宋德武，王貴升，牛志遠(yuǎn)，李玉杰，陳 靜，馬慧玲，邢琳琳，徐 聰

（1.張店區(qū)畜牧事業(yè)服務(wù)中心，山東淄博 255000；2.山東省動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，山東濟(jì)南 250000）

重大動(dòng)物疫情不僅可造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，還對(duì)公共衛(wèi)生安全造成威脅。目前對(duì)動(dòng)物實(shí)施免疫是控制重大動(dòng)物疫病最科學(xué)、最有效的措施之一，而制定合適的免疫方案和開(kāi)展有效的免疫抗體監(jiān)測(cè)是做好動(dòng)物免疫的重要保障[1-2]。開(kāi)展免疫抗體監(jiān)測(cè)，及時(shí)了解免疫抗體水平，對(duì)科學(xué)評(píng)估動(dòng)物疫病防控效果，從而為政府制定科學(xué)的動(dòng)物疫病預(yù)防控制規(guī)劃和預(yù)警提供依據(jù)具有十分重要的意義[3-4]。《2020年山東省動(dòng)物疫病強(qiáng)制免疫計(jì)劃及實(shí)施方案》要求，口蹄疫（FMD）、高致病性禽流感（HPAI）群體免疫密度應(yīng)常年維持在90%以上，其中應(yīng)免畜禽免疫密度應(yīng)達(dá)到100%，免疫抗體合格率全年保持在70%以上。山東省春季動(dòng)物疫病強(qiáng)制集中免疫在每年的4 月初開(kāi)始，5 月底結(jié)束。為了解山東省FMD、HPAI 等重大動(dòng)物疫病的春季集中免疫效果，開(kāi)展了本次血清抗體檢測(cè)，以期為下一步做好重大動(dòng)物疫病科學(xué)防控提供參考。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

按照獸醫(yī)流行病學(xué)抽樣數(shù)量計(jì)算中發(fā)現(xiàn)無(wú)疫或證明無(wú)疫的樣本量計(jì)算[5]，預(yù)設(shè)置信水平95%、試驗(yàn)敏感性95%、預(yù)定流行率10%，按不同畜禽種類(lèi)采樣。2020 年上半年，從每個(gè)地市隨機(jī)抽取1 個(gè)農(nóng)業(yè)縣，每個(gè)農(nóng)業(yè)縣隨機(jī)選擇牛、羊、豬、陸禽、水禽、家禽養(yǎng)殖場(chǎng)及屠宰場(chǎng)進(jìn)行血清采樣。區(qū)級(jí)動(dòng)物疫病控制中心完成本轄區(qū)的樣品采集送樣工作，省、市兩級(jí)指派專(zhuān)業(yè)技術(shù)人員共同組成工作組負(fù)責(zé)指導(dǎo)監(jiān)督。本次檢測(cè)共采集16 個(gè)市98 個(gè)場(chǎng)（戶(hù)）的2 909 份血清樣品。

1.2 檢測(cè)與結(jié)果判定

1.2.1 FMD 按照《口蹄疫診斷技術(shù)》（GB/T 18935—2018），采用液相阻斷ELISA 方法進(jìn)行O 型和A 型抗體檢測(cè)。試劑盒均由中國(guó)農(nóng)科院蘭州獸醫(yī)研究所生產(chǎn)，批號(hào)分別為20191128133 和20190701134。檢測(cè)操作和結(jié)果判定，均按照各說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 HPAI 按照《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T 18936—2003），采用血凝抑制試驗(yàn)（HI）方法進(jìn)行H5 亞型（Re-11、Re-12）和H7 亞型抗體檢測(cè)。各亞型抗原均由哈爾濱國(guó)生生物科技股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)分別為20191012、20191014和20190415。檢測(cè)操作按標(biāo)準(zhǔn)GB/T 18936—2003執(zhí)行，抗體效價(jià)≥24判為合格。

2 結(jié)果與分析

2.1 FMD

對(duì)51 個(gè)家畜養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）的1 500 份血清樣品（牛480 份、羊480 份、豬540 份）進(jìn)行O 型抗體檢測(cè)，檢出合格樣品1 256 份，樣品抗體合格率為83.73%，免疫合格場(chǎng)（戶(hù)）43 個(gè)，場(chǎng)免疫合格率為84.31%；對(duì)16 個(gè)牛養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）的480 份牛血清樣品進(jìn)行A 型FMD 抗體檢測(cè)，檢出合格抗體372 份，樣品抗體合格率為77.5%，免疫合格場(chǎng)11 個(gè)，場(chǎng)免疫合格率為68.75%。

從不同畜群檢測(cè)結(jié)果（表1）看，牛O 型抗體樣品合格率最高（90.83%），其次是豬（82.59%），羊最低（77.92%），但差異不顯著（P＞0.05），場(chǎng)群合格率均在80% 以上。從牛不同血清型抗體檢測(cè)結(jié)果（表2）看，O 型抗體樣品合格率（90.83%）和場(chǎng)合格率（87.50%）均大于A 型（77.69%、68.75%），抗體樣品合格率差異顯著（P＜0.05）。從不同區(qū)域檢測(cè)結(jié)果（表3）看，膠東半島無(wú)疫區(qū)抗體合格率均在95% 以上，普遍高于其他地區(qū)（77.18%～87.78%），差異顯著（P＜0.01）。

表1 不同畜種O 型FMD 抗體檢測(cè)結(jié)果

表2 牛場(chǎng)O 型和A 型FMD 抗體檢測(cè)結(jié)果

表3 不同區(qū)域FMD 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 HPAI

對(duì)47 個(gè)禽養(yǎng)殖場(chǎng)、屠宰場(chǎng)（19 個(gè)雞養(yǎng)殖場(chǎng)、12 個(gè)雞屠宰場(chǎng)、13 個(gè)鴨養(yǎng)殖場(chǎng)、3 個(gè)鴨屠宰場(chǎng)）的1 409 份血清樣品（雞930 份、鴨479 份）進(jìn)行抗體檢測(cè)，檢出H5 亞型（Re-11）抗體合格樣品1 088 份，抗體樣品合格率為77.22%，檢出合格場(chǎng)（戶(hù)）36 個(gè)，場(chǎng)免疫合格率為76.59%；檢出H5亞型（Re-12）抗體合格樣品1 094 份，抗體樣品合格率為77.64%，檢出合格場(chǎng)（戶(hù)）37 個(gè)，場(chǎng)免疫合格率為78.72%；檢出H7 亞型抗體合格樣品1 095 份，抗體樣品合格率為77.71%，檢出合格場(chǎng)（戶(hù)）36 個(gè)，場(chǎng)免疫合格率為76.59%。不同亞型抗體樣品合格率差異不顯著（P＞0.05）。

從不同場(chǎng)點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果（表4）看：雞養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體樣品合格率最高，3 種亞型的抗體合格率均為100%，而雞屠宰場(chǎng)合格率最低，均為33.33%；鴨養(yǎng)殖場(chǎng)和屠宰場(chǎng)的抗體樣品合格率均在78%以上。從不同區(qū)域檢測(cè)結(jié)果（表5）看，膠東半島無(wú)疫區(qū)各亞型抗體樣品合格率均在99%以上，而其他地區(qū)為90.13%～91.64%，差異顯著（P＜0.01）。

3 討論

3.1 全省整體免疫抗體水平

從檢測(cè)結(jié)果看，被檢測(cè)場(chǎng)（戶(hù)）的FMD 和HPAI 免疫抗體合格率均在70%以上，達(dá)到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的不低于70%的標(biāo)準(zhǔn)，表明全省春季集中免疫工作達(dá)到預(yù)期目標(biāo)。山東省自2019 年開(kāi)始全面推進(jìn)FMD 和HPAI 免疫無(wú)疫區(qū)建設(shè)，在這兩種重大疫病防控上投入大量人力、物力，不斷健全防疫隊(duì)伍體系與動(dòng)物疫病預(yù)防體系，深入推進(jìn)強(qiáng)制免疫“先打后補(bǔ)”政策，使得養(yǎng)殖場(chǎng)（戶(hù)）對(duì)FMD 和HPAI 的防控更加重視，因而取得了理想的免疫效果。

表4 47 個(gè)禽養(yǎng)殖場(chǎng)/屠宰場(chǎng)禽流感抗體檢測(cè)結(jié)果

表5 不同區(qū)域養(yǎng)殖場(chǎng)HPAI 抗體檢測(cè)結(jié)果

3.2 FMD 免疫效果

牛、羊、豬O 型FMD 免疫抗體合格率均符合國(guó)家規(guī)定要求，不同畜種間FMD 免疫抗體合格率差異不顯著。但有2 家羊場(chǎng)、1 家豬場(chǎng)免疫抗體合格率為0，這可能與免疫程序不合理、操作不規(guī)范、免疫密度低等原因造成的免疫失敗有關(guān)。16 家牛場(chǎng)的O 型FMD 免疫效果明顯優(yōu)于A 型。這16 家牛場(chǎng)都采用O 型、A 型二價(jià)滅活疫苗免疫，免疫程序基本一致，因此懷疑牛對(duì)二價(jià)疫苗中O 型免疫應(yīng)答要優(yōu)于A 型，需要進(jìn)一步優(yōu)化二價(jià)滅活苗免疫效果。

3.3 HPAI 免疫效果

47 個(gè)禽養(yǎng)殖場(chǎng)/屠宰場(chǎng)的H5 亞型（Re-11、Re-12）和H7 亞型抗體合格率差異不顯著，H5 亞型禽流感（Re-11）與H7 亞型抗體不合格場(chǎng)完全一致。利用Excel 中CORREL 函數(shù)計(jì)算32 個(gè)禽養(yǎng)殖場(chǎng)H5 亞型兩種毒株免疫抗體合格率相關(guān)性，結(jié)果為0.997，說(shuō)明養(yǎng)殖場(chǎng)的雞和鴨對(duì)同亞型、不同毒株的免疫應(yīng)答差異很小。但由于數(shù)據(jù)有限，可能結(jié)果存在片面性，需今后進(jìn)一步論證。

免疫抗體合格率的總體趨勢(shì)為雞養(yǎng)殖場(chǎng)＞鴨養(yǎng)殖場(chǎng)＞鴨屠宰場(chǎng)＞雞屠宰場(chǎng)。調(diào)查表明，雞養(yǎng)殖場(chǎng)均為蛋雞場(chǎng)，鴨養(yǎng)殖場(chǎng)為肉鴨場(chǎng)，雞屠宰場(chǎng)為肉雞屠宰場(chǎng)。蛋雞場(chǎng)飼養(yǎng)周期長(zhǎng)、免疫次數(shù)多，且高度重視免疫預(yù)防工作，因而免疫保護(hù)水平一直維持較高水平[6]；而肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)，一般只免疫1 次且免疫相對(duì)不規(guī)范，因此低于雞養(yǎng)殖場(chǎng)，但免疫合格率也在80%以上，況且鴨屠宰場(chǎng)抗體免疫合格率也高于70%，表明鴨養(yǎng)殖場(chǎng)整體免疫合格，可以提供整體免疫保護(hù)。12 家肉雞屠宰場(chǎng)中有8 家免疫抗體合格率為零，其主要原因可能是肉雞場(chǎng)沒(méi)有進(jìn)行HPAI 免疫，或免疫密度不夠、免疫程序不合理，因此須引起重視，進(jìn)一步關(guān)注疫情暴發(fā)風(fēng)險(xiǎn)。

3.4 免疫無(wú)疫區(qū)建設(shè)效果顯著

膠東半島免疫區(qū)FMD 和HPAI 免疫抗體水平明顯優(yōu)于其他地區(qū)，且所有免疫抗體樣品合格率都在95%以上，說(shuō)明通過(guò)無(wú)疫區(qū)建設(shè)，建立健全動(dòng)物防疫體系，提高基層防疫隊(duì)伍素質(zhì)，可顯著提高重大動(dòng)物疫病防控水平，這為推進(jìn)全省免疫無(wú)疫區(qū)建設(shè)提供了有力支撐。

4 結(jié)論

檢測(cè)分析發(fā)現(xiàn)，山東省FMD 和HPAI 免疫效果較好，達(dá)到了農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求的標(biāo)準(zhǔn)，其中膠東半島無(wú)疫區(qū)免疫效果更好，表明山東省春季FMD和HPAI 集中免疫工作達(dá)到預(yù)期目標(biāo)，膠東半島無(wú)疫區(qū)建設(shè)成果顯著。但有個(gè)別養(yǎng)殖場(chǎng)免疫效果不佳，提示應(yīng)進(jìn)一步提高免疫密度，加強(qiáng)監(jiān)測(cè)和免疫，尤其是肉雞養(yǎng)殖場(chǎng)，繼續(xù)推動(dòng)全省免疫無(wú)疫區(qū)建設(shè)。