倪 佳

（哈爾濱市農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢驗檢測中心，黑龍江 哈爾濱 150000）

引言

我國有著非常豐富的水產(chǎn)資源，在世界上屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖大國。水產(chǎn)品作為我國城鄉(xiāng)居民攝入動物蛋白的主要來源之一，在居民的生產(chǎn)生活中占據(jù)著極其重要的地位。隨著我國科學(xué)技術(shù)的進步，經(jīng)濟的快速發(fā)展，人民生活水平不斷提高，對水產(chǎn)品的需求量也不斷增長。在養(yǎng)殖過程中，為降低生產(chǎn)成本，使用含有激素或者發(fā)生霉變的飼料，濫用抗生素、激素等漁用藥物防治水產(chǎn)動物疾病，導(dǎo)致水產(chǎn)品藥物殘留超標，嚴重危害人類健康。加強水產(chǎn)品中的漁藥檢測就顯得尤為重要，本文闡述及歸納了水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測的常用方法，為水產(chǎn)品藥物殘留檢測提供重要依據(jù)，對保障人類食品安全具有一定的意義。

1.孔雀石綠的常規(guī)檢測方法

1.1 前處理方法

1.1.1 液液萃取

液液萃取也稱溶劑萃取或抽提，是指利用在溶液系統(tǒng)中兩種或多種物質(zhì)組分溶解度或分配系數(shù)不同的原理，使溶質(zhì)物質(zhì)從其中一種溶劑中轉(zhuǎn)移到另一溶劑中提取方法。通過靜置過程，將出現(xiàn)分層現(xiàn)象的兩種互不相容的物質(zhì)進行分離的操作，叫做分液。提取孔雀石綠的過程中常用的萃取溶液是二氯甲烷和無水乙醇。它的優(yōu)點是可以在常溫條件下進行，操作較為方便，不需要特殊的實驗裝置和操作技術(shù)；缺點是有機溶劑的消耗量較大，揮發(fā)性較強的溶劑應(yīng)盡量在通風(fēng)櫥內(nèi)操作并做好個人防護工作。

1.1.2 固相萃取

固相萃取是于20世紀80年代發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)，通常與液相色譜技術(shù)相結(jié)合，主要用于樣品前處理的分離、提純和濃縮過程。它的原理是通過固相萃取小柱中的固體吸附劑吸附液體中的目標化合物，將樣品的基質(zhì)與干擾物有效的分離，再用洗脫液進行洗脫或者通過加熱過程使目標化合物解吸附，最后經(jīng)過氮吹或者旋蒸，達到濃縮與富集目標化合物的目的。固相萃取的優(yōu)點是操作簡單，分離時間短，試劑消耗量少，可有效提高被測樣品的回收率，對于痕量分析物有較為出色的檢測能力；缺點是成本較高，屬于一次性使用的實驗耗材，同時需要專業(yè)人員進行方法開發(fā)。

1.1.3 分散固相萃取凈化技術(shù)

分散固相萃取凈化技術(shù)也稱為QuEChERS技術(shù)，是2003年由美國農(nóng)業(yè)部Anastassiades等人開發(fā)，提出之后又經(jīng)過多次驗證和方法改進正式確立。QuEChERS是由幾個英文單詞首字母縮寫而成，即Quick，Easy，Cheap，Effective，Rugged和Safe，代表快速，簡單，廉價，高效，耐受和安全的含義。它的原理與固相萃取相似，通過吸附劑填料吸附樣品基質(zhì)中的雜質(zhì)，達到提純凈化的目的。QuEChERS主要是針對水果蔬菜中的農(nóng)藥殘留檢測而建立，但由于其操作簡便、快捷的特點，近年來也逐漸應(yīng)用于獸藥殘留檢測領(lǐng)域。

1.2 分析檢測技術(shù)

1.2.1 氣相色譜法

氣相色譜法是指用氣體作為流動相的一種色譜分析方法。在實際工作中，只要是氣化不分解并且高溫條件下穩(wěn)定的的物質(zhì)，基本上都可以用氣相色譜法進行檢測。對于一些難以氣化或者加熱條件下不穩(wěn)定的物質(zhì)，可以通過化學(xué)衍生的方法，利用氣相色譜法進行檢測。氣相色譜法的優(yōu)點是分離速度快，靈敏度高，應(yīng)用范圍較廣，可以分析沸點相近或高沸點的物質(zhì)和固體樣品。缺點是在進行定性分析時，需要用已知物與檢測物的色譜峰進行對比，或者要與質(zhì)譜進行聯(lián)用，才能獲得較為準確的結(jié)果；定量分析時，需要用標準品已知物對檢測樣品的數(shù)據(jù)進行校正。

氣相色譜儀的檢測器種類繁多，目前常用的有：電子捕獲檢測器（ECD）、火焰光度檢測器（FPD）、熱導(dǎo)檢測器（TCD）、氫火焰離子化檢測器（FID）、氮磷檢測器（NPD）等。氣相色譜法的主要應(yīng)用是檢測農(nóng)藥殘留中的有機氯和有機磷類農(nóng)藥，食品添加劑、生物毒素和生物堿類的藥品等。

1.2.2 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法是通過特殊“接口”將氣相色譜儀與質(zhì)譜聯(lián)接起來，既可以利用氣相色譜儀中毛細管的高分離能力，分離出樣品中的各個組分，又利用質(zhì)譜儀準確鑒定出化合物的結(jié)構(gòu)，對各組分同時進行定性與定量分析。其具有獨立、穩(wěn)定、高效的離子源（EI）系統(tǒng)，使檢測工作更加準確高效的同時，實現(xiàn)了更好的重現(xiàn)性。目前，氣質(zhì)聯(lián)用技術(shù)主要應(yīng)用在有機磷、有機氯和氨基甲酸酯類的農(nóng)藥殘留檢測，也逐步用于部分獸藥殘留的檢測分析，例如動物源性食品中磺胺類藥物，水產(chǎn)品中的氯霉素和孔雀石綠的檢測等。

1.2.3 高效液相色譜法

高效液相色譜法是指利用高壓輸液系統(tǒng)，以液體作為流動相的一種色譜分析技術(shù)。流動相可以是組分單一的溶劑或者是具有不同比例的混合溶液、緩沖液等。為了提高檢測物質(zhì)的分離效果，可以通過調(diào)節(jié)流動相的pH值或溶液組成配比來實現(xiàn)。高效液相色譜非常適合分離分析不易揮發(fā)和對加熱條件敏感的物質(zhì)，以及離子型化合物和生物大分子。常用的檢測器有紫外吸收檢測器（UV），熒光檢測器（FD），示差折光檢測器，光電二極管陣列檢測器（PDA）等。

1.2.4 高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法適合高沸點及熱不穩(wěn)定性物質(zhì)的分析，具有高靈敏度和高選擇性的優(yōu)點，檢測限也進一步提高。在一定程度上，可以彌補氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用的不足。目前是分離、鑒定和檢測多組分化合物的理想方法?，F(xiàn)在液質(zhì)廣泛應(yīng)用于獸藥殘留檢測領(lǐng)域中，例如磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類和孔雀石綠。

2.研究目的與意義

孔雀石綠作為一種三苯甲烷類化合物，在許多研究中表明，三苯甲烷容易引起生命體器官組織脂質(zhì)過氧化，易使器官內(nèi)的氧壓發(fā)生變化，加速細胞的死亡，從而引發(fā)腫瘤?？芍赂伟⒓谞钕侔?，在動物試驗中發(fā)現(xiàn)，其對妊娠中的兔子有致畸作用，對動物肝、腎、心、脾、肺等器官組織引起中毒反應(yīng)。同時，在針對孔雀石綠和隱色孔雀石綠的致基因突變的試驗中，結(jié)果均為陽性。目前，已有報道稱從生病的鮭魚中分離出了能耐受孔雀石綠的菌株。耐藥性的產(chǎn)生導(dǎo)致生產(chǎn)過程中孔雀石綠的用藥量逐漸增大，人類通過日常生活中食用水產(chǎn)品這一渠道，很容易獲得具有抗藥性的細菌，使得人類致病菌抗藥性的能力增強，從而對人類的身體健康造成嚴重威脅。所以，對孔雀石綠的檢測研究刻不容緩，目前也已有較為成熟的標準方法，如何在現(xiàn)有的檢測方法基礎(chǔ)上，優(yōu)化改良更加高效可靠的檢測方法至關(guān)重要，也是未來漁藥獸藥殘留檢測技術(shù)發(fā)展的重要方向。