楊曾喬 丁雪梅 白世平 曾秋鳳 張克英 王建萍

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物營養(yǎng)研究所，動物抗病營養(yǎng)教育部重點實驗室，動物抗病營養(yǎng)與飼料農(nóng)業(yè)部重點實驗室，動物抗病營養(yǎng)四川省重點實驗室，成都611130)

肉種雞的繁殖性能受到遺傳、營養(yǎng)、飼養(yǎng)管理等因素的影響。家禽的腸道是營養(yǎng)物質(zhì)消化與吸收的關(guān)鍵部位，同時也是機體最大的免疫器官，腸道內(nèi)寄生的微生物更是在營養(yǎng)、代謝、生理和免疫過程中都起著重要的作用[1-2]。近20年的研究表明，腸道微生物能夠通過影響宿主腸道絨毛隱窩的形態(tài)、食物消化和營養(yǎng)吸收、腸道免疫系統(tǒng)的發(fā)育、短鏈脂肪酸的生成、維生素、激素的合成，產(chǎn)生消化酶以及影響腸道病原微生物的增殖[3-5]，從而影響宿主的生理功能、消化功能、營養(yǎng)吸收功能和免疫功能[6]。有研究表明，腸道微生物能夠影響宿主對營養(yǎng)的吸收與能量的利用，B?ckhed等[7]研究指出無菌小鼠降低了肥胖癥，以及增加了葡萄糖和胰島素耐受。Turnbaugh等[8]研究指出，將肥胖癥小鼠的腸道糞便移植到無菌小鼠腸道中，導(dǎo)致了無菌小鼠的肥胖。腸道微生物還能夠?qū)е绿悄虿『痛x綜合征[9]。Insenser等[10]對人腸道微生物與多囊卵巢綜合征研究發(fā)現(xiàn)，腸道微生物的多樣性以及組成能被性激素濃度、肥胖影響，并且腸道微生物如Paraprevotella與睪酮(TTE)、雌二醇(E2)呈顯著相關(guān)關(guān)系，說明微生物有可能對調(diào)節(jié)宿主類固醇激素[11]以及性激素起著重要的作用[12]，推測微生物可能會影響宿主繁殖性能。在家禽生產(chǎn)上，張亞楠[13]研究指出，高產(chǎn)、低產(chǎn)、極低產(chǎn)蛋水平蛋雞腸道微生物結(jié)構(gòu)存在差異，并且在將低產(chǎn)蛋雞腸道微生物移植至高產(chǎn)蛋雞腸道中后，高產(chǎn)蛋雞產(chǎn)蛋率顯著下降。另外卵巢作為家禽的主要繁殖器官，其功能是影響家禽繁殖性能的最直接的因素。然而目前腸道微生物與繁殖性能和卵巢功能的直接聯(lián)系還不清楚，關(guān)于腸道微生物對家禽影響的研究相較哺乳動物而言還較少，尤其是在種禽上的研究更加缺乏。

鑒于此，本研究旨在比較分析高、平均產(chǎn)蛋水平肉種雞繁殖性能、腸道組織形態(tài)、卵巢功能和腸道微生物區(qū)系的差異，為更好地認(rèn)識繁殖與腸道微生物的關(guān)系提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗設(shè)計

試驗從5 000只肉種雞中分別篩選出高和平均產(chǎn)蛋水平的肉種雞(41周齡)各90只，共180只，設(shè)為平均產(chǎn)蛋率組[AR組，產(chǎn)蛋率(79.34±0.49)%，與飼養(yǎng)手冊推薦產(chǎn)蛋率無顯著差異(P>0.05)]和高產(chǎn)蛋率組[HR組，產(chǎn)蛋率(90.03±0.34)%]，每組10個重復(fù)，每個重復(fù)9只雞。正試期為6周。試驗開始前進(jìn)行4周的預(yù)試期，其中記錄5 000只同棟舍、同日齡(37周齡)的愛拔益加(AA)父母代肉種雞的產(chǎn)蛋率、受精率、孵化率數(shù)據(jù)，為期2周；之后，根據(jù)每只肉種雞產(chǎn)蛋率，篩選出健康的180只體重[AR組，90只，(4.08±0.12) kg；HR組，90只，(4.15±0.06) kg]無顯著差異(P=0.59)的2組肉種雞，隨即在同棟舍中分配進(jìn)新籠子，進(jìn)入2周的環(huán)境適應(yīng)期。預(yù)試期和正試期所有肉種雞飼喂統(tǒng)一的玉米-豆粕型飼糧，參考NRC(1994)和AA肉種雞營養(yǎng)需求手冊配制，基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表1。試驗全程采用粉料，限制飼喂，每天飼喂160 g飼糧。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.2 飼養(yǎng)管理

試驗在四川省遂寧市射洪縣瞿河鄉(xiāng)玉太種雞場進(jìn)行。所有試驗肉種雞均采用2層階梯式籠養(yǎng)，每籠2只雞，不同組每個籠子間隔放置，均勻分布在雞舍內(nèi)。每天采用光照16 h、黑暗8 h，舍內(nèi)溫度23 ℃左右，自由飲水，每天飼喂1次(04:00)，每次飼喂定量飼糧，并觀察雞有無異常情況，每天10:00、14:00和15:00揀蛋并記錄稱重，每隔4 d人工授精1次，定期打掃雞舍衛(wèi)生。

1.3 樣品采集

在試驗第6周結(jié)束時，每個重復(fù)隨機挑選1只健康的雞，禁食12 h，稱重后，從翅靜脈抽取15 mL血液，分離血清，-20 ℃保存。將采血后的雞采用頸部脫臼法進(jìn)行屠宰，取十二指腸、空腸、回腸腸段中部2～3 cm大小的組織樣固定(4%、pH=7.2的多聚甲醛溶液)。取盲腸食糜，-80 ℃保存。取雞的全部腹部脂肪，并稱重。采集部分卵巢組織樣放入固定液(4%、pH=7.2的多聚甲醛溶液)以及取部分剝離了卵泡和結(jié)締組織的卵巢組織，-80 ℃保存。

1.4 測定指標(biāo)與方法

1.4.1 繁殖性能

生產(chǎn)性能：試驗期間每天記錄各重復(fù)總產(chǎn)蛋數(shù)、總蛋重，每周統(tǒng)計1次采食量，計算產(chǎn)蛋率、平均蛋重、料蛋比和合格蛋率。

孵化性能：在試驗第6周，連續(xù)收集5 d的全部合格種蛋進(jìn)行孵化。孵化時每7 d翻1次蛋，在孵化第19天進(jìn)行照蛋工作，挑選出未受精蛋和死胚蛋，入孵第21天出雛，記錄合格種蛋、受精蛋、死胚蛋和出雛數(shù)，計算入孵蛋孵化率=出雛數(shù)/合格種蛋數(shù)。

1.4.2 血清生化指標(biāo)

血清甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)活性以及葡萄糖(GLU)、鈣(Ca)、磷(P)的含量用試劑盒(購自南京建成生物工程研究所)測定。

1.4.3 血清激素含量

血清E2、卵泡刺激素(FSH)、促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)、TTE、抗繆勒氏管激素(AMH)、皮質(zhì)酮(CORT)和黃體酮(PROG)含量采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑盒(購自江蘇酶免實業(yè)有限公司)，使用酶標(biāo)儀(MS-352)測定。

1.4.4 腸道組織形態(tài)

腸道組織樣經(jīng)脫水、浸蠟、包埋、切片、蘇木精-伊紅染色，在光學(xué)顯微鏡40倍下進(jìn)行觀察，選擇隨機視野，拍照，分析并測量小腸絨毛高度和隱窩深度并計算絨隱比(絨隱比=絨毛高度/隱窩深度)。

1.4.5 卵巢組織形態(tài)

經(jīng)過Tunel(Roche，瑞士)試劑盒(Insitucell death detection kit-POD法)測定，在光學(xué)顯微鏡40倍下進(jìn)行觀察，選擇隨機視野，拍照，分析。陽性表達(dá)為淺黃色或棕黃色，陰性為藍(lán)色。

1.4.6 卵巢功能相關(guān)基因表達(dá)

增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)家族成員(caspase 3、caspase 8、caspase 9)、B細(xì)胞淋巴瘤2關(guān)聯(lián)X蛋白(Bax)、B細(xì)胞淋巴瘤2蛋白(Bcl2)、過氧化物酶體增殖物激活受體γ(PPARγ)、叉頭框轉(zhuǎn)錄因子L2(FOXL2)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白15(BMP15)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體2(BMPR2)、骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B(BMPR1B)、轉(zhuǎn)錄因子家族(GATA4、GATA6)、閉合蛋白(OCLN)、細(xì)胞色素P450家族(CYP)成員(CYP11A1、CYP19A1)、類固醇生成急性調(diào)節(jié)蛋白(StAR)、雄性激素受體(AR)、雌激素受體1(ESR1)、卵泡刺激素受體(FSHR)、孕激素受體(PGR)、激活素受體1(ACVR1)、AMH、家雞新型類催乳素(PRL-L)基因表達(dá)水平采用試劑盒(購自TaKaRa-Bio公司)，使用熒光定量PCR儀(ABI 7900HT)進(jìn)行測定，引物序列見表2。

表2 引物序列

1.4.7 微生物區(qū)系16S rRNA序列分析

根據(jù)Barcode序列和PCR擴增引物序列從下機數(shù)據(jù)中拆分出各樣本數(shù)據(jù)，截去Barcode和引物序列后使用FLASH(V1.2.7)對每個樣本的reads進(jìn)行拼接，得到原始Tags數(shù)據(jù)(Raw Tags)；再用Qiime(V1.9.1)的Tags質(zhì)量控制流程過濾處理得到高質(zhì)量Tags數(shù)據(jù)(Clean Tags)。將處理后得到的Tags序列通過(UCHIME Algorithm)與物種注釋數(shù)據(jù)庫進(jìn)行比對檢測去除嵌合體序列，得到有效數(shù)據(jù)(Effective Tags)。用Uparse軟件(v7.0.1001)對Effective Tags進(jìn)行聚類，以97%的一致性(identity)將序列聚類成為分類操作單元(OTU)，并選取代表性的OTU的序列。對OTU代表序列進(jìn)行物種注釋，用Mothur方法與SILVA的SSU rRNA數(shù)據(jù)庫進(jìn)行物種注釋分析(設(shè)定閾值為0.8～1.0)，獲得分類學(xué)信息并分別在各個分類水平：界、門、綱、目、科、屬、種統(tǒng)計各樣本的群落組成。使用MUSCLE(Version 3.8.31)軟件進(jìn)行快速多序列比對，得到所有OTU代表序列的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系。最后對以樣本中數(shù)據(jù)量最少的為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行均一化處理，alpha多樣性分析是基于均一化處理后的數(shù)據(jù)。使用R軟件(Version 2.15.3)對alpha多樣性進(jìn)行分析，使用R語言軟件的psych包進(jìn)行環(huán)境因子關(guān)聯(lián)的Spearman分析。

1.5 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 25.0對繁殖性能及相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行獨立樣本t檢驗，結(jié)果用平均值和均值標(biāo)準(zhǔn)誤(SEM)表示，以P<0.05為差異顯著性水平，P<0.01為差異極顯著水平。

2 結(jié) 果

2.1 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞繁殖性能差異

由表3可知，與AR組相比，HR組肉種雞產(chǎn)蛋率和入孵蛋孵化率顯著提高(P<0.05)，料蛋比顯著降低(P<0.05)，而平均蛋重、合格蛋率和受精率無顯著差異(P>0.05)。這表明HR組肉種雞飼料轉(zhuǎn)化效率顯著高于AR組。

表3 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞繁殖性能差異

2.2 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞血清生化指標(biāo)差異

由圖1可知，HR組肉種雞血清ALT活性顯著低于AR組(P<0.05)，而2種不同產(chǎn)蛋水平肉種雞之間血清脂代謝相關(guān)指標(biāo)(血清TG、TC、HDL-C、LDL-C和GLU含量)、血清代謝相關(guān)酶活性(血清AST、LDH和ALP活性)以及血清Ca、P含量無顯著差異(P>0.05)。

2.3 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞血清激素含量差異

由表4可知，HR組肉種雞的血清激素含量與AR組無顯著差異(P>0.05)。

2.4 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞腸道組織形態(tài)差異

由圖2可知，HR組肉種雞十二指腸絨毛高度顯著高于AR組(P<0.05)，而空腸絨毛高度顯著低于AR組(P<0.05)，回腸隱窩深度顯著高于AR組(P<0.05)，而絨隱比2組之間無顯著差異(P>0.05)。

數(shù)據(jù)柱標(biāo)記*表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)記**表示差異極顯著(P<0.01)。下圖同。

表4 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞血清激素含量差異

2.5 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞腹脂率差異

由圖3可知，HR組肉仔雞腹脂率(腹脂重/活重)顯著低于AR組(P<0.05)。

2.6 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞卵巢細(xì)胞凋亡率差異

由圖4可知，HR組肉種雞卵巢細(xì)胞凋亡率極顯著低于AR組(P<0.01)。

2.7 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞卵巢功能相關(guān)基因表達(dá)差異

由圖5可知，與AR組相比，HR組肉種雞卵巢凋亡相關(guān)基因caspase 9、繁殖調(diào)控相關(guān)基因BMPR1B、GATA4和激素受體相關(guān)基因PRL-L表達(dá)水平顯著或極顯著上調(diào)(P<0.05或P<0.01)，卵巢CYP19A1表達(dá)水平有上調(diào)的趨勢(P=0.10)。

2.8 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸微生物區(qū)系16S rRNA序列分析

以97%的序列相似性測序高質(zhì)量的16S rRNA序列得出，肉種雞盲腸中有1 406 644個序列，平均每個樣品有87 915個序列(77 256～95 053)。由圖6可知，HR組盲腸微生物的豐富度(Chao1指數(shù)和ACE指數(shù))、多樣性(Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù))與AR組相比差異不顯著(P>0.05)，但OTU數(shù)量大于AR組。

2.9 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸微生物相對豐度差異

由表5可知，肉種雞盲腸微生物優(yōu)勢菌門為擬桿菌門(Bacteroidetes)和厚壁菌門(Firmicutes)，優(yōu)勢菌屬為擬桿菌屬(Bacteroides)。HR組肉種雞盲腸微生物厚壁菌門和乳桿菌屬(Lactobacillus)相對豐度廈顯著高于AR組(P<0.05)，擬桿菌門和螺旋體門(Spirochaetes)相對豐度顯著低于AR組(P<0.05)。

①和②分別代表AR組和HR組十二指腸，③和④分別代表AR組和HR組空腸，⑤和⑥分別代表AR組和HR組回腸。

圖3 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞腹脂率差異

2.10 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸微生物關(guān)聯(lián)性分析

由圖7可知，不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸厚壁菌門相對豐度與卵巢BMPR1B、GATA4表達(dá)水平呈顯著或極顯著正相關(guān)(P<0.05或P<0.01)，盲腸乳桿菌屬相對豐度與卵巢caspase 9、BMPR1B、GATA4、PRL-L表達(dá)水平呈顯著或極顯著正相關(guān)(P<0.05或P<0.01)，盲腸螺桿菌屬(Helicobacter)相對豐度與卵巢GATA4表達(dá)水平呈極顯著正相關(guān)(P<0.01)；盲腸擬桿菌門相對豐度與卵巢BMPR1B、GATA4表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)，盲腸梭桿菌屬(Fusobacterium)相對豐度與卵巢PRL-L表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)(P<0.05)。

3 討 論

3.1 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞繁殖性能、腸道組織形態(tài)和微生物區(qū)系差異

本研究發(fā)現(xiàn)，HR組肉種雞飼料轉(zhuǎn)化效率和入孵蛋孵化率高于AR組，而二者采食量保持一致，表明HR組擁有更好的飼料利用效率，可能是由于HR組擁有更好的腸道組織形態(tài)和吸收功能。繼而在本試驗中發(fā)現(xiàn)，HR組肉種雞十二指腸絨毛高度顯著高于AR組，這與陳娜娜等[14]研究指出的高產(chǎn)蛋雞的回腸絨毛高度高于低產(chǎn)蛋雞的研究結(jié)果一致。但是本試驗還發(fā)現(xiàn)在血清生化指標(biāo)中，HR組肉種雞血清ALT活性顯著低于AR組，ALT主要參與體內(nèi)轉(zhuǎn)氨基作用，正常情況下，ALT主要存在于肝細(xì)胞中，而血清中活性很低，而當(dāng)肝組織細(xì)胞受損或通透性增大能引起其濃度的升高，可能說明HR組肝臟健康優(yōu)于AR組，并且熊立根[15]研究指出，血清ALT活性與蛋雞產(chǎn)蛋率呈負(fù)相關(guān)，本試驗和前人研究結(jié)果一致。

紅色圓圈表示凋亡的卵巢細(xì)胞(褐色)。

腸道內(nèi)微生物是環(huán)境依賴型[16]，因此腸道內(nèi)微生物會與宿主產(chǎn)生營養(yǎng)競爭。宿主盲腸微生物在降解宿主難以消化的碳水化合物中起到了重要的代謝作用[17]，主要產(chǎn)生的丙酸被肝臟吸收，參與糖異生作用；丁酸參與糖異生、酮體生成及TG合成等，間接影響糖類和脂類代謝[18]。本研究發(fā)現(xiàn)，HR組肉種雞盲腸微生物多樣性和豐富度與AR組相比無顯著差異，但是HR組盲腸厚壁菌門和乳桿菌屬相對豐度顯著高于AR組，盲腸擬桿菌門和螺旋體門相對豐度顯著低于AR組。有研究指出腸道微生物和腸道神經(jīng)內(nèi)分泌功能有關(guān)[19]，并且腸道微生物紊亂能夠激發(fā)免疫系統(tǒng)進(jìn)而使血清胰島素和雄激素含量上升，紊亂卵巢功能[20]。Polansky等[21]研究指出，厚壁菌門移植到7日齡雞盲腸中，滿足了快速增長的幼雞腸細(xì)胞對丁酸的需要，并且Stanley等[22]和Turnbaugh等[23]研究指出，在小鼠和人體中，厚壁菌門與擬桿菌門比例的增加與肥胖相關(guān)，這是由于厚壁菌門有強大的能量利用能力；不僅如此，Jumpertz等[24]研究指出，厚壁菌門能夠增加宿主的營養(yǎng)吸收，但擬桿菌門會降低營養(yǎng)吸收，并且厚壁菌門中的乳酸桿菌和乳酸鏈球菌等具有調(diào)節(jié)腸道菌群的功能，可以提高動物生產(chǎn)性能和繁殖表現(xiàn)。同時，家禽腸道螺旋體病是我們熟知的在商品蛋雞和肉雞中出現(xiàn)的疾病，Stephens等[25]和Dwars等[26]研究指出腸道螺旋體菌能顯著導(dǎo)致產(chǎn)蛋率下降，增加飼料消耗量。因此，本試驗結(jié)果表明產(chǎn)蛋率更高的肉種雞擁有更好的腸道形態(tài)以及更均衡的微生物區(qū)系，進(jìn)而提高了肉種雞對于飼料的利用效率。

3.2 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞卵巢功能差異

本研究發(fā)現(xiàn)，在2組肉種雞采食量保持一致的情況下，HR組肉種雞腹脂率顯著低于AR組。前人研究表明，卵巢功能會隨著腹部脂肪的增加而改變[27-31]，體脂和繁殖力呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)[32]，本試驗和前人研究一致。本研究還發(fā)現(xiàn)，與AR組相比，HR組肉種雞卵巢細(xì)胞凋亡率極顯著降低，卵巢BMPR1B、GATA4、PRL-L和caspase 9的表達(dá)水平顯著提高。BMPR1B主要作用是和骨形成蛋白結(jié)合進(jìn)行信號的傳遞[33]，能夠促進(jìn)卵泡的生長發(fā)育和正常排卵。PRL-L是催乳素受體的一種功能性配體[34]，PRL-L能夠與垂體表達(dá)的催乳素基因在發(fā)育階段可以以互補的方式影響卵巢發(fā)育[35]。GATA家族是一類主要位于卵泡顆粒細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，主要參與調(diào)節(jié)卵泡的發(fā)育基因的表達(dá)和類固醇激素的合成，其低表達(dá)與卵泡閉鎖有關(guān)，促性腺激素能夠上調(diào)GATA4的表達(dá)[36]。所以BMPR1B、GATA4和PRL-L能夠促進(jìn)卵巢的發(fā)育，說明HR組可能是通過上調(diào)與卵泡發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)提高繁殖性能的。CYP19A1是芳香化酶的編碼基因，芳香化酶能氧化脫去C19類固醇(雄烯二酮和T)的19甲基，將C19類固醇轉(zhuǎn)變?yōu)镃18雌激素(雌酮和E2)，在體內(nèi)雌激素合成過程中起重要作用[37]。研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)SH能刺激GATA4與芳香酶啟動子結(jié)合[38]，本試驗研究表明HR組顯著上調(diào)的GATA4能夠引起CYP19A1有趨勢的上調(diào)，但是血清E2等激素含量卻無顯著性差異。李富貴等[39]研究指出，產(chǎn)蛋高峰期蛋雞其生殖激素的含量會隨著不同的時間點出現(xiàn)差異顯著，如E2高峰期在06:00和18:00，F(xiàn)SH表達(dá)水平晚上高于白天，呈現(xiàn)周期性變化，本試驗可能是由于采血時間為10:00，導(dǎo)致了HR組血清激素含量與AR組無顯著性差異。Caspase 9參與細(xì)胞凋亡的胞內(nèi)途徑，細(xì)胞色素C從線粒體釋放至胞漿，結(jié)合凋亡蛋白酶激活因子1再與前體caspase 9結(jié)合形成凋亡復(fù)合體，進(jìn)而誘導(dǎo)caspase 9激活caspase 3、caspase 2來導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[40]，其表達(dá)的升高可能與細(xì)胞凋亡增加相關(guān)。然而，本試驗中，HR組肉種雞卵巢caspase 9表達(dá)水平較AR組顯著升高，但卵巢細(xì)胞凋亡率卻顯著低于AR組。我們推測，其可能是由于參與細(xì)胞凋亡胞內(nèi)途徑的效應(yīng)分子caspase 3和caspase 8沒有變化，故僅僅caspase 9表達(dá)水平的升高并沒有引起卵巢細(xì)胞凋亡率的升高，有關(guān)機制還需進(jìn)一步的研究揭示。

PCNA：增殖細(xì)胞核抗原 proliferating cell nuclear antigen；caspase 3：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3；caspase 8：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8；caspase 9：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9；Bax：B細(xì)胞淋巴瘤2關(guān)聯(lián)X蛋白 B-cell lymphoma 2 associated X protein；Bcl2：B細(xì)胞淋巴瘤2蛋白 B-cell lymphoma 2 protein；PPARγ：過氧化物酶體增殖物激活受體γ peroxisome proliferator-activated receptor γ；FOXL2：叉頭框轉(zhuǎn)錄因子L2 Forkhead box transcription factor L2；BMP15：骨形態(tài)發(fā)生蛋白15 bone morphogenetic protein 15；BMP15：骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體2 bone morphogenetic protein receptor 2；BMPR1B：骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B bone morphogenetic protein receptor 1B；OCLN：閉合蛋白 occludin；CYP11A1：細(xì)胞色素P450家族11亞家族A成員1 cytochrome P450 family 11 subfamily a member 1；StAR：類固醇生成急性調(diào)節(jié)蛋白 steroidogenic acute regulatory protein；CYP19A1：細(xì)胞色素P450家族19亞家族A成員1 cytochrome P450 family 19 subfamily a member 1；AR：雄性激素受體 androgen receptor；FSHR：卵泡刺激素受體 follicle stimulating hormone receptor；ESR1：雌激素受體1 estrogen receptor 1；PGR：孕激素受體 progesterone receptor；ACVR1：激活素受體1 activin receptor 1；AMH：抗繆勒氏管激素 anti-mullerian hormone；PRL-L：家雞新型類催乳素 a novel prolactin-like protein in chickens。

圖6 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸微生物alpha多樣性分析

表5 不同產(chǎn)蛋水平肉種雞盲腸微生物相對豐度差異(前10位)

Caspase 9：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9；BMPR1B：骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體1B bone morphogenetic protein receptor 1B；PRL-L：家雞新型類催乳素 a novel prolactin-like protein in chickens；Bacteroidetes：擬桿菌門；Firmicutes：厚壁菌門；Fusobacteria：梭桿菌門；Proteobacteria：變形菌門；Verrucomicrobia：疣微菌門；Spirochaetes：螺旋體門；Euryarchaeota：廣古菌門；Tenericutes：軟壁菌門；Cyanobacteria：藍(lán)藻門；Deferribacteres：脫鐵桿菌門；Actinobacteria：放線菌門；Synergistetes：互養(yǎng)菌門；Lentisphaerae：黏膠球形菌門；Gemmatimonadetes：芽單胞菌門；Acidobacteria：酸桿菌門；Elusimicrobia：迷蹤菌門；Planctomycetes：浮霉菌門；Bacteroides：擬桿菌屬；Lactobacillus：乳桿菌屬；Rikenellaceae RC9 gut group:理研菌科RC9腸道群;Fusobacterium:梭桿菌屬;Ruminococcaceae UCG-014:瘤胃菌科UCG-014;Faecalibacterium:糞桿菌屬；Ruminococcaceae UCG-005:瘤胃菌科UCG-005；Megamonas：巨單胞菌屬；[Ruminococcus] torques group：瘤胃球菌屬扭鏈群；Desulfovibrio：脫硫弧菌屬；Methanobrevibacter：甲烷短桿菌屬；unidentified Ruminococcaceae：未鑒定的瘤胃菌科；Anaerotruncus：厭氧棍狀菌屬；Sutterella：薩特氏菌屬；Butyricicoccus：丁酸球菌屬；Phyllobacterium：葉桿菌屬；Alloprevotella：擬普雷沃菌屬；Coprococcus 1：糞球菌屬1；Ruminiclostridium 9：瘤胃梭菌屬9；Ruminiclostridium 5：瘤胃梭菌屬5；Christensenellaceae R7 group：克里斯滕森菌科R7群；Ruminococcaceae NK4A214 group：瘤胃菌科NK4A214群；Helicobacter：螺桿菌屬；unidentified chloroplast：未鑒定葉綠體；Oscillibacter:顫桿菌屬;Ruminiclostridium:瘤胃梭菌屬;[Eubacterium] coprostanoligenes group：真桿菌屬coprostanoligenes群。

在盲腸微生物關(guān)聯(lián)性分析中，本研究發(fā)現(xiàn)HR組盲腸厚壁菌門相對豐度與卵巢BMPR1B、GATA4表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，盲腸擬桿菌門相對豐度與BMPR1B、GATA4表達(dá)水平呈顯著負(fù)相關(guān)；盲腸乳桿菌屬相對豐度與卵巢caspase 9、BMPR1B、GATA4、PRL-L表達(dá)水平呈顯著正相關(guān)，盲腸梭桿菌屬相對豐度與卵巢PRL-L表達(dá)水平成顯著負(fù)相關(guān)。有研究指出腸道微生物和腸道神經(jīng)內(nèi)分泌功能有關(guān)[19]，并且腸道微生物紊亂能夠激發(fā)免疫系統(tǒng)進(jìn)而使血清胰島素和雄激素上升，紊亂卵巢功能[20]。

4 結(jié) 論

本試驗結(jié)果表明，不同產(chǎn)蛋水平肉種雞腸道組織形態(tài)、盲腸微生物區(qū)系和卵巢功能存在顯著差異，盲腸厚壁菌門和乳桿菌屬的相對豐度與高繁殖性能密切相關(guān)。