李住 陸錦天 劉智俊

(上海市水產研究所，上海市水產技術推廣站，上海 200433)

中華絨螯蟹(Eriocheirsinensis)俗稱河蟹、大閘蟹，是我國重要的淡水經濟蟹類。隨著河蟹養(yǎng)殖規(guī)模的擴大，苗種需求量也逐漸增大，從而促進了河蟹人工育苗技術的不斷發(fā)展和成熟。有關河蟹胚胎和幼體發(fā)育的研究已屢見報道，從幼體生態(tài)[1]、器官發(fā)生[2-3]、生化組成[4-5]、酶活變化[6]、超微結構[7]等基礎性的研究，到食性分析[8-9]、營養(yǎng)需求[10-12]、苗種質量評估[13]、投喂模式[14]等與育苗生產息息相關的應用性研究，為河蟹產業(yè)提供了豐富的理論支撐。

甲殼類動物由卵黃提供整個胚胎發(fā)育階段所需的營養(yǎng)物質，且隨著胚胎發(fā)育末期卵黃物質逐步消耗殆盡，卵黃囊特化為肝胰腺前體，幼體營養(yǎng)模式也由內源性轉為外源性，并隨著胚胎孵化和幼體發(fā)育逐步形成肝胰腺[15]，即由最初的雙囊狀結構逐漸分化為多管狀結構，細胞從單一柱狀上皮細胞進一步分化為有特定功能的4種肝胰腺細胞[16-17]。中華絨螯蟹也是如此。目前對中華絨螯蟹胚胎發(fā)育后期至幼體生長階段肝胰腺發(fā)育的研究報道較少。本研究通過組織學和免疫組化方法研究了中華絨螯蟹胚胎發(fā)育末期至仔蟹Ⅲ期卵黃囊消失及肝胰腺發(fā)育的時間節(jié)點及形態(tài)特征變化，探索肝胰腺早期發(fā)育模式，旨在豐富中華絨螯蟹幼體發(fā)育生物學理論，為其幼體早期的培育生產提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 試驗用蟹養(yǎng)殖及樣品采集

試驗用中華絨螯蟹親本在上海海洋大學如東河蟹育苗實驗基地開展強化培育。于2018年12月22日挑選肢體健全、性腺發(fā)育良好的6只雌蟹和3只雄蟹轉移到雙層PVC桶(直徑1.0 m，高1.2 m)內。桶底部鋪設10 cm厚黃沙，水深70 cm，水體鹽度為15。雌蟹和雄蟹在桶內自行交配，1周后，將雄蟹移出以避免影響雌蟹產卵。2018年12月29日至2019年1月2日，雌蟹陸續(xù)抱卵，使用標簽對各抱卵雌蟹進行編號，并記錄每只雌蟹開始抱卵的時間，以便之后進行胚胎連續(xù)跟蹤采樣。每天16:00投喂足量的新鮮縊蟶，次日上午清除殘餌，并用新鮮海水更換桶內30%～50%水體。雌蟹親本抱卵后，每天從親本蟹體上取卵粒置于解剖鏡下觀察胚胎發(fā)育情況。中華絨螯蟹胚胎發(fā)育共分為7期：Ⅰ(受精卵)，Ⅱ(卵裂期)，Ⅲ(囊胚期)，Ⅳ(原腸期)，Ⅴ(眼點期)，Ⅵ (色素期)，Ⅶ(心跳期)。當胚胎發(fā)育至心跳期時開始采集心跳期胚胎及后續(xù)孵化出的溞狀幼體Ⅰ～Ⅴ期(Z1～Z5)和大眼幼體期(M)樣品。

大眼幼體階段采樣完成后，將剩余的大眼幼體進行淡化處理并轉移至上海海洋大學崇明基地繼續(xù)養(yǎng)殖。試驗塘的規(guī)格為7.8 m×7.8 m×0.7 m(長×寬×高)，四周設置雙層防逃塑料板，池塘中種植水花生，定期采樣觀察大眼幼體的變態(tài)發(fā)育情況，并分別采集仔蟹Ⅰ～Ⅲ期(J1～J3)樣品。所有樣品用伯恩氏液固定24 h后保存于70%的酒精中，用于后續(xù)的組織學及免疫組化分析。

1.2 蘇木精-伊紅染色

蘇木精-伊紅染色(HE染色)：所有樣品采用酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋(56～58 ℃)，使用科迪KD-2258型切片機連續(xù)切片，切片厚度為5.0～6.0 μm，石蠟切片經梯度酒精脫蠟至水，浸入蘇木精染色25 min，鹽酸酒精分色，自來水流水沖洗30 min進行返藍，經80%酒精5 min，90%酒精5 min后浸入伊紅染色1 min，經梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，采用尼康顯微鏡觀察拍照。

1.3 免疫組織化學

石蠟切片經梯度酒精脫蠟至水，滴加3% H2O2，室溫孵育20 min，以滅活內源性過氧化物酶，用PBS緩沖液(0.01 mol/L，pH 7.2～7.6)沖洗5 min×3次，用枸櫞酸鹽緩沖液(pH 6.0)進行抗原熱修復，水浴加熱94 ℃，40 min，PBS沖洗5 min×3次，滴加5% BSA封閉非特異性抗原，室溫孵育30 min，傾去血清，滴加小鼠抗中華絨螯蟹卵黃磷蛋白單克隆抗體(工作濃度1∶200)，4 ℃過夜。次日，用PBS沖洗5 min×3次，滴加多聚體抗小鼠IgG-HRP，37 ℃恒溫箱孵育30 min，PBS沖洗5 min×3次，DAB顯色，自來水沖洗，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹脂封片，用尼康顯微鏡觀察拍照。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

使用Image pro plus 6.0軟件分析顯微照片，對中華絨螯蟹幼體肝胰腺上皮細胞高度進行測量，每個樣品測定30個細胞。所有數(shù)據(jù)采用：“平均值±標準差”表示。用SPSS 17.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析，用Levene法進行方差齊性檢驗，當不滿足齊性方差時對百分比數(shù)據(jù)進行反正弦或者平方根處理，用ANOVA對試驗結果進行方差分析，設P<0.05為差異顯著。在EXCEL上繪制相關圖表。

2 結果

2.1 中華絨螯蟹溞狀幼體肝胰腺發(fā)育組織學觀察

中華絨螯蟹溞狀幼體肝胰腺的發(fā)育情況詳見表1和圖1、圖2。雌蟹抱卵后20 d，胚胎發(fā)育進入原腸期。隨著細胞的進一步分裂，透明區(qū)形成細胞密集區(qū)域，稱為胚區(qū)，胚區(qū)后端形成原口，這是未來幼體胸腹部發(fā)生區(qū)域。此區(qū)域逐步發(fā)育向卵黃內部延伸，稱為內胚層細胞，而原有的囊胚層細胞則發(fā)育成外胚層。內胚層細胞不斷吸收卵黃物質向內生長，另一部分內胚層細胞則移到胸腹部發(fā)生區(qū)域沿外側生長，兩者逐步延伸形成包裹狀結構，將卵黃區(qū)環(huán)繞，中華絨螯蟹卵黃囊結構初步形成。隨后，隨著胚胎的發(fā)育，卵黃物質逐步消耗，卵黃囊逐漸縮小。當胚胎發(fā)育至心跳后期(抱卵后93 d)，心跳速度加快，胚胎即將孵化。外觀可見，胚胎近乎透明，眼點發(fā)育完全，卵黃囊為對稱斑塊(圖1-1)。組織學觀察顯示，卵黃囊中尚有卵黃物質(圖1-2，YG)，其中已出現(xiàn)較多空隙，卵黃囊壁增厚(圖1-2，HR)，中腸從中穿過(圖1-3，G)，已能分辨出含大量泡狀結構的柱狀上皮細胞(圖1-3，HR)，此時可認為肝胰腺前體已經形成，但此時柱狀上皮細胞高度僅為(14.38±2.67)μm，尚無功能分化。

表1 中華絨螯蟹幼體及仔蟹肝胰腺發(fā)育情況Tab.1 Hepatosomatic development of larval and juvenile E. sinensis

雌蟹抱卵后96 d，胚胎孵化，Ⅰ期溞狀幼體出膜。幼體全長(1 737±80)μm，呈三角形，分為頭胸甲和尾節(jié)兩部分，其中第二顎足末端具4根剛毛，為本期幼體重要分類依據(jù)。頭胸甲半透明，肝胰腺區(qū)域清晰可見，呈橘黃色(圖1-4)。組織學觀察顯示，此時肝胰腺為1對囊狀結構(圖1-5，H)，位于胸神經節(jié)和中腸兩側(圖1-6，TG、G)，除了不含卵黃物質，其形態(tài)結構與孵化前心跳期胚胎中的肝胰腺前體基本一致(圖1-6，H)，肝胰腺細胞高度略有降低，為(12.63±4.91)μm。

胚胎孵化后3 d，Ⅰ期溞狀幼體蛻殼成為Ⅱ期溞狀幼體，幼體全長(1 978±187)μm，幼體眼柄出現(xiàn)，第二顎足末端具6根剛毛。肝胰腺位于頭胸甲中部，外觀可見細密脂滴(圖1-7)。Ⅱ期溞狀幼體縱切組織學顯示，肝胰腺依然以囊狀結構為主體，但前后明顯拉長，此時肝胰腺前端已開始分葉，向復眼方向分上、下兩葉，左右對稱(圖1-8，H)，Ⅱ期溞狀幼體平切組織學顯示，肝胰腺向后尚未分葉，此時肝胰腺為“前四后二”的六葉結構(圖1-8，H)。肝胰腺細胞平均高度為(28.56±7.51)μm，首次能分辨出帶空泡的B細胞(圖1-8，BC)，以及在肝胰腺小葉尖端的E細胞(圖1-9，EC)。

胚胎孵化后6 d，Ⅱ期溞狀幼體蛻殼成為Ⅲ期溞狀幼體，幼體全長(2 954±243)μm，第二顎足具有8根剛毛，肝胰腺區(qū)域明顯增大，其中脂滴顆粒大小不一(圖1-10)。Ⅲ期溞狀幼體組織學縱切顯示，肝胰腺前端依舊為兩葉，后端也開始分為上、下兩葉，E細胞分布于小葉尖端(圖1-11，EC)，且近尖端區(qū)域囊狀結構進一步拉長開始轉為管狀結構。Ⅲ期溞狀幼體組織學平切顯示，肝胰腺中B細胞數(shù)量增多(圖1-12，BC)，且首次出現(xiàn)了強嗜堿性的F細胞(圖1-12，F(xiàn)C)，肝胰腺細胞平均高度為(32.78±10.68)μm，此時肝胰腺為“前四后四”的八葉結構。

胚胎孵化后8 d，Ⅲ期溞狀幼體蛻殼成為Ⅳ期溞狀幼體，幼體全長(3 821±203)μm，第二顎足具有10根剛毛。肝胰腺區(qū)域向后延伸至頭胸甲末端(圖1-13)。Ⅳ期溞狀幼體組織學縱切顯示，肝胰腺已充滿整個頭胸甲(圖1-14，H)，前端四葉結構每葉進一步分出兩葉，后端維持不變，放大顯示，肝胰腺中具有發(fā)達的B細胞，E細胞依然分布于盲端(圖1-15，BC、EC)，此時肝胰腺細胞平均高度為(40.74±13.70)μm，肝胰腺為“前八后四”的十二葉結構。

胚胎孵化后12 d，Ⅳ期溞狀幼體蛻殼成為Ⅴ期溞狀幼體，幼體全長(4 901±342)μm，第二顎足具有12根剛毛。Ⅴ期溞狀幼體組織學縱切顯示，肝胰腺中脂滴豐富，存在大量空泡狀結構(圖1-16)，肝胰腺小葉數(shù)量與上一期幼體一致，已經出現(xiàn)了真正意義上的管狀結構(圖1-17，H)，不僅出現(xiàn)了由E細胞圍繞而成的肝胰腺盲端(圖1-17，EC)，還首次出現(xiàn)了與成蟹肝胰腺相似的星形管狀結構(圖1-18，H)，肝胰腺細胞平均高度為(44.16±13.57)μm。

2.2 中華絨螯蟹大眼幼體及仔蟹肝胰腺發(fā)育組織學觀察

胚胎孵化后15 d，Ⅴ期溞狀幼體蛻殼成為大眼幼體，幼體全長(5 382±377)μm，體形扁平，有額刺結構，背刺、側刺及尾叉結構均消失，復眼發(fā)達，胸足5對，第一對為大螯，呈鉗狀。大眼幼體肝胰腺組織學顯示，肝胰腺呈星芒狀向四周擴散(圖2-1，H)，腸道中有食物(圖2-2，G)。大眼幼體肝胰腺中有F、B、E 3種細胞，B細胞中有待消化物質，E細胞只出現(xiàn)在肝小管盲端和新突起的盲囊上(圖2-2，F(xiàn)C、BC、EC)，在肝小管中已發(fā)現(xiàn)脫落的內皮，且從肝小管上有較多盲囊狀突起向外生長(圖2-3，CA)，這些盲囊狀突起將發(fā)育為新的肝小管，此時僅憑組織學觀察已無法明確肝小管的數(shù)量。肝胰腺細胞平均高度為(44.93±18.27)μm。

1.心跳期胚胎外觀；2.心跳期胚胎縱切組織學(附圖：肝胰腺前體細胞放大)；3.心跳期胚胎橫切組織學；4.I期溞狀幼體外觀；5.I期溞狀幼體縱切組織學；6.I期溞狀幼體平切；7.Ⅱ期溞狀幼體外觀；8.Ⅱ期溞狀幼體縱切組織學；9.Ⅱ期溞狀幼體平切組織學；10.Ⅲ期溞狀幼體外觀；11.Ⅲ期溞狀幼體縱切組織學；12.Ⅲ期溞狀幼體平切組織學；13.Ⅳ期溞狀幼體外觀；14.Ⅳ期溞狀幼體縱切組織學；15.Ⅳ期溞狀幼體縱切組織學放大；16.Ⅴ期溞狀幼體外觀；17.Ⅴ期溞狀幼體縱切組織學；18.Ⅴ期溞狀幼體縱切組織學放大。YG：卵黃物質；HR：肝胰腺前體；H：肝胰腺；G：腸道;TG：胸神經節(jié);BC:B細胞;FC:F細胞;EC:E細胞;E:復眼。1.external appearance of protozoea;2.slitter histology of protozoea;3.transection histology of protozoea;4.external appearance of Zoea Ⅰ;5.slitter histology of Zoea Ⅰ;6.truncation histology of Zoea Ⅰ;7.external appearance of Zoea Ⅱ;8.slitter histology of Zoea Ⅱ;9.truncation histology of Zoea Ⅱ;10.external appearance of Zoea Ⅲ;11.slitter histology of Zoea Ⅲ;12.truncation histology of Zoea Ⅲ;13.external appearance of Zoea Ⅳ;14.slitter histology of Zoea Ⅳ;15.slitter histology of Zoea Ⅳ;16.external appearance of Zoea Ⅴ;17.slitter histology of Zoea Ⅴ;18.slitter histology of Zoea Ⅴ.YG:Yolk;HR:prohepatopancreas;H:hepatopancreas;G:gut;TG:ganglia thoracalia;BC:B cell;FC:F cell;EC:E cell；E：compound eyes.圖1 中華絨螯蟹晚期胚胎及溞狀幼體階段肝胰腺組織學切片F(xiàn)ig.1 Hepatosomatic histology of embryo and zoea of the E. sinensis

1.大眼幼體縱切組織學；2.大眼幼體單側肝胰腺平切；3.大眼幼體肝胰腺組織學放大；4.Ⅰ期仔蟹平切；5.Ⅰ期仔蟹肝小管組織學；6.早期R細胞組織學；7.Ⅱ期仔蟹平切組織學；8.Ⅱ期仔蟹肝小管組織學；9.Ⅱ期仔蟹R細胞組織學；10.Ⅲ期仔蟹平切組織學；11.Ⅲ期仔蟹肝小管組織學；12.Ⅲ期仔蟹肝小管組織學放大。H：肝胰腺；G：腸道；CA：肝胰腺盲囊；Gi：鰓；RC：R細胞；TG：胸神經節(jié)；BC：B細胞；FC:F細胞;EC:E細胞。1.slitter histology of megalopa;2.truncation histology of megalopa hepatopancreas;3.truncation histology of megalopa hepatopancreas;4.truncation histology of stage Ⅰ juvenile;5.hepatopancreas histology of stage Ⅰ juvenile;6.histology of early stage R cells;7.truncation histology of stage Ⅱ juvenile;8.hepatopancreas histology of stage Ⅱ juvenile;9.histology of juvenile stage Ⅱ R cells;10.truncation histology of stage Ⅲ juvenile;11.hepatopancreas histology of stage Ⅲ juvenile;12.hepatopancreas histology of stage Ⅲ juvenile(zoom in).H：hepatopancreas;G：gut;CA：Hepatopancreas caecum;Gi:gill;RC：R cell;TG:ganglia thoracalia;BC：B cell;FC:F cell;EC:E cell.圖2 中華絨螯蟹大眼幼體及仔蟹階段肝胰腺組織學切片F(xiàn)ig.2 Hepatosomatic histology of megalopa and juvenile E. sinensis

大眼幼體經11 d后蛻殼成Ⅰ期仔蟹。組織學觀察可見，此時肝胰腺與肌肉、鰓處于同一平面(圖2-4，H、Mu、Gi)，除了F、B、E 3種細胞外，肝小管形態(tài)接近圓形，與成蟹相似(圖2-5，H)。首次出現(xiàn)了細胞質中含有細小空泡的細胞(圖2-6，RC)，可能為R細胞的前體，肝胰腺細胞高度為(53.09±12.27)μm。

Ⅰ期仔蟹經7 d后蛻殼成為Ⅱ期仔蟹。組織學觀察可見，肝胰腺位于頭胸甲中部(圖2-7，H)，肝胰腺橫截面均呈多角星形結構(圖2-8，H)，肝胰腺細胞高度為(55.70±10.75)μm，F(xiàn)、B、R、E 4種細胞齊全，R細胞中充滿細密脂滴，形態(tài)結構已與成蟹無異(圖2-9，RC)，預示著自此階段開始，中華絨螯蟹肝胰腺除了進一步繼續(xù)發(fā)育增加肝小管數(shù)量外，其功能已基本完善。B細胞比例的提升及其頂泡中的未消化物質表明，Ⅱ期仔蟹相比之前階段的幼體和I期仔蟹已有較強的吸收能力，而R細胞中密集出現(xiàn)的空泡則表明肝胰腺已有一定儲存營養(yǎng)物質的能力。

Ⅱ期仔蟹經6 d后蛻殼成為Ⅲ期仔蟹，肝小管數(shù)量進一步增多，延伸至頭胸甲內各個位置，圍繞于肌肉、胸神經節(jié)、腸道(圖2-10，Mu、TG、G)，肝胰腺結構與Ⅱ期仔蟹無異(圖2-12，BC、RC)，肝胰腺細胞高度為(56.38±5.69)μm。

1.囊胚期胚胎卵黃磷蛋白免疫組化；2.原腸期胚胎卵黃磷蛋白免疫組化；3.心跳期胚胎卵黃磷蛋白免疫組化；4.I期溞狀幼體卵黃磷蛋白免疫組化；5.Ⅳ期溞狀幼體卵黃磷蛋白免疫組化；6.大眼幼體卵黃磷蛋白免疫組化。*為卵黃磷蛋白免疫組化陽性位點；HR：肝胰腺前體；H：肝胰腺；Gi：鰓；G：腸道。1.vitellin immunohistochemistry in blastula stage;2.vitellin immunohistochemistry in Gastrula stage;3.vitellin immunohistochemistry in protozoea;4.vitellin immunohistochemistry in Zoea Ⅰ;5.vitellin immunohistochemistry in Zoea Ⅳ;6.vitellin immunohistochemistry in megalopa.*vitellin immunohistochemistry positive material;HR：prohepatopancreas;H：hepatopancreas;Gi：gill；G：gut.圖3 中華絨螯蟹胚胎及幼體階卵黃磷蛋白免疫組化Fig.3 Vitellin immunohistochemistry in embryo and larval stage of E. sinensis

2.3 中華絨螯蟹胚胎發(fā)育末期、幼體卵黃磷蛋白免疫組化

卵黃磷蛋白是1種普遍存在于卵生非哺乳動物血液中的雌性特異性蛋白，其作為載體蛋白進入蟹類的卵母細胞，為胚胎和早期幼體提供必需的營養(yǎng)物質。通過免疫組化技術對中華絨螯蟹胚胎和幼體中的卵黃磷蛋白進行定位，結果表明，胚胎發(fā)育到囊胚期和原腸期時，卵黃磷蛋白強陽性位點均分布于卵黃囊內，密集圍繞于卵黃島周圍(圖3-1、3-2)，當胚胎發(fā)育至心跳期時，卵黃囊中已無卵黃磷蛋白強陽性位點，僅在卵黃囊外周，圍繞肝胰腺前體細胞有弱陽性位點(圖3-3，HR)。隨后胚胎孵化，卵黃磷蛋白陽性位點消失，溞狀幼體和大眼幼體的肝胰腺區(qū)域均無發(fā)現(xiàn)(圖3-4、3-5、3-6)，表明中華絨螯蟹在胚胎發(fā)育中期是動用卵黃磷蛋白的高峰期，而胚胎發(fā)育末期卵黃磷蛋白已消耗殆盡，初孵幼體已不帶有卵黃磷蛋白。

3 討論

3.1 中華絨螯蟹幼體及仔蟹階段肝胰腺形態(tài)發(fā)育

當中華絨螯蟹胚胎發(fā)育至囊胚期后期時，一部分內胚層細胞不斷吸收卵黃物質向內生長，另一部分內胚層細胞則移到胸腹部發(fā)生區(qū)域沿外側生長，兩者逐步延伸形成包裹狀結構將卵黃區(qū)環(huán)繞，形成卵黃囊結構，此特征與三疣梭子蟹相似[15]。隨著胚胎發(fā)育的進行，卵黃囊中的卵黃物質逐步消耗，卵黃囊體積逐步減小，當胚胎發(fā)育到心跳期階段，中腸深入卵黃囊并從中穿過，將卵黃囊分割為兩個獨立腔體，且卵黃囊壁增厚，排列著一圈帶空泡結構的柱狀上皮細胞。這兩對獨立腔體是幼體肝胰腺發(fā)育的基礎，可稱為肝胰腺前體，而由肝胰腺前體發(fā)育為真正意義上的肝胰腺，是1個相對連續(xù)的發(fā)育過程，主要包含兩個方面的要素：首先是從形態(tài)學上呈現(xiàn)為雙葉多管狀致密結構，其次是肝胰腺中分化出形態(tài)特征明顯、各具重要功能的4種柱狀上皮細胞。以往的研究表明，在不同甲殼類動物的肝胰腺發(fā)育過程中，肝小管的數(shù)量、長度、形態(tài)變化及與幼體發(fā)育時間節(jié)點的契合均有所不同，但發(fā)育規(guī)律均是隨著幼體的發(fā)育，肝胰腺的體積逐步增大，肝小管數(shù)目增多，肝胰腺細胞分化逐步完善。例如在三疣梭子蟹和鋸緣青蟹中，肝胰腺分葉均自溞狀幼體1期開始[16-17]，中國對蝦肝胰腺分葉自無節(jié)幼體4期至5期開始[18]，中國龍蝦肝胰腺分葉從葉狀幼體1期開始[19]。在本研究中，中華絨螯蟹肝胰腺分葉是從溞狀幼體Ⅱ期開始的。

3.2 中華絨螯蟹幼體及仔蟹階段肝胰腺細胞種類變化規(guī)律

甲殼動物成熟肝胰腺中包含4種細胞，分別為E、F、R、B細胞，對于4種細胞的功能，在學術上已有較一致的結論[20-23]。E細胞主要分布于肝小管盲端，其排列致密，細胞核體積占比較大，HE染色呈強嗜堿性，為未分化的胚細胞，可分化為其他3種類型的細胞；F細胞HE染色也呈強嗜堿性，但呈高圓柱狀，胞核大而圓，核仁明顯，超微結構研究表明，其胞質有極為發(fā)達的粗面內質網和豐富的游離核糖體，主要起合成糖原、蛋白酶原作用；B細胞主要以胞飲方式吸收營養(yǎng)，兼具分泌功能，其最明顯的特征是含有巨大的頂泡結構，胞質中還有小的分泌泡，泡內含有少量細顆粒狀物可進行胞內消化。超微結構研究表明，B細胞粗面內質網發(fā)達，胞核呈圓形，具有1～2個核仁，位于核中央；R細胞的顯著特點是胞質內含有較多細密的儲存物質囊泡，囊泡多位于底部，易與B細胞的頂泡進行區(qū)分。囊泡內富含脂滴，其內貯存有脂肪顆粒和糖原，超微結構研究表明，R細胞內可見游離的核糖體和吞噬泡，粗面內質網、線粒體等細胞器數(shù)量少，滑面內質網比較豐富，具有吸收、貯存營養(yǎng)物質(脂肪、糖原)的功能。一般認為E細胞分化有兩個方向，一個方向是由E細胞分化為F或B細胞，另一個方向是由E細胞分化為R細胞。在本研究中，中華絨螯蟹肝胰腺中E細胞和B細胞首先出現(xiàn)，其中E細胞始終出現(xiàn)在肝胰腺小葉的最尖端，表明其旺盛的生長能力。B細胞自溞狀幼體Ⅱ期出現(xiàn)，且隨后在肝胰腺中一直占主導地位。與之相對的，R細胞出現(xiàn)最晚，直至Ⅱ期仔蟹才出現(xiàn)在肝胰腺中。十足目甲殼動物的代謝模式均為自體營養(yǎng)，孵化后，其體內內源性卵黃物質較少，且包含多幼體階段變態(tài)發(fā)育，一般來說耐饑餓能力較差，存在饑餓脅迫的不可逆點。以往對中華絨螯蟹幼體的耐饑餓能力研究表明，中華絨螯蟹在Ⅰ期溞狀幼體階段，饑餓超過4 d后恢復投餌，幼體依然不能再次恢復正常發(fā)育[24]。本研究中，中華絨螯蟹幼體及仔蟹肝胰腺細胞種類的變化規(guī)律也表明了中華絨螯蟹在幼體和仔蟹階段發(fā)育迅速，需要的大量營養(yǎng)物質均由消化吸收功能支撐，而其儲存營養(yǎng)物質的能力尚不健全。因此，在中華絨螯蟹苗種培育階段，采用適口、營養(yǎng)價值全面的餌料和合理的投喂節(jié)律是促進其正常生長發(fā)育和提高苗種存活率的重要保障。