寧菲菲,羅 玲,吳 燕,王 婭,馬愛群,,,王亭忠,,(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科,西安 7006;教育部環(huán)境與基因相關(guān)疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;陜西省心臟病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;通訊作者,E-mail:tingzhong.wang@xjtu.edu.cn)

伏立康唑(voriconazole)是一種三唑類抗真菌藥物,通過抑制14α-甾醇去甲基化,抑制真菌細(xì)胞膜的合成,具有抗菌譜廣、抗菌效力強(qiáng)、口服生物利用度高等特點(diǎn)。伏立康唑主要用于治療免疫功能低下所致的嚴(yán)重侵襲性真菌感染,是治療肺曲霉菌感染的一線用藥[1]。近年來,由于造血干細(xì)胞移植、實(shí)體器官移植在臨床工作中廣泛開展,免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑在移植術(shù)后患者、風(fēng)濕性疾病及腎臟疾病患者中大量使用,導(dǎo)致侵襲性曲霉菌、念珠菌等真菌感染風(fēng)險(xiǎn)提高,伏立康唑在臨床中的應(yīng)用逐漸增加[2]。隨著用藥人群的增加及用藥療程的延長(zhǎng),關(guān)于伏立康唑不良反應(yīng)的報(bào)道不斷增加[3-5]。近年來研究發(fā)現(xiàn)伏立康唑可導(dǎo)致QT間期延長(zhǎng)、尖端扭轉(zhuǎn)性室速、竇性心動(dòng)過緩、心房顫動(dòng)、房室傳導(dǎo)阻滯等多種類型的心律失常,其發(fā)生機(jī)制尚不明確,也缺乏針對(duì)性的預(yù)防及治療措施[6,7]。因此,了解伏立康唑?qū)е滦穆墒С０l(fā)生的可能分子機(jī)制,有助于為預(yù)防和治療伏立康唑相關(guān)心律失常提供可能的干預(yù)靶點(diǎn)。

多種遺傳性或獲得性因素均可能通過影響心肌細(xì)胞的離子流而延長(zhǎng)動(dòng)作電位時(shí)程(action potential duration,APD),表現(xiàn)為體表心電圖上的QT間期延長(zhǎng),進(jìn)而導(dǎo)致尖端扭轉(zhuǎn)性室速等嚴(yán)重心律失常。既往研究發(fā)現(xiàn),多種藥物可以通過抑制心臟快速延遲整流鉀通道(human ether-a-go-go-related gene,hERG,KCNH2編碼)介導(dǎo)的快速延遲整流鉀電流(the rapidly activating delayed rectifier potassium channel current,IKr)延長(zhǎng)動(dòng)作電位平臺(tái)期,從而導(dǎo)致APD及QT間期延長(zhǎng)[8,9]。心臟電壓門控鈉通道(Nav1.5,SCN5A基因編碼)介導(dǎo)的鈉電流(INa)是心肌細(xì)胞動(dòng)作電位0期的主要內(nèi)向電流,在心臟動(dòng)作電位的形成和傳導(dǎo)過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。研究發(fā)現(xiàn)鈉通道介導(dǎo)的晚鈉電流(late sodium current,INa-L)也可延長(zhǎng)QT間期,進(jìn)而誘發(fā)心律失常[10,11]。伏立康唑?qū)π呐K離子通道的影響尚不明確。為探討伏立康唑?qū)е滦呐KQT間期延長(zhǎng)及心律失常發(fā)生的離子機(jī)制,本研究利用Western blot和全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),觀察了伏立康唑?qū)υ贖EK-293細(xì)胞中表達(dá)的hERG通道及Nav1.5通道表達(dá)和功能的影響,為臨床工作中伏立康唑誘發(fā)的心律失常的防治提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

1.2 主要溶液配制

電極外液:NaCl 137 mmol/L,葡萄糖10 mmol/L,KCl 4 mmol/L,HEPES 10 mmol/L,MgCl21 mmol/L,CaCl21.8 mmol/L;配好后,用NaOH調(diào)節(jié)pH值至7.4,0.22 μm微孔濾膜過濾后置于4 ℃冰箱保存。鈉通道檢測(cè)電極內(nèi)液:NaCl 10 mmol/L,CsCl 130 mmol/L,HEPES 10 mmol/L,EGTA 10 mmol/L;鉀通道檢測(cè)電極內(nèi)液:KCl 130 mmol/L,MgCl21 mmol/L,HEPES 10 mmol/L,EGTA 10 mmol/L,MgATP 5 mmol/L;電極內(nèi)液用CsOH調(diào)節(jié)pH值至7.2,0.22 μm微孔濾膜過濾,分裝于5 ml EP,-20 ℃冰箱保存。RIPA蛋白裂解液:NaCl 137 mmol/L,EDTA 2 mmol/L,Tris-HCl 20 mmol/L,Triton X-100 1%,甘油10%。TBS-T溶液:Tris-HCl 50 mmol/L,NaCl 37.5 mmol/L,吐溫1‰。PBS緩沖液:NaCl 137 mmol/L,KCl 2.7 mmol/L,Na2HPO48 mmol/L,KH2PO41.5 mmol/L。

1.3 細(xì)胞株及質(zhì)粒

人胚腎上皮細(xì)胞(human embryonic kidney cell line,HEK293細(xì)胞)是一種常用的表達(dá)研究外源基因的細(xì)胞株,購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海生科院細(xì)胞資源中心。SCN5A cDNA由英國(guó)曼徹斯特大學(xué)(University of Manchester, UK)張艷敏教授惠贈(zèng);hERG cDNA由美國(guó)威斯康星大學(xué)(University of Wisconsin-Madison,USA)Gail Robertson教授惠贈(zèng)。

1.4 細(xì)胞培養(yǎng)及質(zhì)粒轉(zhuǎn)染

1.5 伏立康唑?qū)ERG及Nav1.5蛋白表達(dá)的影響

選取穩(wěn)定表達(dá)hERG的HEK293細(xì)胞,以適當(dāng)密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中;培養(yǎng)24 h棄去原培養(yǎng)基,更換為伏立康唑濃度分別為0,2.5,5,10,50 μmol/L的含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基,分別干預(yù)細(xì)胞24 h,Western blot檢測(cè)hERG蛋白表達(dá)。以0 μmol/L伏立康唑?yàn)閷?duì)照組,比較不同濃度伏立康唑?qū)ERG蛋白表達(dá)的影響。

選取穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5的HEK293細(xì)胞,以適當(dāng)密度接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中;培養(yǎng)24 h棄去原培養(yǎng)基,更換為伏立康唑濃度分別為0,2.5,5,10,50 μmol/L的含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基,分別干預(yù)細(xì)胞24 h,Western blot檢測(cè)Nav1.5蛋白表達(dá)。以0 μmol/L伏立康唑?yàn)閷?duì)照組,比較不同濃度伏立康唑?qū)av1.5蛋白表達(dá)的影響。

選取穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5的HEK293細(xì)胞,培養(yǎng)24 h棄去原培養(yǎng)基,更換為5 μmol/L的伏立康唑處理細(xì)胞,分別培養(yǎng)0,2,4,8,16,24 h,用Western blot檢測(cè)Nav1.5蛋白表達(dá)。

藥物干預(yù)后棄去DMEM培養(yǎng)液,使用預(yù)冷的PBS緩沖液沖洗培養(yǎng)皿2次,每35 mm小培養(yǎng)皿加入RIPA蛋白裂解液200 μl,收集細(xì)胞于1.5 ml EP管中后于冰上靜置30 min,每10 min強(qiáng)烈震蕩1次,12 000g,離心30 min(4 ℃),收集上清液,使用BCA法定量蛋白。每個(gè)膠孔中加入30 μg變性蛋白,SDS-PAGE電泳后將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜。PVDF膜用含有5% TBS-T的脫脂奶粉室溫下封閉2 h,TBS-T溶液洗膜3次,加入5 ml按1 ∶1 000稀釋的相應(yīng)一抗(兔抗小鼠Nav1.5、兔抗人hERG抗體及兔抗小鼠β-actin)中,4 ℃孵育過夜,TBS-T溶液漂洗3次后,相應(yīng)二抗室溫孵育2 h;TBS-T溶液漂洗后用ECL試劑盒發(fā)光顯像。所得蛋白表達(dá)條帶用ImageJ軟件進(jìn)行灰度分析,以肌動(dòng)蛋白(β-actin)作為內(nèi)參,分析蛋白的相對(duì)表達(dá)水平。

1.6 伏立康唑?qū)ERG通道及SCN5A通道功能的影響

分別選取對(duì)數(shù)期的穩(wěn)定表達(dá)hERG的HEK293細(xì)胞和穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5的HEK293細(xì)胞接種于細(xì)胞培養(yǎng)皿中;培養(yǎng)24 h棄去原培養(yǎng)基,更換為伏立康唑濃度分別為0,5,10 μmol/L的含10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基,處理細(xì)胞24 h,用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)IKr、INa、INa-L電流密度及hERG通道、Nav1.5通道功能。以0 μmol/L伏立康唑?yàn)閷?duì)照組,比較不同濃度伏立康唑?qū)ERG及Nav1.5通道功能的影響。測(cè)定電流前,胰酶消化處理細(xì)胞,轉(zhuǎn)移至1.5 ml EP管中待用。電極外液沖洗細(xì)胞槽后,取適量細(xì)胞滴于細(xì)胞槽中,靜置10 min,使其沉降并貼壁。使用尖端直徑為1～3 μm的電極,填充灌電極內(nèi)液后電阻為2～5 MΩ。高阻封接形成后,輕柔給予負(fù)壓吸破細(xì)胞膜,進(jìn)行串聯(lián)電阻和電容電流補(bǔ)償,開始全細(xì)胞記錄模型。分別調(diào)用不同程序記錄細(xì)胞IKr、INa、INa-L電流:①hERG通道激活程序:維持電位-80 mV,給予一系列維持時(shí)間為4 500 ms的去極化刺激,刺激電壓從-70 mV到70 mV,以10 mV增幅逐漸增加,此后給予維持時(shí)間為4 500 ms,電壓為-50 mV的刺激誘發(fā)尾電流。②Nav1.5通道激活程序:維持電位固定在-140 mV,給予一系列維持時(shí)間為20 ms的去極化刺激,刺激電壓從-80 mV起,以5 mV增幅逐漸增大到60 mV,此后電壓恢復(fù)到-140 mV。③Nav1.5通道穩(wěn)態(tài)失活程序:采用雙脈沖刺激程序記錄鈉電流的失活特性。將維持電位固定在-140 mV,其指令電位依次從-140 mV至-20 mV,步長(zhǎng)10 mV,鉗制時(shí)間為500 ms。此條件脈沖鉗制時(shí)間足夠長(zhǎng),允許鈉通道充分失活即達(dá)到穩(wěn)態(tài)滅活。在每次條件脈沖后,都緊跟一個(gè)固定的測(cè)試脈沖,用以測(cè)定沒有被滅活部分鈉通道的活性,鉗制時(shí)間為20 ms,指令電位為-10 mV,然后回到維持電位-140 mV,刺激間隔為5 s。④晚鈉電流記錄程序:維持電位固定在-140 mV,100 ms后給予維持時(shí)間為1 000 ms的去極化刺激,刺激電壓為-10 mV。去極化刺激后200 ms的鈉電流作為晚鈉電流水平。程序記錄結(jié)束后更換新的細(xì)胞。記錄過程中如果電極脫落,則更換電極和細(xì)胞后重新記錄。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 伏立康唑濃度改變不影響HEK-293細(xì)胞中hERG蛋白的表達(dá)水平

Western blot結(jié)果顯示,與0 μmol/L伏立康唑相比,2.5,5,10,50 μmol/L的伏立康唑處理穩(wěn)定表達(dá)hERG的HEK293細(xì)胞24 h,hERG蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見圖1)。

2.2 伏立康唑濃度改變不影響IKr電流密度

分別用0,5,10 μmol/L的伏立康唑干預(yù)穩(wěn)定表達(dá)hERG通道的HEK-293細(xì)胞24 h,使用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),調(diào)用hREG通道激活程序檢測(cè)IKr電流密度。以電壓為橫坐標(biāo),相應(yīng)電流值為縱坐標(biāo),分別得出0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理24 h對(duì)hERG通道的電流-電壓曲線的影響。結(jié)果顯示隨著伏立康唑濃度的增加,鉀通道的峰值電流及尾電流的電流密度不受影響,與對(duì)照組相比,電流-電壓曲線(I-V曲線)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05,見圖2)。

圖1 Western blot技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞hERG蛋白表達(dá)影響 (n=3)Figure 1 Effect of voriconazole on the expression of hERG detected by Western blot (n=3)

圖2 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞IKr電流的影響 (n=10)Figure 2 Effect of voriconazole on the current of IKr detected by whole cell patch (n=10)

2.3 伏立康唑濃度及時(shí)間依賴性增加Nav1.5蛋白表達(dá)

Western blot結(jié)果顯示,分別用含有0,2.5,5,10,50 μmol/L伏立康唑的高糖DMEM培養(yǎng)基處理穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5的HEK293細(xì)胞24 h,與0 μmol/L相比,2.5,5,10,50 μmol/L伏立康唑隨濃度升高可增加Nav1.5表達(dá)(見圖3A)。用含5 μmol/L伏立康唑的高糖DMEM培養(yǎng)基處理0,2,4,8,16,24 h檢測(cè)Nav1.5蛋白,結(jié)果表明隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),Nav1.5表達(dá)增加(見圖3B)。

圖3 Western blot技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞Nav1.5蛋白表達(dá)影響 (n=3)Figure 3 Effect of voriconazole on the expression of Nav1.5 detected by Western blot (n=3)

2.4 伏立康唑濃度依賴性增加鈉電流密度

分別用0,5,10μmol/L的伏立康唑處理穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5通道的HEK-293細(xì)胞24 h,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)調(diào)用Nav1.5通道激活程序檢測(cè)峰值鈉電流INa電流密度。以電壓為橫坐標(biāo),相應(yīng)電流值為縱坐標(biāo),分別得出0,5,10 μmol/L的伏立康唑干預(yù)24 h對(duì)鈉通道的電流-電壓曲線的影響。結(jié)果顯示隨著伏立康唑濃度的增加,INa電流密度增加,與0 μmol/L相比,5 μmol/L及10 μmol/L伏立康唑干預(yù)24 h電流-電壓曲線組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見圖4)。

2.5 伏立康唑影響鈉通道激活及失活功能

通過電流-電壓曲線,根據(jù)I-V曲線的線性部分獲得曲線的反轉(zhuǎn)電壓(reversal voltage,Vreserve)。通過測(cè)量所得的電流值(I)、膜電壓(Vm)水平及計(jì)算所得的Vreserve,根據(jù)公式g=I/(Vm-Vreverse)分別計(jì)算每個(gè)細(xì)胞的電導(dǎo)值;標(biāo)準(zhǔn)化電導(dǎo)值后,以標(biāo)準(zhǔn)化的電導(dǎo)值(g/gmax)為縱坐標(biāo),以Vm為橫坐標(biāo),通過Origin 8.0軟件,將所得數(shù)據(jù)用Boltzmann函數(shù)擬合,得出鈉通道的穩(wěn)態(tài)激活曲線(見圖5A)。

結(jié)果顯示伏立康唑處理24 h,鈉通道的電壓依賴性激活曲線稍左移(見圖5A),濃度為0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理后,Nav1.5通道的半數(shù)激活電壓分別為(-46.6±0.6)mV,(-50.9±1.0)mV,(-51.2±1.2)mV,5,10 μmol/L的伏立康唑處理組與0 μmol/L組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),5 μmol/L及10 μmol/L組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理24 h鈉通道的激活斜率(k)分別為(8.2±0.3)mV,(-7.4±0.4)mV,(4.5±0.3)mV,三組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

分別用0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5通道的HEK-293細(xì)胞24 h,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)調(diào)用Nav1.5穩(wěn)態(tài)失活程序記錄鈉電流的失活特性。以電壓為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)化的鈉電流為縱坐標(biāo),分別得出0,5,10 μmol/L伏立康唑處理24 h的鈉通道電壓依賴性失活曲線。結(jié)果顯示不同濃度伏立康唑不影響鈉通道的電壓依賴性失活特性(見圖5B)。0,5,10 μmol/L伏立康唑處理24 h,鈉通道的半數(shù)失活電壓分別為(-64.5±0.2)mV,(-65.6±0.3)mV,(-62.3±0.3)mV,與對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);0,5,10 μmol/L伏立康唑處理24 h鈉通道的失活斜率(k)分別為(7.8±0.2)mV,(-8.4±0.3)mV,(8.2±0.2)mV,與0 μmol/L組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

與對(duì)照組比較，*P<0.05，#P<0.01圖4 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞峰值鈉電流的影響 (n=13)Figure 4 The effect of voriconazole on the current of INa detected by whole cell patch (n=13)

圖5 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞鈉通道激活及失活特性的影響 (n=13)Figure 5 Effect of voriconazole on the activation and inactivation properties detected by whole cell patch (n=13)

2.6 伏立康唑增加細(xì)胞晚鈉電流水平

分別用0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5通道的HEK-293細(xì)胞24 h,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)調(diào)用晚鈉電流記錄程序檢測(cè)INa電流水平。去極化刺激后200 ms的鈉電流作為晚鈉電流水平,所得電流水平用峰值鈉電流標(biāo)準(zhǔn)化后比較各組間晚鈉電流的差異。0,5,10 μmol/L的伏立康唑處理穩(wěn)定表達(dá)Nav1.5通道的HEK-293細(xì)胞24 h,晚鈉電流水平分別為(-10.8±0.3)mA,(-26.3±1.7)mA,(-68.0±7.8)mA,用峰值鈉電流標(biāo)準(zhǔn)化后三組間晚鈉電流水平比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,見圖6)。

圖6 全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)檢測(cè)伏立康唑?qū)EK-293細(xì)胞晚鈉電流的影響 (n=11)Figure 6 Effect of voriconazole on the late sodium current detected by whole cell patch (n=11)

3 討論

伏立康唑是一種臨床中廣泛應(yīng)用的三唑類抗真菌藥物,近年來已有多例伏立康唑?qū)е翾T間期延長(zhǎng)、誘發(fā)或加重心律失常的報(bào)道,但其導(dǎo)致心律失常的機(jī)制尚不明確[7,12-16]?？焖傺舆t整流鉀電流及晚鈉電流均可以顯著影響心肌細(xì)胞的動(dòng)作電位,進(jìn)而導(dǎo)致QT間期的延長(zhǎng)或縮短,誘發(fā)室性心動(dòng)過速等多種類型的心律失常[17]。隨著對(duì)藥物所致心律失常機(jī)制認(rèn)識(shí)的不斷深入,現(xiàn)階段新藥研發(fā),需常規(guī)檢測(cè)其對(duì)IKr的阻滯作用,以評(píng)估其導(dǎo)致QT間期延長(zhǎng)和心律失常發(fā)生的可能性。伏立康唑是氟康唑的衍生物,兩者具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)。既往研究發(fā)現(xiàn),氟康唑可以濃度依賴性地抑制心臟IKr電流,導(dǎo)致心肌細(xì)胞QT間期延長(zhǎng),從而增加氟康唑誘發(fā)心律失常的風(fēng)險(xiǎn)[18,19]。Frommeyer等[20]分別用伏立康唑和氟康唑處理家兔心臟,發(fā)現(xiàn)兩者均可導(dǎo)致QT間期延長(zhǎng)及早后除極、多形性室速等心律失常;進(jìn)一步降低灌流液鉀離子濃度,可以增加氟康唑處理組而非伏立康唑處理組的心律失常發(fā)生率。血清鉀離子濃度降低影響hERG通道的功能及細(xì)胞膜的穩(wěn)定性,但不影響電壓門控鈉通道。研究提示伏立康唑可能不是通過影響hERG通道導(dǎo)致心肌細(xì)胞QT間期延長(zhǎng)的。本實(shí)驗(yàn)利用穩(wěn)定表達(dá)通道蛋白的HEK-293細(xì)胞,通過Western blot及全細(xì)胞膜片鉗技術(shù),發(fā)現(xiàn)伏立康唑?qū)ERG通道的表達(dá)和功能均無顯著影響。

近期研究顯示晚鈉電流的升高也可能導(dǎo)致QT間期延長(zhǎng),進(jìn)而誘發(fā)心律失常[21]。晚鈉電流是部分鈉通道延遲失活或不完全失活而形成的持續(xù)性內(nèi)向鈉電流,參與維持動(dòng)作電位的平臺(tái)期。在生理狀態(tài)下,晚鈉電流強(qiáng)度小于峰鈉電流的1%,對(duì)動(dòng)作電位無明顯影響。但在病理或者藥物干預(yù)的條件下,晚鈉電流可能出現(xiàn)不同程度的增強(qiáng)。異常增強(qiáng)的晚鈉電流可誘發(fā)早發(fā)后除極,進(jìn)而導(dǎo)致心律失常發(fā)生[22]。在心力衰竭、心肌梗死等病理情況下,異常增強(qiáng)的晚鈉電流是誘發(fā)嚴(yán)重心律失常重要原因[23]。本研究發(fā)現(xiàn)伏立康唑濃度依賴性的增加Nav1.5的表達(dá),增加峰值鈉電流水平,升高晚鈉電流水平。濃度依賴性地增加晚鈉電流水平可能是伏立康唑?qū)е翾T間期延長(zhǎng)的原因之一。

臨床應(yīng)用伏立康唑的有效血藥濃度范圍為1.0～5.5 mg/L[24],相當(dāng)于4.29～15.73 μmol/L。5 μmol/L伏立康唑接近臨床使用該藥物的最低有效血藥濃度。本研究發(fā)現(xiàn)在HEK293細(xì)胞中,5 μmol/L的伏立康唑即可時(shí)間依賴性增加Nav1.5表達(dá)并升高晚鈉電流水平。臨床用藥過程中伏立康唑可能影響晚鈉電流水平,從而增加心律失常發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。在伏立康唑治療中如合并使用其他致心律失常藥物、基線QT間期延長(zhǎng)、低鉀等條件,則更容易誘發(fā)心律失常[12]。臨床工作中使用伏立康唑,建議嚴(yán)密心電監(jiān)護(hù),糾正低鉀等其他可能誘發(fā)心律失常的因素,謹(jǐn)防QT間期延長(zhǎng)及心律失常的發(fā)生。

綜上所述,本研究伏立康唑分別干預(yù)穩(wěn)定表達(dá)hERG通道蛋白及Nav1.5通道蛋白的HEK-293細(xì)胞,結(jié)果顯示伏立康唑干預(yù)可以濃度及時(shí)間依賴性增加電壓門控鈉通道的表達(dá)水平,增加峰值鈉電流及晚鈉電流水平,但不影響hERG通道的表達(dá)及快速延遲整流鉀電流水平;提示晚鈉電流增強(qiáng)可能是伏立康唑?qū)е翾T間期延長(zhǎng)的原因之一,為臨床工作中伏立康唑誘發(fā)心律失常的防治提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)依據(jù)。