劉 婷，靳 燁，要 鐸，張艷妮，王宏迪，蘇 琳，田建軍，杜 霞，段 艷※

（1. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，呼和浩特 010018；2. 內(nèi)蒙古烏拉特中旗農(nóng)牧和科技局，烏拉特中旗 015300）

0 引 言

近年來中國對于草場保護(hù)十分重視，大多傳統(tǒng)的放牧方式已被集中圈養(yǎng)所取代。飼養(yǎng)方式的轉(zhuǎn)變不僅可以發(fā)展飼養(yǎng)規(guī)模，又可減少環(huán)境污染和破壞。蘇尼特羊是中國蒙古羊的優(yōu)良品種，因其具有適應(yīng)能力強、營養(yǎng)價值高、膻味小、肉嫩味美等特點得到牧民及消費者的廣泛認(rèn)可，具有極大的研究價值。為保障羊肉品質(zhì)在圈養(yǎng)條件下不劣化，提高圈養(yǎng)羊肉品質(zhì)將成為待解決的首要問題。益生菌能替代抗生素添加到動物飼料中，提高畜禽生產(chǎn)效益，促進(jìn)動物機體代謝進(jìn)而改善肉品質(zhì)。益生菌中乳酸菌可以提高機體的抗氧化能力，減少PSE（Pale,Soft, Exudative）肉的產(chǎn)生，能夠減少腸道中胺、硫化氫等有害代謝產(chǎn)物的生成，從而改善肉品風(fēng)味。植物乳桿菌（）是乳酸菌的一種，能與腸道中其他細(xì)菌協(xié)同作用，爭奪利于腸道病原菌生長的營養(yǎng)物質(zhì)，促進(jìn)自身定殖并抑制部分致病菌繁殖，研究表明，植物乳桿菌能夠應(yīng)用于飼料及養(yǎng)殖生產(chǎn)中。研究表明，益生菌能提高育肥豬的生長性能，改善了腸道菌群多樣性。程光民等研究發(fā)現(xiàn)飼喂植物乳桿菌有利于提高杜泊綿羊生長性能、屠宰性能和肌肉品質(zhì)。李穩(wěn)穩(wěn)等基于高通量測序發(fā)現(xiàn)益生菌能夠調(diào)節(jié)動物腸道菌群，促進(jìn)機體有益代謝。

代謝組學(xué)貫穿于肉品生產(chǎn)諸多環(huán)節(jié)當(dāng)中（動物飼喂、屠宰、加工等），利用高通量檢測技術(shù)和多元數(shù)據(jù)處理方法研究物體受外部刺激所產(chǎn)生的所有代謝產(chǎn)物（如氨基酸、有機酸、肽類或酚類物質(zhì)等），檢測動物的血漿、糞便、瘤胃、組織等代謝物生物標(biāo)志物。代謝組學(xué)分析技術(shù)有核磁共振技術(shù)（Nuclear Magnetic Resonance spectroscopy，NMR）、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（Gas Chromatography-Mass Spectroscopy，GC-MS）以及液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectroscopy，LC-MS）。NMR檢測靈敏度相對較低，對痕量物質(zhì)檢測存在誤差；GC-MS則在分析難揮發(fā)的代謝組分需經(jīng)過衍生化處理，若衍生不當(dāng)，則會降低樣品檢測的靈敏度；而LC-MS可直接對代謝產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，具有較高的分辨率、檢測靈敏度和分析速度，適合代謝組學(xué)代謝物的輪廓分析。Artegoitia等利用代謝組學(xué)技術(shù)篩選了33種肉牛代謝標(biāo)志產(chǎn)物鑒定瘤胃生理功能。曹青青聯(lián)合生物組學(xué)及代謝組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)唾液乳桿菌（GZPH2）能調(diào)節(jié)豹紋鰓棘鱸腸道菌群并促進(jìn)功能性代謝物產(chǎn)生，增強機體抗氧化能力。杜瑞等發(fā)現(xiàn)益生菌能影響蘇尼特羊腸道菌群及其代謝產(chǎn)物，提高蘇尼特羊屠宰性能和胴體品質(zhì)，尤其是提升肉羊色澤及嫩度，腸道菌群中UCG002升高有利于羊肉剪切力值降低，豐度增加可增加瘤胃中異戊酸和異丁酸的含量進(jìn)而增加肌肉中PUFA的含量。基于以上研究證明飼喂益生菌能影響動物腸道菌群、機體代謝及圈養(yǎng)羊肉品質(zhì)，但通過飼喂植物乳桿菌建立蘇尼特羊腸道菌群與血漿代謝物之間的關(guān)系進(jìn)而改善肉品質(zhì)的影響還未見系統(tǒng)研究。因此，本試驗基于高通量測序及LC-MS代謝組學(xué)技術(shù)分析添加植物乳桿菌對蘇尼特羊肉品質(zhì)的作用，摸索腸道微生物及血漿代謝物的變化規(guī)律，為今后通過組織靶標(biāo)代謝產(chǎn)物改善羊肉品質(zhì)提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

在內(nèi)蒙古巴彥淖爾市烏拉特中旗，選取12只平均活體質(zhì)量為（38.42±1.64）kg的3月齡健康無病的純種蘇尼特羊羊羔隨機分為對照組（C組）和植物乳桿菌組（R組），每組6只，公母各半。C組飼喂基礎(chǔ)飼糧（玉米60%、干草38%、礦物質(zhì)2%）；R組除飼喂基礎(chǔ)飼糧之外，補充添加植物乳桿菌粉12g/d（山東寶來利來生物工程股份有限公司），活菌數(shù)為3×10cfu/g，每日飼喂1次，參照白艷蘋等的研究將添加水平設(shè)為2 g/只，試驗期間自由飲水、活動，不添加抗生素，進(jìn)行90 d飼喂試驗。

采血針靜脈采血用于血液代謝物測定，肉羊屠宰放血后采集背最長肌作為研究對象，從盲腸中收集糞便樣品置于15 mL無菌無酶離心管中用于腸道微生物分析。

乙腈（Merck，1499230-935）、乙酸銨（Sigma，70221）；核酸染料（Gelview），北京百泰克生物技術(shù)有限公司；瓊脂粉，西安國安生物科技有限公司；Maker，大連寶生物工程有限公司；糞便DNA提取試劑盒，北京天根生化科技有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

ZHJH-C1112C型超凈工作臺，上海智城分析儀器制造有限公司；Veriti96 Well Thermal Cycler PCR儀，美國Applied Biosystems公司；Real-TimePCR儀，美國Bio-rad公司；胴體直測型pH計、TC-P2A全自動色差計，北京奧依克光電儀器有限公司；CL-M嫰度儀，東北農(nóng)業(yè)大學(xué)工程學(xué)院；Illumina Miseq MISEQ測序儀，Illumina公司；AB Triple TOF 6600質(zhì)譜儀（AB SCIEX）；Agilent 1290 Infinity LC超高壓液相色譜儀，安捷倫公司；ACQUITY UPLC BEH Amide 色譜柱：1.7m，2.1 mm×100 mm column沃特世科技（上海）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 腸道微生物菌群測定與分析

參考杜瑞等的方法，采用QIAamp DNA Stool Mini Kit試劑盒提取細(xì)菌總DNA，用核酸濃度測定儀測定總DNA濃度，于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.2 血漿代謝物測定

1）色譜條件：血漿代謝物測定參考Zhang等的方法。Agilent 1290 Infinity LC超高效液相色譜系統(tǒng)，HILIC色譜柱分離；柱溫25 ℃；流速0.5 mL/min；進(jìn)樣量2L；流動相A：水+25 mmol/L乙酸銨+25 mmol/L氨水，B：乙腈；梯度洗脫程序：0～0.5 min，95% B；0.5～7 min，B從95%線性變化至65%；7～8 min，B從65%線性變化至40%；8～9 min，B維持在40%；9.1 min，B從40%線性變化至95%；9.1～12 min，B維持在95%；過程中樣品置于4 ℃自動進(jìn)樣器，隨機順序進(jìn)行樣本連續(xù)分析，插入QC樣品，監(jiān)測并評價系統(tǒng)穩(wěn)定性及試驗數(shù)據(jù)可靠性。

2）Q-TOF質(zhì)譜條件：ESI源條件：離子源氣體1:60、2:60，氣簾氣：30，源溫度：600 ℃，噴霧電壓：±5 500 V；TOF MS掃描m/z：60～1 000 Da，子離子掃描m/z：25～1 000 Da，TOF-MS單張圖譜掃描時間：0.20 s，樣品離子單張圖譜掃描積累時間：0.05 s；二級質(zhì)譜：去簇電壓：±60 V，碰撞能量：35±15 eV。

1.3.3 羊肉品質(zhì)測定

肉品質(zhì)測定參照王柏輝的方法，包括肉色、pH值、嫩度和熟肉率。

1）pH值測定：胴體直插式pH計分別測定宰后45 min和24 h背最長肌的pH值，記作pH和pH。

2）色澤測定：將肌肉切成3 cm×3 cm×1 cm的肉塊，屠宰45 min后用TC-P2A全自動色差計測定肌肉色差，每個樣品測定3次，記錄并取平均值。*值為亮度；*值為紅度；值為黃度。

3）嫩度測定：沿羊肉的肌纖維方向進(jìn)行取樣，肉樣排酸24 h后，水浴鍋75 ℃蒸煮45 min，取出室溫冷卻后用濾紙擦干表面水分，沿肌纖維方向?qū)⑵淝谐? cm×1 cm×1 cm形狀的肉條，用嫩度儀測定剪切力值。

4）熟肉率測定：取50 g左右的肉樣記錄煮前質(zhì)量（，g），肉樣中心插入溫度計，放入在水浴鍋85 ℃煮制40 min，待肉樣中心溫度達(dá)到75 ℃后室溫冷卻，擦干表面水分，記錄煮后質(zhì)量（，g），下式計算熟肉率。

5）屠宰性能測定：所有試驗羊宰前24 h禁食，測量方法參考侯艷茹對其屠宰性能相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

兩組數(shù)據(jù)每組6個平行3次重復(fù)，采用SPSS 26.0軟件（IBM公司）單因素方差分析student t檢驗進(jìn)行顯著性分析及典型相關(guān)性分析。采用Origin 8.0和Excel 2020軟件作圖。

選取16S rRNA的V4-V5區(qū)序列進(jìn)行高通量測序分析，進(jìn)一步對目的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)產(chǎn)物進(jìn)行文庫構(gòu)建，由上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司在Illumina MiSeq平臺上完成測序后使用QIIME分析平臺開展序列的生物信息學(xué)分析。

血漿代謝物原始數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為 .mzXML格式，采用XCMS軟件峰對齊、保留時間校正和提取峰面積。首先進(jìn)行代謝物結(jié)構(gòu)鑒定、數(shù)據(jù)預(yù)處理，然后進(jìn)行試驗數(shù)據(jù)質(zhì)量評價及數(shù)據(jù)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼喂植物乳桿菌對蘇尼特羊腸道菌群的影響

2.1.1 Alpha多樣性分析

Alpha多樣性是反映豐富度和均勻度的綜合指標(biāo)，通過測序得到了盲腸樣本的總計321 324條高質(zhì)量序列，共獲得了2 138個OTU（Operational Taxonomic Units）操作分類單元，兩組覆蓋率均達(dá)到99%，均滿足后續(xù)腸道菌群組成分析要求。表1所示R組的Shannon指數(shù)、Chao1指數(shù)和Ace指數(shù)顯著高于C組（＜0.001），說明R組羊的腸道微生物群落多樣性及豐富度高于C組羊。

表1 植物乳桿菌對蘇尼特羊腸道菌群α-多樣性的影響Table 1 Effect of Lactobacillus plantarum on the α-diversity of intestinal flora in Sunit sheep

2.1.2 Beta多樣性分析

1）菌群組成分析：

通過16S rRNA基因測序分析Beta多樣性，表2所示兩組樣品間的差異。在門水平上，兩組細(xì)菌種類的相對豐度主要以厚壁菌門（Firmicutes）以及擬桿菌門（Bacteroidetes）為主，兩者相對豐度之和超過了90%。與 C 組相比，R 組的 Bacteroidetes、疣微菌門（Verrucomicrobia）和放線菌門（Actinobacteria）豐度顯著提高（＜0.05），而Firmicutes、變形菌門（Proteobacteria）的豐度顯著降低（＜0.05）。在屬水平上，R組擬桿菌屬（）、瘤胃球菌屬_UCG-010（UCG-010）、瘤胃球菌屬_UCG-005（UCG-005）、克里斯滕森菌_R-7組（R-7_group）和理研菌_RC9_腸道群（RC9_gut_group）豐度顯著提高（＜0.05），而另枝菌屬（）、普雷沃氏菌_UCG-003（UCG-003）豐度顯著低于C組（＜0.05）?？梢?，飼喂植物乳桿菌能夠改變盲腸微生物群落優(yōu)勢菌群的組成與結(jié)構(gòu)。

表2 植物乳桿菌對蘇尼特羊腸道菌群相對豐度的影響Table 2 Effect of Lactobacillus plantarum on the relative abundance of intestinal microflora of Sunit sheep%

2）主成分分析（PCoA）

利用主成分分析（Principal Coordinates Analysis,PCoA）降維排序方法觀察分析群體間的差異，鑒別飼喂植物乳桿菌后兩組腸道菌群的差異。由圖1可知，R組和C組每組樣本點分散區(qū)域比較密集，組內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu)相似。兩組主成分圖略有重疊，但兩組腸道菌群差異總體區(qū)分不顯著，說明蘇尼特羊腸道菌群組成具有基因同源性。而從第一主成分能分析出飼喂植物乳桿菌對蘇尼特羊的盲腸微生物群落產(chǎn)生一定影響。

圖1 主成分分析散點圖兩組樣本分析Fig.1 Principal Coordinates Analysis (PCoA) scatter plot analysis of two groups of samples

2.2 飼喂植物乳桿菌對蘇尼特羊腸道菌群的影響

2.2.1 OPLS-DA分析

圖2 OPLS-DA得分及置換檢驗圖Fig.2 OPLS-DA score and permutation test

R組和C組的得分不同代表代謝組成不同。采用Permutation test對模型進(jìn)行檢驗，和表示置換保留度等于1，即原模型的和值。圖2中隨機模型的和均逐漸下降，說明原模型不存在過擬合現(xiàn)象。大于0.5，表明兩組模型穩(wěn)定可靠，滿足后續(xù)蘇尼特羊血漿代謝物分析。

2.2.2 血漿差異代謝物分析

以O(shè)PLS-DA VIP＞1和＜0.05作為篩選標(biāo)準(zhǔn)，通過對蘇尼特羊血漿顯著性差異代謝物的分析，結(jié)果如表3所示，通過Fisher精確檢驗分析計算出兩組血漿樣品中鑒定的化合物主要與膽汁分泌和膽固醇代謝有關(guān)，主要鑒定了6種化合物，3種通路富集均可歸類于脂肪代謝。如3-羥基月桂酸、皮質(zhì)醇、雷米普利、吲哚-3-丙酸等代謝產(chǎn)物均對膽固醇代謝有所影響，能夠影響機體糖脂代謝。3-羥基月桂酸屬于-羥基脂肪酸的一種，通過自由脂肪酸受體（FFA1-FFA4）和羥基羧酸受體（HCA1-HCA3）的G蛋白偶聯(lián)受體發(fā)揮細(xì)胞效應(yīng)，由細(xì)胞線粒體-氧化產(chǎn)生，與脂肪酸代謝性疾病有關(guān)。皮質(zhì)醇介導(dǎo)抗炎作用和肝臟疾病中的程序性細(xì)胞死亡，能刺激肝細(xì)胞增殖并被肝臟循環(huán)吸收。雷米普利能調(diào)節(jié)晝夜節(jié)律基因的表達(dá)，抑制血管緊張素轉(zhuǎn)換酶并維持機體葡萄糖穩(wěn)態(tài)與胰島素水平。吲哚-3-丙酸是一種色氨酸衍生的細(xì)菌代謝物，能夠引起小鼠體質(zhì)量的增加變化。表3可見6種代謝物在兩組中差異明顯，均與膽汁分泌與膽固醇代謝有關(guān)。R組中3-羥基月桂酸含量顯著低于C組（＜0.05），其余代謝物均顯著高于C組（＜0.05），結(jié)果表明飼喂植物乳桿菌能夠調(diào)節(jié)機體脂肪代謝。

表3 血漿顯著性差異代謝物Table 3 Significant differences in plasma metabolites

2.3 蘇尼特羊腸道微生物和血漿代謝物的相關(guān)性研究

在分析腸道菌群與血漿代謝產(chǎn)物的相關(guān)性中發(fā)現(xiàn)（圖3），大部分腸道菌群與血漿代謝產(chǎn)物都與糖脂代謝相關(guān)。如在膽汁分泌及膽固醇代謝中，兩組具有顯著差異的腸道菌群除Firmicutes、以外，其余腸道菌群 Bacteroidetes、Verrucomicrobia、Actinobacteria、UCG-010、R-7_group及RC9_gut_group的豐度均與血漿代謝物L(fēng)-精氨酸、甘氨膽酸的含量呈正相關(guān)，與3-羥基月桂酸的含量呈負(fù)相關(guān)。雷米普利與吲哚-3-丙酸的含量與Firmicutes、R-7_groupRC9_gut_group呈正相關(guān)，與呈負(fù)相關(guān)。皮質(zhì)醇與呈正相關(guān)，而與 Firmicutes呈負(fù)相關(guān)其中，BacteroidetesUCG-001均與甘氨膽酸呈顯著正相關(guān)（＜0.05）。此外，圖3還顯示了其他腸道微生物與膽固醇代謝和膽汁酸生物合成之間的關(guān)系，說明飼喂植物乳桿菌能夠利用腸道菌群與血漿代謝物之間的相關(guān)關(guān)系來調(diào)控蘇尼特羊機體代謝水平。

2.4 植物乳桿菌對蘇尼特羊肉品質(zhì)的影響

由表4可知，R組亮度值（*）、黃度值（*）、pH值均顯著高于C組（＜0.05），而蒸煮損失、剪切力則顯著低于C組（＜0.05），R組的蘇尼特羊產(chǎn)業(yè)價值更高。pH值指標(biāo)能夠很好的反映肉品質(zhì)，宰后45min時測得的pH≥6.0為肉質(zhì)好的肉，而pH＞6.0的肉為肉質(zhì)差的肉，說明試驗羊pH和pH均在正常范圍內(nèi)。本試驗兩組羊肉初始pH值無顯著差異，pH值有顯著差異，飼喂植物乳桿菌能夠顯著減緩宰后肌肉細(xì)胞糖酵解進(jìn)程中pH值的降低速率。通過亮度值、黃度值也可看出R組肉色可能由肌內(nèi)脂肪沉積所致，與血漿代謝物影響脂代謝有關(guān)。剪切力與肉的嫩度密切相關(guān)，肉的嫩度是反映肉制品食用物理特性的重要指標(biāo)，R組的剪切力較低嫩度較高，蒸煮損失顯著低于C組，說明飼料添加植物乳桿菌能夠提高肉的系水力能夠提升肉質(zhì)口感進(jìn)而改善羊肉品質(zhì)，杜瑞等添加植物乳桿菌和干酪乳桿菌后同樣發(fā)現(xiàn)益生菌組羊肉的剪切力值顯著低于對照組，能夠很好地改善羊肉嫩度。

圖3 腸道微生物和血漿代謝物相關(guān)性分析Fig.3 Correlation analysis between intestinal microbe and plasma metabolites

表4 植物乳桿菌對蘇尼特羊肉品質(zhì)的影響Table 4 Effects of Lactobacillus plantarum on the meat quality of Sunite sheep

3 討 論

本試驗飼喂植物乳桿菌后使腸道菌群物種豐度增加、糞便及血漿代謝發(fā)生變化，可能是腸腔中優(yōu)勢菌（如擬桿菌門、厚壁菌門、變形菌門、疣微菌門等）通過菌群互作利用碳水化合物、脂肪、蛋白質(zhì)等大分子營養(yǎng)物質(zhì)為底物，在發(fā)酵、酶解后得到的小分子代謝產(chǎn)物與腸上皮細(xì)胞各種轉(zhuǎn)運載體吸收作用后進(jìn)入血液繼而影響機體代謝水平。Zhou等研究發(fā)現(xiàn)，由于植物乳桿菌NCU116代謝產(chǎn)生的胞外多糖促進(jìn)了轉(zhuǎn)錄因子c-Jun的表達(dá)、磷酸化以及c-Jun與 MUC2啟動子的結(jié)合，進(jìn)而提高分泌黏蛋白MUC2基因的表達(dá)水平，保證了營養(yǎng)物質(zhì)運輸，增強了動物的腸道屏障功能，進(jìn)而改善了機體代謝。任婧等研究表明植物乳桿菌ST-Ⅲ主要通過菌體自身吸收膽固醇的同化作用以及與膽鹽結(jié)合作用后的共沉淀作用調(diào)控膽固醇代謝水平。Ottosson等研究發(fā)現(xiàn)腸道微生物能夠參與機體代謝，代謝產(chǎn)物的相關(guān)變化可用于探索肥胖等疾病的發(fā)生機制研究。本試驗飼喂植物乳桿菌后腸道微生物以及等菌屬豐度均有顯著差異（＜0.05），研究表明以為主的腸型中細(xì)菌主要靠吸收單糖和降解黏蛋白來獲取能量影響機體的能量代謝。在人類和動物腸道及黏膜中廣泛存在，與脂肪沉積和代謝綜合征密切相關(guān)。與腸道短鏈脂肪酸的合成相關(guān)，具有復(fù)雜多糖降解及利用所必需的酶和基因簇，與琥珀酸高水平循環(huán)致使機體糖代謝受損有關(guān)。與腸道細(xì)菌類clpb基因呈正相關(guān)關(guān)系，可長期增加飽腹感減少脂肪量調(diào)控脂代謝，等細(xì)菌中普遍存在著膽汁酸水解酶，可以促進(jìn)膽汁酸被水解次級膽汁酸。因此，飼喂乳酸菌能夠通過腸道菌群影響酶、蛋白及基因表達(dá)繼而影響機體能量代謝。

腸道菌群對機體的調(diào)控依賴于腺苷酸活化蛋白激酶（Adenosine Monophosphate activated Protein Kinase，AMPK）通路、膽汁酸及短鏈脂肪酸代謝等。膽汁酸被腸道菌群的酶代謝，維持著腸道微生態(tài)平衡，最終影響著脂代謝。膽汁酸及衍生物可能作為信號分子結(jié)合與腸道上皮細(xì)胞G蛋白偶聯(lián)膽汁酸受體（G protein bile acid receptor-1，TGR5）和腸L細(xì)胞的法尼酯衍生物X受體（nuclearreceptor Farnesoid X Receptor，F(xiàn)XR）信號通路來調(diào)節(jié)機體脂代謝。FXR 信號通路不僅控制膽汁酸合成，還可以通過調(diào)控膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（Sterol-Regulatory Element Binding Proteins 1c，SREBP-1c）的表達(dá)來影響乙酰輔酶 A 羧化酶（Acetyl CoA Carboxylase，ACC）等脂代謝基因。通過激活FXR可引起小鼠脂肪變性、脂肪沉積及體重增加進(jìn)而影響動物脂肪代謝。甘氨膽酸是具有抗腫瘤活性的膽汁酸，可靶向作用于耐藥泵和非耐藥泵通路。L-精氨酸能夠與小腸中功能性基因的表達(dá)呈一定相關(guān)性，潛在影響著機體脂代謝，加速動物腸道微生物區(qū)系的演替和益生菌定植，并改變機體的初級膽汁酸和脂質(zhì)代謝，促使動物腸道快速發(fā)育。周笑犁等發(fā)現(xiàn)精氨酸能夠下調(diào)動物肝臟中ACC mRNA的表達(dá)，上調(diào)肝臟中過氧化物酶體增殖物激活受體（Peroxisome Proliferator-Activated Receptorγ,PPARγ）mRNA的表達(dá)，從而促進(jìn)脂代謝脂類轉(zhuǎn)運與代謝。甘氨膽酸、L-精氨酸含量顯著高于C組（＜0.05），表明植物乳桿菌對血漿代謝產(chǎn)物具有調(diào)控作用，影響著機體膽汁酸和脂質(zhì)代謝。同樣，血漿皮質(zhì)醇主要來自腎上腺皮質(zhì)，是糖皮質(zhì)激素的一種，對糖類代謝具有很強作用的腎上腺皮質(zhì)激素，能夠通過羥固醇（Oxysterols）轉(zhuǎn)化為膽汁酸后激活FXR信號通路影響膽固醇合成及膽汁酸代謝中關(guān)鍵基因膽固醇7羥化酶CYP7A1的表達(dá)，調(diào)控著膽固醇代謝水平。腸道菌群作為膽汁酸代謝重要的調(diào)節(jié)因子，影響機體產(chǎn)生脫羧作用中相關(guān)酶系的微生物如厚壁菌門中梭狀芽孢桿菌，生成包括脫氧膽酸和膽石酸等次生膽汁酸。此外，變形菌門（Proteobacteria）包括許多病原菌，可以作為鑒定哺乳動物腸道健康的關(guān)鍵，Proteobacteria與皮質(zhì)醇呈負(fù)相關(guān)，降低變形菌門的豐度有益于皮質(zhì)醇參與膽固醇代謝。本研究甘氨膽酸與BacteroidetesUCG-001呈顯著正相關(guān)（＜0.05）。L-精氨酸與Bacteroidetes、Verrucomicrobia、Actinobacteria等腸道菌群呈正相關(guān)，與Firmicutes、Spirochaetes、呈負(fù)相關(guān)。本試驗證明植物乳桿菌能夠依次對腸道菌群、血漿代謝產(chǎn)物產(chǎn)生作用，兩者之間也具有一定相關(guān)性，其相關(guān)分子機制尚未明確，有待下一步試驗研究。

在肉品質(zhì)分析中，飼喂植物乳桿菌能從不同方面改善蘇尼特羊羊肉品質(zhì)。本試驗與之前飼喂的其他復(fù)合微生態(tài)制劑相比，飼喂此株植物乳桿菌除了能夠影響蘇尼特羊pH值、嫩度及色澤的變化以外，還能夠顯著降低羊肉的蒸煮損失。李宗凱等研究也發(fā)現(xiàn)益生菌能顯著提高育肥豬生長期平均日增質(zhì)量。Chen等發(fā)現(xiàn)飼料中添加糞腸球菌具有更高的屠宰率及肌內(nèi)脂肪含量、pH值適宜且無PSE肉產(chǎn)生。Rybarczyk等研究發(fā)現(xiàn)添加益生菌能夠改變?nèi)獾纳钪颠M(jìn)而改善肉品的感官品質(zhì)。梁榮蓉等總結(jié)了利用組學(xué)方法找到與肉色相關(guān)的差異蛋白、代謝酶類物質(zhì)，為后期肉色指標(biāo)變化機制的研究提供靶標(biāo)方向。本團(tuán)隊前期已對不同飼養(yǎng)方式下的蘇尼特羊進(jìn)行了大量研究，如羅玉龍等發(fā)現(xiàn)放牧的飼養(yǎng)條件更有利于營養(yǎng)物質(zhì)的積累，食用品質(zhì)較高。王柏輝等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)放牧能夠促進(jìn)肌肉組織中有益脂肪酸（如-亞麻酸、CLA、EPA和DHA的沉積），但舍飼羊的活體、胴體、凈肉質(zhì)量均顯著高于放牧羊；蘇尼特羊胃腸道菌群主要以擬桿菌門和厚壁菌門為主，放牧組瘤胃菌群中厚壁菌門的相對豐度高于舍飼組，而瘤胃中RC9_gut_group屬和丁酸弧菌屬更有利于肌肉中n-3 PUFA的沉積。侯艷茹證實飼喂益生菌會改善圈養(yǎng)羊肉品質(zhì)，比單純模擬放牧方式增加運動量的效果更好。杜瑞再次證實了益生菌對肉品質(zhì)的有利作用。綜上，本試驗更進(jìn)一步探尋了腸道菌群與靶標(biāo)血漿代謝產(chǎn)物的關(guān)系，腸道菌群可能是影響血漿代謝產(chǎn)物的主要影響因素之一。蘇尼特羊血漿代謝產(chǎn)物主要集中于膽固醇代謝和膽汁酸分泌與合成，后期能夠通過飼喂植物乳桿菌對腸道菌群的進(jìn)行調(diào)控，找到靶標(biāo)代謝產(chǎn)物繼而調(diào)整機體脂代謝，最終達(dá)到改善羊肉品質(zhì)的目的。

4 結(jié) 論

1）與對照組相比，植物乳桿菌組參與能量代謝的腸道有益菌群顯著提高了腸道擬桿菌門（Bacteroidetes）、疣微菌門（Verrucomicrobia）、擬桿菌屬（）、克里斯滕森菌屬（R-7_group）、理研菌屬RC9腸道群（RC9gut_group）和瘤胃球菌屬（UCG-010）的豐度（＜0.05）。

2）植物乳桿菌組血漿代謝物功能富集在膽固醇代謝及膽汁分泌通路，如甘氨膽酸、吲哚-3-丙酸、皮質(zhì)醇、L-精氨酸等含量均顯著（＜0.05）高于對照組。

3）在相關(guān)性分析中，調(diào)控腸道菌群的組成能夠關(guān)聯(lián)影響到靶標(biāo)血漿代謝物的增多或減少。

3）在肉品質(zhì)分析中，植物乳桿菌組嫩度、色澤都有所改善，如亮度值（*）、黃度值（*）、pH值均顯著（＜0.05）高于對照組，而蒸煮損失、剪切力均顯著（＜0.05）低于對照組。

因此，通過飼喂益生菌調(diào)控動物腸道菌群影響機體生理代謝水平改善肉品質(zhì)是能夠?qū)崿F(xiàn)的，可以成為后期改善羊肉品質(zhì)重點研究方向，應(yīng)用前景廣泛，對微生物基礎(chǔ)動物飼料的開發(fā)也提供了一定的理論依據(jù)。