結(jié)合水聯(lián)系中的重要因素氫鍵,實驗是在德國JSNC 的背散射譜儀SPHERES上完成的。研究發(fā)現(xiàn)結(jié)合水的平動成分在240K附近的蛋白質(zhì)動力學(xué)轉(zhuǎn)變溫度處明顯增加,提出了蛋白質(zhì)表面結(jié)合水的擴散運動可以促進蛋白質(zhì)實現(xiàn)功能所需的大振幅運動的觀點。

        2019 年日本的Fujiwara 等在日本加速器研究中心(J-PARC)的材料與生命科學(xué)實驗設(shè)施(MLF)的飛行時間背散射譜儀DNA 上?結(jié)合準(zhǔn)彈性中子散射和小角X 光散射(SAXS)研究了一種可以合成淀粉狀纖維的無定型蛋白αSyn。αSyn 合成的淀粉狀纖維被認為與帕金森病和其他細胞核病有關(guān),因此對αSyn 機制的研究對于闡明這些疾病的發(fā)病機制有重大的意義。實驗結(jié)果表明,αSyn纖維的形成不僅需要局域運動,而且還需要N、C 端的鏈運動,使中心NAC結(jié)構(gòu)域暴露。這一研究給開發(fā)治療帕金森病的新型藥物帶來了靈感,不同于此前以NAC區(qū)域為靶點的思路,可以選擇蛋白質(zhì)N端和C端作為藥物靶點,通過抑制鏈端運動來阻止淀粉狀纖維的合成。

        四、總結(jié)與展望

        近年來,中子背散射譜儀的設(shè)計、配套軟件以及分析理論都得到進一步的發(fā)展,使得準(zhǔn)彈性中子散射實驗技術(shù)可以惠及更多科研工作者。中子背散射對氫原子敏感、其觀測尺度與蛋白質(zhì)局部弛豫相匹配、又具有無損原位觀測的能力,這些特點使得中子背散射技術(shù)在蛋白質(zhì)研究上具有其他實驗手段不具備的突出優(yōu)勢。中國的第一臺中子背散射譜儀作為散裂中子源二期工程的一部分已列入國家十四五規(guī)劃,有望在2025 年建成??梢灶A(yù)見CSNS的中子背散射譜儀將驅(qū)動我國相關(guān)領(lǐng)域的研究進入快車道。利用中子背散射譜儀進行蛋白質(zhì)動力學(xué)相關(guān)的研究,預(yù)期在以下幾個方向?qū)⑷〉弥匾M展:(1)中子準(zhǔn)彈性散射技術(shù)和氘代技術(shù)結(jié)合研究蛋白質(zhì)特定位點的動力學(xué)過程,例如藥物分子的定向投放酶?,與底物的特異性結(jié)合等;(2)蛋白質(zhì)表面結(jié)合水動態(tài)過程與功能的關(guān)聯(lián)性研究;(3)中子背散射譜儀與自旋回波、飛行時間譜儀結(jié)合研究蛋白質(zhì)全時間尺度的動態(tài)過程,有助于闡述蛋白質(zhì)的工作機理。

        猜你喜歡
        背散射譜儀中子
        一種磁共振成像譜儀數(shù)字化發(fā)射系統(tǒng)設(shè)計
        新型X波段多功能EPR譜儀的設(shè)計與性能
        基于Casper和Simulink的射電譜儀信號處理系統(tǒng)設(shè)計與實現(xiàn)
        3D打印抗中子輻照鋼研究取得新進展
        基于PLC控制的中子束窗更換維護系統(tǒng)開發(fā)與研究
        DORT 程序進行RPV 中子注量率計算的可靠性驗證
        基于PSO-GRG的背散射模式掃描電鏡的數(shù)字處理及應(yīng)用
        中子深度定量分析的相對分析法
        計算物理(2014年2期)2014-03-11 17:01:27
        小型移動背散射X射線安全檢查設(shè)備簡介
        放射性氙測量中的天然源γ譜儀校準(zhǔn)技術(shù)
        久久AV老司机精品网站导航| 天天干天天日夜夜操| 亚洲精品蜜夜内射| 爱情岛论坛亚洲品质自拍hd| 白白色发布在线播放国产| 国产精品亚洲最新地址| 亚洲综合极品美女av| 天天夜碰日日摸日日澡| 国产农村妇女毛片精品久久久| 国产精品女同一区二区久| 亚洲天堂精品一区入口| 亚洲一区二区三区无码久久| 人妻无码中文人妻有码| 亚洲毛片av一区二区三区| av天堂最新在线播放| 看黄a大片日本真人视频直播| 国产日韩欧美在线| 综合人妻久久一区二区精品| 一区二区三区人妻少妇| 亚洲av成人一区二区三区| 国产精品综合久久久久久久免费| 日本一区二区视频免费在线观看| 国产精品久久国产精麻豆99网站 | 亚洲1区第2区第3区在线播放| 天堂а在线中文在线新版| 亚洲精品久久久久高潮| 美女扒开内裤露黑毛无遮挡| 亚洲精品成人无百码中文毛片| 欧美极品jizzhd欧美| 1精品啪国产在线观看免费牛牛| 日本高清成人一区二区三区| 国产av无码专区亚洲版综合| 大伊香蕉在线精品视频75| 少妇特殊按摩高潮惨叫无码| 国产亚洲成人精品久久久| 国产免费av片无码永久免费| 午夜亚洲国产理论片亚洲2020| 风间由美中文字幕在线| 成人中文乱幕日产无线码 | 国产成人精品一区二三区在线观看| 欧美黑人又粗又大xxxx|