唐炬光 賴小斌 朱志華 盧本銘 彭瑞英

摘要：目的：研究青藤堿對荷前列腺癌裸鼠抗腫瘤作用。方法：將荷PC3前列腺癌小鼠按照隨機對照原則，為模型A組、青藤堿B組、雷帕霉素C組、青藤堿+1/2雷帕霉素D組，每組各15例裸鼠，一共4組。各組均采取腹腔注射給藥。其中模型A組每天注射生理鹽水0.2ml，青藤堿B組每天注射青藤堿40mg/kg，雷帕霉素C組每天注射雷帕霉素20 mg/kg，青藤堿+1/2雷帕霉素D組每天注射青藤堿40mg/kg和雷帕霉素10mg/kg。自給藥日起，每隔2 d測定腫瘤體積1次，并觀察每組小鼠的死亡情況并做記錄。給藥12天后，觀察各組裸鼠精神狀態(tài)、體重及腫瘤體積，處死裸鼠，取各組腫瘤組織，采取Western-blot法檢測各組caspase-3，ELISA法檢測IL-6、IL-8、TGF-β，采用流式細胞術(shù)檢測各組Treg，HE染色法檢測各組移植瘤的病理情況，留取各組裸鼠靜脈血，不良反應(yīng)發(fā)生率以檢測各組肝腎功能情況表示。結(jié)果：D組對荷瘤裸鼠的腫瘤抑制作用優(yōu)于A組、B組、C組（P<0.05）;D組對腫瘤的抑制率優(yōu)于A、B、C組（P<0.05）。同時各組給藥前后裸鼠的體質(zhì)量并未出現(xiàn)明顯的增加或減少，對裸鼠的肝臟也未見有明顯的影響。與A組相比，B組、C組、D組均可抑制腫瘤體積的增長，降低腫瘤組織中VEGF的表達水平，D組對腫瘤抑制作用更佳，且未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)（P<0.05）;與A組相比，B組、C組、D組均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D組對降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳（P<0.05）。結(jié)論：青藤堿可以提高抑瘤率，抑制腫瘤體積的增長，降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，且未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，具有較好的安全性。

關(guān)鍵詞：青藤堿;荷前列腺癌;裸鼠;抗腫瘤

前列腺癌（Prostate cancer，PCa）是男性最常見的三大癌癥之一，最新統(tǒng)計表明前列腺癌的發(fā)病率在中國65歲以上的男性中呈現(xiàn)快速增長的趨勢[1]。雖然在前列腺癌的起病階段可以通過手術(shù)、放療、雄激素剝奪療法（Androgen deprivation therapy，ADT）等進行成功治療，但是幾乎所有晚期前列腺癌患者最終都會進展為去勢抵抗性前列腺癌（Castration resistant prostate cancer，CRPC），并對一線ADT和其他激素療法產(chǎn)生內(nèi)在或獲得性抗性[2]。中醫(yī)藥在治療西醫(yī)認(rèn)為的疑難雜癥具備顯著的有優(yōu)勢。尤其在腫瘤的防治上，更是積累了大量的臨床經(jīng)驗，也取得了一系列的臨床療效，研究前景廣闊。本研究結(jié)合青藤堿在多種腫瘤的防治效果研究，認(rèn)為本研究設(shè)計方案合理，可行性大，為青藤堿在前列腺癌的防治上積累可靠的實驗動物資料，同時也為中醫(yī)藥在腫瘤的防治上提供重要的實驗動物參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1 材料及試劑

人前列腺癌PC-3細胞株購自中國科學(xué)院細胞庫。BALB/c裸鼠（SPF級），♂，體質(zhì)量22～25 g，鼠齡4～6周（由上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司提供，浙江大學(xué)動物中心養(yǎng)殖，實驗動物使用許可證：SYXK2012-0178）;血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）（150?L，谷歌生物公司，批號：GB11034）。

1.2 方法

PC3前列腺癌小鼠模型的建立常規(guī)培養(yǎng)PC3細胞，維持細胞處于對數(shù)生長期，調(diào)節(jié)活細胞濃度，使每只裸鼠分別接種2×106細胞，溶于150μLPBS和50μL基質(zhì)膠，將腫瘤細胞注射于裸鼠腋窩皮下，注射后有鼓包出現(xiàn)且持續(xù)一段時間視為接種成功。1周后檢查裸鼠是否成瘤。7天后出現(xiàn)腫瘤節(jié)點，建立DU145荷瘤裸鼠模型。共接種60只雄性裸鼠，每3天測量記錄一次體重和腫瘤體積，實時觀察生活狀態(tài)。

1.3 觀察指標(biāo)

（1）給藥12天后，比較不同給藥組對荷瘤裸鼠的腫瘤抑制作用。

（2）給藥12天后，觀察各組裸鼠精神狀態(tài)、體重及腫瘤體積，腫瘤體積=（腫瘤長徑×腫瘤寬徑2）/2，抑瘤率=（模型組平均瘤重-實驗組平均瘤重）/模型組平均瘤重×100%。同時取裸鼠的肝臟進行稱重，并將瘤塊用甲醛固定，進一步進行免疫組化分析。

（3）留取各組裸鼠靜脈血，不良反應(yīng)發(fā)生率以檢測各組肝腎功能情況表示。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

采用SPSS23.0軟件進行數(shù)據(jù)處理，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用t檢驗;計數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 不同給藥組對荷瘤裸鼠的腫瘤抑制作用

給藥后各給藥組對移植瘤體積的增長都有抑制作用。其中A組的抑制作用相對較差，腫瘤體積從（200.36±26.99）mm3增長到了（605.81±15.31）mm3，B組的腫瘤體積從（201.71±72.77）mm3增長到了（245.09±38.57）mm3，C組的腫瘤體積從（197.36±35.99）mm3增長到了（400.78±28.09）mm3，D組的腫瘤體積從（196.24±24.87）mm3增長到了（222.24±14.87）mm3，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 各組荷瘤小鼠體質(zhì)量、肝臟質(zhì)量、瘤塊質(zhì)量及抑瘤率的比較

D組對腫瘤的抑制率優(yōu)于A、B、C組（P<0.05）。同時各組給藥前后裸鼠的體質(zhì)量并未出現(xiàn)明顯的增加或減少，對裸鼠的肝臟也未見有明顯的影響，結(jié)果見表1。

2.3 各組大鼠血清細胞因子水平比較

與A組相比，B組、C組、D組均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D組對降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳（P<0.05）。見表2。

2.4 兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率的比較B216F225-7544-4ACC-A9CB-09939424259D

各給藥組荷瘤裸鼠在給藥后未見明顯的活動減少、便秘、腹瀉等不良反應(yīng)，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

在泌尿外科中，前列腺癌是最常見的惡性腫瘤之一。前列腺癌是雄性激素敏感性腫瘤，治療方式一般是在癌癥早期采用雄激素剝奪療法或睪丸切除治療。然而，隨著時間的推移，前列腺癌的生長變得不依賴于雄性激素治療，但是該藥物療效有限，并且毒性大，不良反應(yīng)嚴(yán)重，這無疑降低了人們對于這些藥物治療的期望[3]。中醫(yī)藥在治療西醫(yī)認(rèn)為的疑難雜癥具備顯著的優(yōu)勢。尤其在腫瘤的防治上，更是積累了大量的臨床經(jīng)驗，也取得了一系列的臨床療效標(biāo)準(zhǔn)，研究前景廣闊。

本研究將青藤堿運用在裸鼠中，研究結(jié)果顯示，給藥后各給藥組對移植瘤體積的增長都有抑制作用，且將青藤堿與雷帕霉素聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。另外，本研究結(jié)果還顯示，青藤堿與雷帕霉素聯(lián)合應(yīng)用裸鼠的體質(zhì)量并未出現(xiàn)明顯的增加或減少，對裸鼠的肝臟也未見有明顯的影響，分析其原因在于從中藥白樺中提取出的白樺脂酸可顯著抑制腫瘤細胞生長，該效應(yīng)是通過上調(diào)抑癌基因p53表達而實現(xiàn)的?？鄥A、莪術(shù)尤其具有抗腫瘤效應(yīng)的機制是這些藥物抑制了bcl-2的表達，而bcl-2屬于凋亡抑制基因，降低bcl-2意味著加速腫瘤細胞的凋亡，促進機體恢復(fù)健康。中藥青風(fēng)藤味苦，能祛風(fēng)濕、通經(jīng)絡(luò)和利小便，另外青藤堿（SIN）是從青風(fēng)藤提取出來的有效活性單體，具有免疫抑制和抗炎作用[4]。本研究將青藤堿運用在裸鼠中，研究結(jié)果顯示與A組相比，B組、C組、D組均可降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，D組對降低IL-6、IL-8、TGF-β水平效果更佳，且兩組患者不良反應(yīng)發(fā)生率的比較，差異不具有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。

綜上所述，青藤堿可以提高抑瘤率，抑制腫瘤體積的增長，降低患者IL-6、IL-8、TGF-β水平，且未發(fā)現(xiàn)明顯的毒性反應(yīng)，具有較好的安全性。

參考文獻

[1]陳薛，譚鄧旭，趙寧寧，趙勇，張彩勤，白冰，師長宏.前列腺癌人源性異種移植裸鼠模型的建立與治療[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2019，29（5）：38-43.

[2]毛立軍.荷載SATB1基因shRNA的溶瘤腺病毒治療前列腺癌[D].蘇州大學(xué)，2018：1-142.

[3]陳嘉勝.木香烴內(nèi)酯聯(lián)合多柔比星治療前列腺癌的作用及機制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2018：1-111.

[4]袁璞.MRI引導(dǎo)下基于TiO2的納米系統(tǒng)在前列腺癌治療中的應(yīng)用[D].鄭州大學(xué)，2019.B216F225-7544-4ACC-A9CB-09939424259D