楊 季 王思博 魯茗源 朱允慧 許 麗

(東北農(nóng)業(yè)大學動物科學技術學院，哈爾濱150030)

雞肉作為重要的動物蛋白質(zhì)來源越來越引起人們的重視，其中肌肉的顏色、嫩度和口味等都會影響消費者的購物欲望，但在家禽養(yǎng)殖、運輸及儲存等各個環(huán)節(jié)均易致使其氧化應激，從而引起肉制品質(zhì)量下降[1]。過去10年中人們發(fā)現(xiàn)，黃酮類化合物作為天然抗氧化劑可以通過清除氧自由基緩解氧化應激達到改善肉質(zhì)并延長貨架期的效果，且不會在產(chǎn)品或環(huán)境中殘留[2-3]，黃酮類化合物還可以通過對小腸上皮細胞中Notch信號相關基因的表達及分泌細胞和吸收細胞之間動態(tài)平衡的調(diào)控來調(diào)節(jié)其增殖分化，進而促進腸道發(fā)育[4-5]。橙皮苷(HSD)也被稱為生物類黃酮，廣泛存在于柑橘類水果中，具有抗炎、抗氧化、誘導腫瘤細胞的凋亡、減少腫瘤細胞的物質(zhì)代謝等多種生物活性[6]，還能夠促進胃腸蠕動，加快食物消化，提高飼料利用率[7]。據(jù)統(tǒng)計，中國是世界上柑橘種植面積和產(chǎn)量最大的國家，而每年實際產(chǎn)生的柑橘皮渣約50萬t，但大部分遭到廢棄[8]，所以合理使用柑橘提取HSD可以解決柑橘皮渣的資源利用問題，并為開發(fā)利用新的飼料原料提供思路。Simitzis等[9]發(fā)現(xiàn)在肉雞飼糧中添加1.5和3.0 g/kg的HSD對肉仔雞的末重與平均日增重(ADG)有提高趨勢，但差異不顯著；王海良等[10]發(fā)現(xiàn)在1～21日齡肉雞飼糧中添加50和150 g/t的HSD可顯著提高飼料轉(zhuǎn)化率，添加100 g/t HSD可顯著提高22～42日齡的飼料轉(zhuǎn)化率。目前關于HSD在畜牧生產(chǎn)上的研究相對較少，在家禽生產(chǎn)上的應用效果也不盡相同，以及HSD對家禽的肉品質(zhì)和腸道形態(tài)是否存在影響也未見統(tǒng)一的報道，使HSD在畜牧生產(chǎn)上得不到足夠的重視，但其具有良好的生物活性，是一種值得開發(fā)應用的飼料添加劑產(chǎn)品。因此，本試驗在基礎飼糧中采用梯度添加HSD的方法，通過探究HSD對肉仔雞的生長性能、肉品質(zhì)、肌肉抗氧化及腸道發(fā)育的影響，旨在為HSD在肉雞生產(chǎn)中的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設計

采用單因子完全隨機試驗設計，選取健康的、體重相近的1日齡愛拔益加(AA)肉雞公雛288只，隨機分為4組，每組6個重復，每個重復12只。飼糧中HSD(購自陜西某高科實業(yè)有限公司，實測值78.19%)的添加水平分別為0(對照組)、50(HSD 50組)、100(HSD 100組)和150 mg/kg(HSD 150組)。試驗期42 d。根據(jù)《雞飼養(yǎng)標準》(NY/T 33—2004)配制不添加HSD的基礎飼糧，并根據(jù)《中國飼料成分及營養(yǎng)價值表》(2018年第29版)計算營養(yǎng)水平，基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎飼糧組成及營養(yǎng)水平(風干基礎)

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗雞1～2日齡，溫度控制在33～35 ℃，1周齡內(nèi)，溫度控制在30～32 ℃，之后每周降低2 ℃，但不得低于24 ℃。試驗過程中自由采食和飲水，24 h光照，并按照《AA肉仔雞飼養(yǎng)管理指南》防疫和消毒，于每天08:00和17:00清掃衛(wèi)生，記錄雞舍溫度、濕度和死淘雞數(shù)。

1.3 測定指標與方法

1.3.1 生長性能

分別于1、21和42日齡時，以重復為單位，早上空腹稱重，前1晚斷糧不斷水，每周以重復為單位回稱飼糧，計算肉仔雞平均體重、ADG、平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)。

1.3.2 肉品質(zhì)

在42日齡時，每重復取1只接近平均體重的肉仔雞，頸部放血屠宰，分離左側(cè)胸肌和腿肌，用作肉質(zhì)和營養(yǎng)成分測定。測定指標包括pH(Sartorius PB-10 pH酸度計，德國)、系水力(滴水損失和蒸煮損失)、剪切力(東北農(nóng)業(yè)大學工程學院研制，傳感器最大負荷250 N，剪切速度5 mm/s)、肌肉色澤(CR-400型色差儀，日本)及水分(DHG-9140A 型電熱恒溫鼓風干燥箱，上海)、粗脂肪(ANKOM XT15i全自動脂肪提取儀，美國)和粗蛋白質(zhì)含量(FOSS 2300全自動定氮儀，瑞典)。

1.3.3 肌肉抗氧化

在42日齡時，每重復取1只接近平均體重的肉仔雞，頸部放血屠宰，分離右側(cè)胸肌和腿肌，用來測定肌肉中的總抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性及丙二醛(MDA)含量，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

1.3.4 腸道形態(tài)結(jié)構

分別于21和42日齡時，每重復隨機挑選1只雞，宰殺后取空腸1 cm，用10%的甲醛溶液固定后，經(jīng)過石蠟包埋，常規(guī)蘇木精-伊紅(HE)染色后，在光學顯微鏡(moticam3 000顯微攝影成像系統(tǒng)，美國)100倍下成片，采用Motic images advanced 3.2病理圖像分析系統(tǒng)測定絨毛高度和隱窩深度，并計算絨毛高度/隱窩深度(V/C)，每個視野中取3個數(shù)據(jù)的平均值。

1.4 數(shù)據(jù)處理

分別采用SPSS 25.0統(tǒng)計軟件中的單因素方差分析(one-way ANOVA)和Duncan氏法對數(shù)據(jù)進行方差分析和多重比較，用曲線估計(curve estimation)來檢驗HSD的添加水平與相應指標的線性和二次回歸效應，P<0.05為差異顯著或者回歸關系顯著，0.05≤P<0.10為差異或回歸關系趨于顯著。

2 結(jié) 果

2.1 HSD對肉仔雞生長性能的影響

由表2可知，在1～21日齡時，HSD添加組與對照組的BW、ADFI、ADG和F/G均無顯著差異(P>0.05)。在22～42日齡時，各HSD添加組的BW和ADG均顯著高于對照組(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著低于對照組(P<0.05)，且隨著HSD添加水平的提高均呈線性和二次曲線變化(P<0.05)。在1～42日齡，各HSD添加組與對照組的ADFI無顯著差異(P>0.05)，ADG顯著高于對照組(P<0.05)，F(xiàn)/G顯著低于對照組(P<0.05)，且ADG和F/G均與HSD的添加水平存在線性和二次曲線關系(P<0.05)。

2.2 HSD對肉仔雞肌肉品質(zhì)的影響

由表3可知，飼糧添加不同水平HSD對肌肉的系水力及胸肌的剪切力無顯著影響(P>0.05)。腿肌的剪切力隨HSD添加水平的提高呈線性和二次曲線變化(P<0.05)，其中HSD 50組及HSD 100組剪切力顯著低于對照組(P<0.05)。飼糧中添加HSD對屠宰45 min后肉雞肌肉中亮度(L*)、紅度(a*)和黃度(b*)值和屠宰24 h后胸肌的a*和b*值無顯著影響(P>0.05)；與對照組相比，屠宰24 h后胸肌的各HSD添加組L*值顯著降低(P<0.05)，且與HSD的添加水平存在線性和二次曲線關系(P<0.05)；腿肌的L*值對照組顯著高于HSD添加組(P<0.05)，且隨HSD添加水平的提高呈線性和二次曲線變化(P<0.05)；a*值與HSD添加水平存在線性和二次曲線關系(P<0.05)，其中HSD 50組的a*值顯著高于對照組(P<0.05)。各組間胸肌和腿肌的宰后45 min和24 h pH均無顯著差異(P>0.05)。各HSD添加組胸肌吸附水含量顯著高于對照組(P<0.05)，粗脂肪含量顯著低于對照組(P<0.05)，且均與HSD的添加水平呈線性和二次曲線變化(P<0.05)；腿肌吸附水含量與HSD的添加水平存在線性和二次曲線關系，其中HSD 150組的含量高于顯著高于對照組(P<0.05)；飼糧添加不同水平的HSD對胸肌和腿肌的初水分含量、胸肌的粗蛋白質(zhì)、腿肌的粗蛋白質(zhì)和粗脂肪含量均無顯著影響(P>0.05)。

表2 飼糧中添加HSD對肉仔雞生長性能的影響

表3 飼糧中添加HSD對肉仔雞肌肉品質(zhì)的影響

續(xù)表3項目ItemsHSD添加水平 HSD supplemental levels/(mg/kg)050100150SEMP值 P-value處理Treatment線性Linear二次Quadratic腿肌 Leg muscle24 h滴水損失 24 h drip loss/%3.283.894.143.730.390.9110.5560.77024 h蒸煮損失 24 h cook loss/%29.5826.7121.9828.351.570.3560.2970.379剪切力 Shear force/kgf3.85a2.83b2.41b3.00ab0.180.0220.0170.008亮度 L*45 min50.15 51.61 51.26 49.97 0.47 0.652 0.5350.586紅度 a*45 min3.46 4.66 3.25 3.57 0.46 0.347 0.1980.257黃度 b*45 min13.63 12.78 13.18 13.01 0.45 0.928 0.5510.833pH45 min5.515.775.645.740.050.3440.1670.349亮度 L*24 h56.62a51.62b51.71b51.84b0.72 0.020 0.0150.010紅度 a*24 h3.04b5.62a3.25b2.66b0.40 0.026 0.0170.009黃度 b*24 h13.13 10.26 11.23 9.84 0.62 0.248 0.1980.287pH24 h5.585.845.895.910.070.2570.2070.150初水分 Primary moisture/%67.9669.6567.1768.550.670.6420.5510.668吸附水 Absorbed water/%11.35b15.45ab15.93ab18.88a0.920.0290.2640.045粗蛋白質(zhì) Crude protein/%60.6762.8960.1860.610.100.7690.4980.638粗脂肪 Crude fat/%27.0425.3524.3827.280.780.5300.2650.531

2.3 HSD對肉仔雞肌肉抗氧化指標的影響

由表4可知，胸肌中T-AOC隨HSD添加水平的提高呈線性和二次曲線變化(P<0.05)，其中HSD 50組的T-AOC顯著高于對照組(P<0.05)；HSD 100組和HSD 150組的MDA含量顯著低于對照組(P<0.05)，且隨著HSD添加水平的提高有降低趨勢(P=0.098)。腿肌中HSD 50組和HSD 150組的MDA含量顯著低于對照組(P<0.05)，且隨著HSD添加水平的提高有降低趨勢(P=0.087)；胸肌和腿肌各組中GSH-Px和SOD活性無顯著差異(P>0.05)。

表4 飼糧中添加HSD對肉仔雞肌肉抗氧化指標的影響

2.4 HSD對肉仔雞腸道形態(tài)結(jié)構的影響

由表5可知，在21日齡時，各HSD添加組空腸的隱窩深度顯著降低(P<0.05)，且隨HSD添加水平的提高呈線性和二次曲線變化(P<0.05)；與對照組相比，各HSD添加組空腸的絨毛高度和V/C無顯著差異(P>0.05)。在42日齡時，空腸絨毛高度隨HSD添加水平的提高呈二次曲線變化(P<0.05)，其中HSD 150組的絨毛高度顯著高于對照組(P<0.05)，各HSD添加組的隱窩深度和V/C差異不顯著(P>0.05)。

表5 飼糧中添加HSD對肉仔雞空腸絨毛高度、隱窩深度和V/C的影響

3 討 論

3.1 HSD對肉仔雞生長性能的影響

生長性能是反映肉仔雞生長的最直接指標，提高動物的生長性能是增加經(jīng)濟效益的關鍵。關于HSD在動物飼糧中的研究，目前多集中在反芻動物及豬生產(chǎn)中，Inserra等[11]發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加柑橘皮可以提高動物的采食量、日增重及養(yǎng)分消化率；賴星[12]和劉英[13]發(fā)現(xiàn)，在仔豬飼糧中添加HSD可以提高仔豬ADG，降低F/G。而HSD對家禽的生長性能的報道結(jié)果不盡一致，Nazok等[14]發(fā)現(xiàn)在飼糧中添加12%的HSD對肉仔雞的生長性能無顯著影響，而當添加量為16%時反而降低了采食量，提高了F/G；敖·德古里那等[15]發(fā)現(xiàn)不同水平的柑橘皮渣對斷奶羔羊的ADG、干物質(zhì)攝入量(DMI)及F/G均無顯著影響。本試驗表明，飼糧中添加HSD可以顯著提高肉仔雞的ADG，降低F/G，且隨著HSD添加水平提高有上升趨勢。這可能是由于HSD能抑制試驗雞腸道病原微生物區(qū)系，有效降低細菌與宿主間對營養(yǎng)物質(zhì)的競爭，提高肉仔雞對營養(yǎng)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率，最終表現(xiàn)在提高ADG和降低F/G上[16]。由本試驗可以發(fā)現(xiàn)，當HSD添加水平為50 mg/kg時可以更有效地提高肉仔雞的生長性能。

3.2 HSD對肉仔雞肌肉品質(zhì)的影響

由于人們對肉品質(zhì)安全問題和經(jīng)濟原因，肉制品和肉制品加工行業(yè)對雞肉的品質(zhì)和需求一直在穩(wěn)步增長，而評定肉的品質(zhì)包括系水力、剪切力、pH、肉色等物理性指標和水分、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪等營養(yǎng)成分[17]。系水力和剪切力與肌肉的顏色、風味、嫩度和營養(yǎng)價值密切相關[18-19]。Simitzis等[9]和Goliomytis等[20]發(fā)現(xiàn)在肉雞飼糧中添加0.75～3.00 g/kg的HSD對胸肌的系水力和剪切力無顯著影響，與本試驗中胸肌的結(jié)果一致，但在本試驗中HSD 50組和HSD 100組腿肌的剪切力顯著低于對照組，說明添加適宜水平的HSD可以提高肉的嫩度，原因可能是黃酮類化合物提高了氧化性肌纖維類型比例或降低了肌肉中膠原含量[21-22]，但具體機制還需進一步研究。肉色是肌肉外觀評定的重要指標，常用L*、a*和b*值作為測定肉色的指標[23]。有研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中分別添加5 mg/kg的染料木黃酮和20 mg/kg的HSD對胸肌肉色無顯著影響[24]。本試驗發(fā)現(xiàn)，試驗組屠宰24 h胸肌和腿肌的L*值顯著低于對照組，HSD 50組的腿肌a*值顯著高于其他各組，說明飼糧中添加一定水平的HSD可以改善肉雞肌肉的感官品質(zhì)，與前人的研究結(jié)果不盡一致，可能與HSD來源及試驗動物不同有關。肌肉pH可以反映屠宰后肌糖原酵解速度和強度[25]。本試驗中，肌肉pH對照組與試驗組無顯著差異，這與李貞明等[26]在肉雞飼糧中添加柑橘提取物后對肌肉pH的影響結(jié)果一致。水分、粗蛋白質(zhì)和粗脂肪是肉中的營養(yǎng)物質(zhì)代表性指標[27]。郭照宙[28]發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加不同濃度的抗氧化劑對21日齡的肉仔雞肌肉中養(yǎng)分含量無顯著影響，但可以顯著提高42日齡肌肉中粗蛋白質(zhì)和粗脂肪的含量。本試驗中，各HSD添加組的胸肌吸附水含量顯著高于對照組，HSD 150組的腿肌吸附水含量顯著高于對照組，這可能是由于黃酮類化合物可以降低毛細血管通透性和脆性，維持細胞滲透壓[29]；各HSD添加組胸肌中粗脂肪含量顯著低于對照組，這可能是由于黃酮類化合物能夠調(diào)控動物脂代謝，改變了瘦素和胰島素的水平，從而影響了脂肪合成與分解的速率，減少了機體脂肪沉積[30]。

3.3 HSD對肉仔雞肌肉抗氧化能力的影響

肉品質(zhì)與肌肉的抗氧化功能密切相關，一般用SOD、GSH-Px等抗氧化酶活性及MDA含量反映氧化程度[31]。Kamboh等[32]發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加植物類黃酮可以增加T-AOC，提高SOD活性并減少MDA含量。Guo等[33]也發(fā)現(xiàn)HSD可以通過降低MDA含量，增強SOD和GSH活性來提高機體抗氧化能力進而改善腸道炎癥。在本試驗中，添加一定水平的HSD可以提高胸肌中的T-AOC，降低肌肉中的MDA含量，這說明添加HSD可以在一定程度上提高肉仔雞肌肉的抗氧化能力，可能是與黃酮類化合物的親脂性和分子化學結(jié)構有關，其中HSD的酚羥基可作為氫的供體，在脂質(zhì)氧化的第1步產(chǎn)生過氧自由基，從而阻止過氧化羥基的形成，清除氧自由基并增強肌肉的抗氧化防御系統(tǒng)[34]。

3.4 HSD對肉仔雞腸道形態(tài)結(jié)構的影響

腸道是機體最大的消化器官，而小腸的黏膜結(jié)構與功能完整性是保證機體能夠充分吸收營養(yǎng)物質(zhì)的前提，而衡量腸黏膜功能的重要指標包括絨毛高度、隱窩深度和V/C[35]。研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加HSD可以顯著降低仔豬空腸的隱窩深度，提高絨毛高度和V/C[36]，這可能是由于黃酮類化合物通過增加細胞內(nèi)堿性磷酸酶活性及腸道上皮細胞DNA的合成進而促進腸道發(fā)育[27]。本試驗發(fā)現(xiàn)，添加不同水平的HSD均可以顯著降低21日齡空腸的隱窩深度，但42日齡僅HSD 150組的絨毛高度顯著高于對照組，所以HSD在前期的作用效果相對更明顯，這可能與雛雞腸道發(fā)育尚未完善、消化能力弱有關。有研究指出，隱窩深度與細胞成熟率呈負相關，而只有成熟細胞才具有吸收養(yǎng)分的功能[37]。

4 結(jié) 論

飼糧中添加HSD可以提高肉仔雞的ADG，降低F/G，改善肌肉品質(zhì)，增強肌肉抗氧化能力，促進腸道形態(tài)發(fā)育；綜合肉仔雞的生長性能考慮，HSD添加水平為50 mg/kg時效果最好。