侯鵬霞， 王建東#， 安 魏， 王亞軍， 梁小軍

（1.寧夏農(nóng)林科學(xué)院動物科學(xué)研究所，寧夏銀川750002；2.寧夏農(nóng)林科學(xué)院枸杞科學(xué)研究所，寧夏銀川750002）

寧夏是全國枸杞主產(chǎn)區(qū)， 截至2020 年底，全區(qū)枸杞種植面積35 萬畝，鮮果產(chǎn)量26 萬t。 枸杞為茄科， 屬多年生落葉灌木， 具有很強(qiáng)的萌蘗能力，在生長期需要不斷的抹芽、剪枝；休眠期也需要對樹體進(jìn)行整形修剪。 枸杞枝條年剪枝量可達(dá)20 萬t 以上，但其絕大多數(shù)用于焚燒、廢棄，少數(shù)用于開展扦插育苗、 栽培基質(zhì)的研究 （陳亮等，2015），造成占用土地資源和環(huán)境污染。

枸杞枝條含有粗蛋白質(zhì)、粗纖維、多糖等多種營養(yǎng)物質(zhì)（馮海萍等，2017），其中枸杞多糖、總黃酮等活性成分能夠提高動物機(jī)體免疫力。 研究發(fā)現(xiàn)， 枸杞殘次果含有枸杞多糖是一種天然免疫調(diào)節(jié)劑，可誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生免疫球蛋白、細(xì)胞因子等（王建東等，2018），奶牛日糧中添加枸杞枝條粉能夠提高奶產(chǎn)量及乳品質(zhì)（梁小軍等，2008）。但枸杞枝條木質(zhì)堅(jiān)硬，難以消化，且適口性差，直接飼喂反芻動物消化率較低。 陳志龍等（2020）將枸杞枝條粉碎添加乳酸菌、 纖維素酶和酵母菌進(jìn)行青貯調(diào)制，結(jié)果表明青貯后雖可一定程度改善其飼用價(jià)值，但降低了枸杞枝條功能性物質(zhì)枸杞多糖和黃酮的含量。本試驗(yàn)將枸杞枝條進(jìn)行生物發(fā)酵處理后飼喂育肥牛，研究枸杞枝條發(fā)酵飼料對肉牛育肥效果及免疫性能的影響，以期為枸杞枝條飼料化開發(fā)利用的可行性提供基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 枸杞枝條生物發(fā)酵處理 參考劉楊等（2019）方法進(jìn)行枸杞枝條生物發(fā)酵處理，其營養(yǎng)成分見表1。

表1 枸杞枝條發(fā)酵飼料營養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）%

1.2 主要儀器 酶標(biāo)儀（SM-3），北京天石天力公司產(chǎn)品；自動洗板機(jī)（ST360W），上?？迫A公司產(chǎn)品；電熱恒溫器（HH-W21-600），天津泰斯特有限公司產(chǎn)品；離心機(jī)（TDL80-2B），上海安亭科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；DFM-96 r-放射免疫計(jì)數(shù)儀，合肥眾成機(jī)電。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選擇健康、體重400 kg 左右的西門塔爾雜交牛40 頭，隨機(jī)分為4 組，每組10 頭，對照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2 組、試驗(yàn)3 組分別在基礎(chǔ)日糧中添加1.95、2.95、3.95 kg/頭枸杞枝條發(fā)酵飼料，預(yù)飼期10 d，正試期60 d。 試驗(yàn)牛的基礎(chǔ)日糧根據(jù)育肥肉?，F(xiàn)階段營養(yǎng)需要結(jié)合養(yǎng)殖場實(shí)際生產(chǎn)配制，干物質(zhì)采食量11.50 kg?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平見表2。 各組牛均采用全混合日糧的飼養(yǎng)模式。

表2 育肥?；A(chǔ)日糧組成及營養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)）

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 增重 試驗(yàn)開始及第30、60 天 （結(jié)束）分別對育肥牛空腹稱重，計(jì)算平均日增重。平均日增重=（試驗(yàn)后體重-試驗(yàn)前體重）/試驗(yàn)天數(shù)； 料重比=日干物質(zhì)采食量/平均日增重。 每日準(zhǔn)確稱量飼料投喂量，剩余料，做好記錄。

1.4.2 免疫指標(biāo) 試驗(yàn)開始、 結(jié)束分別尾靜脈采血5 mL， 靜置，2000 r/min 離心10 min， 收集血清，-20 ℃保存待測。 測定免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）；外周血液免疫因子IFN- r、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-8、IL-13含量，嚴(yán)格按照試劑盒說明書步驟操作檢測，試劑盒由上海科淘生物科技中心生產(chǎn)。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用Excel 2010 對數(shù)據(jù)進(jìn)行初步處理，SAS 8.2 軟件中的ANOVA 進(jìn)行方差分析和LSD 多重比較，結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，P< 0.05 為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛增重的影響由表3 可見， 育肥牛初始體重各組別間差異不顯著（P> 0.05），試驗(yàn)30、61 d 體重出現(xiàn)差異；平均日增重試驗(yàn)組均高于對照組，其中試驗(yàn)2 組、試驗(yàn)3 組分別較對照組提高41.41%和37.37%，差異顯著（P< 0.05）。 但試驗(yàn)組隨著枸杞枝條發(fā)酵飼料增加平均日增重沒有呈現(xiàn)線性上升； 料重比以試驗(yàn)2 組最低。

表3 育肥牛增重情況

2.2 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛血清免疫指標(biāo)的影響 由表4 可見，試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2 組IgA 含量分別較對照組提高47.74%、14.58%，試驗(yàn)1 組、試驗(yàn)2 組IgG 含量分別較對照組提高30.20%、15.10%， 試驗(yàn)1 組IgM 含量較對照組提高22.09%，差異均達(dá)到了極顯著水平（P< 0.01）。 但試驗(yàn)組隨著枸杞枝條發(fā)酵飼料添加量增加肉牛血清免疫球蛋白含量呈降低趨勢，試驗(yàn)1 組> 試驗(yàn)2 組> 試驗(yàn)3 組，其中，試驗(yàn)3 組顯著（P< 0.05）或者極顯著（P< 0.01）低于試驗(yàn)1 組和試驗(yàn)2 組。

表4 育肥牛血清免疫球蛋白測定結(jié)果

2.3 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛血清細(xì)胞因子的影響 由表5 可見， 試驗(yàn)組IL-2、IL-4、IL-13含量與對照組差異不顯著（P> 0.05），但試驗(yàn)組隨著發(fā)酵枸杞枝條飼料添加量增加呈降低趨勢，其中試驗(yàn)3 組較試驗(yàn)1 組分別降低了10.28%、10.36%和28.35%，差異達(dá)到了顯著（P< 0.05）或極顯著水平 （P< 0.01）；IL-8 含量各組別間差異不顯著 （P> 0.05）；TNF-α、IFN-γ 含量各組別間差異不顯著（P> 0.05）。

表5 育肥牛血清細(xì)胞因子含量測定結(jié)果

3 討論

3.1 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛增重的影響

中草藥多糖可作為優(yōu)勢 “碳源” 調(diào)控機(jī)體微生態(tài)，改善腸道健康，提高養(yǎng)分利用率（張麗萍等，2018）。 佘祿明等（2019）研究報(bào)道，斷奶仔豬添加枸杞多糖400 mg/kg 能極顯著提高日均增重。劉亞娟等（2018）研究報(bào)道，獺兔飼糧中添加1%的枸杞多糖可有效促進(jìn)生長發(fā)育， 提高生產(chǎn)性能。 而發(fā)酵飼料含有大量有機(jī)酸、酶、胞外多糖等代謝產(chǎn)物， 可增加飼料適口性同時(shí)也能改善胃腸道微環(huán)境， 促進(jìn)腸道的健康和營養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收， 提高動物生長性能 （史蓉等，2018；Lemh 等，2016）?？籽┩龋?020）研究報(bào)道，肉牛日糧添加底物為50%米糠+50%麩皮發(fā)酵飼料組日增重較對照組顯著提高了18.92%。 本研究中枸杞枝條經(jīng)過發(fā)酵，具有酒香味和微酸味，改善了適口性， 測得試驗(yàn)組肉牛平均日增重均高于對照組， 這可能與日糧添加了發(fā)酵枸杞枝條飼料，增加了干物質(zhì)采食量有關(guān)，與上述研究結(jié)果一致。 但試驗(yàn)組隨著枸杞枝條發(fā)酵飼料添加平均日增重沒有呈現(xiàn)線性上升， 以試驗(yàn)2 組平均日增重（1.40 kg）最高，較對照組提高了41.41%，這可能與本研究中肉牛日糧營養(yǎng)已經(jīng)滿足增重需求， 同時(shí)飼料中多糖等有效成分發(fā)揮作用有關(guān)。

3.2 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛血清免疫指標(biāo)的影響 IgA、IgG 和IgM 是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分， 其含量的上升預(yù)示著體液免疫啟動，其中，IgG 是血清中免疫球蛋白的主要成分，約占血清中免疫球蛋白的75%， 具有調(diào)節(jié)機(jī)體代謝、免疫力及抗感染等多種功能（王麗群等，2014；周順伍，2008）。 植物多糖可以誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生免疫球蛋白，繼而增強(qiáng)機(jī)體免疫功能。 其中， 枸杞多糖能夠通過激活免疫細(xì)胞和誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌， 進(jìn)一步激活機(jī)體的非特異性免疫應(yīng)答和特異性免疫應(yīng)答（邵偉等，2021）。 王啟菊等（2016）研究報(bào)道，藏羊飼料中添加2%枸杞可顯著提高血清中IgA、IgM 和IgG 水平；Long 等（2020）研究表明，飼糧添加2 g/kg 的枸杞多糖可增強(qiáng)肉雞抗氧化能力和免疫性能。 本研究中，日糧添加發(fā)酵枸杞枝條， 育肥牛血清免疫球蛋白含量試驗(yàn)1 組高于對照組， 達(dá)到了極顯著水平，與上述研究結(jié)果一致，說明發(fā)酵枸杞枝條飼料具有的多糖等有效成分含量， 提高了肉牛機(jī)體免疫力； 但試驗(yàn)組隨著發(fā)酵枸杞枝條飼料添加量增加肉牛血清免疫球蛋白含量降低， 呈試驗(yàn)1 組> 試驗(yàn)2 組> 試驗(yàn)3 組趨勢，這可能是因?yàn)殍坭街l發(fā)酵飼料本身營養(yǎng)成分中蛋白含量較低，只是有效成分發(fā)揮了作用，為了充分利用其有效的功能性營養(yǎng)成分， 肉牛日糧中需控制添加量或者適當(dāng)提高日糧蛋白含量。

3.3 枸杞枝條發(fā)酵飼料對育肥牛血清細(xì)胞因子的影響 動物血清中免疫細(xì)胞因子不同程度地反映了機(jī)體健康狀況， 在機(jī)體炎癥和抗炎過程中發(fā)揮重要作用（胡迎利等，2005）。 白介素是由多種細(xì)胞產(chǎn)生， 可以作用于多種細(xì)胞且具有重要調(diào)節(jié)作用而統(tǒng)一命名的一類細(xì)胞因子。 其中，IL-4 是一種具有多種生物效應(yīng)的細(xì)胞因子，如對于B 細(xì)胞、T 細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和造血細(xì)胞都有免疫作用， 可以增強(qiáng)IgG、IgE 水平，進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞免疫；IL-2 激活和促進(jìn)T 細(xì)胞，是一種淋巴因子，兩者具有抗病毒、抗腫瘤、增強(qiáng)機(jī)體免疫的功能。 研究表明，架子牛飼喂枸杞多糖免疫增效劑7 d，可提高免疫球蛋白水平，促進(jìn)細(xì)胞因子的分泌，激活體內(nèi)淋巴細(xì)胞和白細(xì)胞，提高機(jī)體免疫力（馬吉鋒等，2019）；圍產(chǎn)期奶牛飼喂枸杞多糖免疫增效劑7 d，可增加抗體水平和細(xì)胞因子分泌， 提高奶牛機(jī)體免疫力 （王建東，2018）。 本研究中，育肥牛日糧添加枸杞枝條發(fā)酵飼料對血清IL-2、IL-4、IL-13 含量均無顯著影響，與上述結(jié)果相比效果不明顯，可能是上述試驗(yàn)直接添加了枸杞多糖， 而本研究是對枸杞枝條進(jìn)行了發(fā)酵， 本身的枸杞有效成分含量差異較大。 且試驗(yàn)組隨著發(fā)酵枸杞枝條飼料添加量增加免疫細(xì)胞因子均呈降低趨勢， 進(jìn)一步表明枸杞枝條可進(jìn)行發(fā)酵處理飼料化利用，但育肥牛日糧添加量不宜過高。

4 結(jié)論

枸杞枝條經(jīng)過生物發(fā)酵育肥肉牛，能夠提高肉牛育肥性能及機(jī)體免疫性能， 但添加量不宜過高，本研究中以不超過2.93 kg/d·頭為宜。 為枸杞枝條有效的飼料化利用的可行性提供了基礎(chǔ)。