黃天卓，丁薇娜，張琳杰，鄭浩然，何鑫磊

(美倫醫(yī)藥集團(tuán)有限公司，天津 北辰 300403)

腎茶(Clerodendranthus spicatus (Thunb.) C. Y. Wu)又稱貓須草、貓須公、腎草，是唇形科，腎茶屬多年生草本植物。腎茶具有抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗氧化、利尿的作用，其還對肝臟腎臟有一定的保護(hù)作用[1]。滴丸生物利用度高，工藝條件易于控制，質(zhì)量穩(wěn)定，劑量準(zhǔn)確，受熱時間短，易氧化及具揮發(fā)性度的藥物溶于基質(zhì)后，可增加其穩(wěn)定性。目前還沒有腎茶提取物的制劑，因此此研究可以填補(bǔ)市場上這一塊的空缺，為此進(jìn)行了腎茶提取工藝的優(yōu)化和滴丸制劑工藝的優(yōu)化。

1 實(shí)驗(yàn)儀器與物料

1.1 儀器

恒溫水浴鍋HH-6(金壇區(qū)西城新瑞儀器廠)、多功能滴丸實(shí)驗(yàn)機(jī)(煙臺康達(dá)爾藥業(yè)有限公司)、島津液相CTO-20A(SHIMADZU CORPORATION)。

1.2 物料

腎茶20180612(河北百合中藥飲片有限公司)、PEG4000 PO20190401(山東瑞生藥用輔料有限公司)、PEG6000 PL20190403(山東瑞生藥用輔料有限公司)、硬脂酸鎂181026(陜西正一藥用輔料有限公司)、硬脂酸181101(陜西正一藥用輔料有限公司)、二甲基硅油20190905(江西益普生藥業(yè)有限公司)、大豆油20170326(山東瑞生藥用輔料有限公司)、液體石蠟171101(吉化江城油脂化工)。

2 方法與結(jié)果

2.1 腎茶提取工藝

2.1.1 腎茶的提取方案

腎茶滴丸是根據(jù)腎茶袋泡茶[2]改良而來。原工藝只用溫水浸泡有效物質(zhì)浸出量太低，由于檢測指標(biāo)為水溶性的迷迭香酸和醇溶性的熊果酸，故此研究對提取溶劑、料液比、提取溫度、提取時間等單因素考察的基礎(chǔ)上進(jìn)行了L9(34)正交試驗(yàn)，優(yōu)選腎茶滴丸的最佳提取工藝，并對結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證，最后再驗(yàn)證最佳提取次數(shù)。

2.2 腎茶提取工藝單因素試驗(yàn)

2.2.1 提取溶劑

稱取適量腎茶藥材于具塞錐形瓶中，分別加入15倍量水、30%乙醇、50%乙醇、65%乙醇、80%乙醇、95%乙醇，90℃下提取2h，提取兩次，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行高效液相色譜儀檢測，按內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算迷迭香酸百分含量；同法按內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸檢測方法測定熊果酸含量，計算其中熊果酸百分含量，結(jié)果見表1。

表1 溶劑對腎茶提取工藝的影響

隨著乙醇含量的增加，迷迭香酸和熊果酸含量升高，乙醇含量65%以上時，隨著乙醇含量增加，迷迭香酸含量下降，熊果酸含量增加。由于迷迭香酸醇溶性不高，熊果酸不溶于水，65%乙醇提取時迷迭香酸和熊果酸總量最高，因此選擇50%、65%、80%乙醇為正交試驗(yàn)溶劑。

2.2.2 料液比

稱取適量腎茶藥材于具塞錐形瓶中，分別按料液比為1∶8、1∶10、1∶12、1∶15、1∶20、1∶25加入65%乙醇溶液，85℃下提取2h，提取兩次，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行高效液相色譜儀檢測，進(jìn)樣量20μL，按內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算迷迭香酸百分含量；同法按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸檢測方法測定熊果酸含量，計算其中熊果酸百分含量，結(jié)果見表2。

表2 料液比對腎茶提取工藝的影響

隨著料液比的增加，迷迭香酸及熊果酸含量逐步增加，當(dāng)料液比達(dá)到1∶20時，迷迭香酸含量達(dá)到最大值，熊果酸含量也較高，而隨著料液比的增加，迷迭香酸及熊果酸的含量增長緩慢。綜合考慮，選擇1∶15、1∶20、1∶25乙醇為正交試驗(yàn)料液比。

2.2.3 提取溫度

表3 提取溫度對腎茶滴丸提取工藝的影響

稱取適量腎茶藥材于具塞錐形瓶中，加入15倍量65%乙醇溶液，分別在20℃、40℃、55℃、70℃、85℃、100℃下提取，提取兩次，每次2h，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行高效液相色譜儀檢測，進(jìn)樣量20μL，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算迷迭香酸百分含量；同法按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸檢測方法測定熊果酸含量，計算其中熊果酸百分含量，結(jié)果見表3。

隨著提取溫度升高，迷迭香酸含量和熊果酸含量隨之升高，迷迭香酸和熊果酸含量不斷增加，在溫度達(dá)到100℃后有下降趨勢，推測可能是沸騰劇烈，導(dǎo)致部分藥材貼在壁上無法被提取液浸潤。綜合考慮，腎茶的提取溫度定為微沸溫度85℃，因此不列入正交試驗(yàn)。

2.2.4 提取時間

稱取適量腎茶藥材于具塞錐形瓶中，加入15倍量65%乙醇溶液，85℃下分別提取0.5,1,1.5,2,2.5,3h，提取兩次，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，進(jìn)行高效液相色譜儀檢測，進(jìn)樣量20μL，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算迷迭香酸百分含量；同法按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸檢測方法測定熊果酸含量，計算其中熊果酸百分含量，結(jié)果見表4。

表4 提取時間對腎茶滴丸提取工藝的影響

隨著提取時間的增加，迷迭香酸及熊果酸含量逐步增加，提取時間達(dá)到1.5h后，含量增長減緩，而且提取時間過長也會增加成本，因此選擇1h、1.5h、2h為正交試驗(yàn)提取時間。

2.3 腎茶提取工藝正交試驗(yàn)

2.3.1 正交試驗(yàn)設(shè)計

為了充分提取腎茶藥材的主要有效成分，同時節(jié)約原材料、縮短生產(chǎn)周期、降低成本，對提取工藝中的乙醇濃度、料液比、提取時間用正交實(shí)驗(yàn)法進(jìn)行優(yōu)選。其因素水平見表5。

表5 料液比對腎茶滴丸提取工藝的影響

2.3.2 正交試驗(yàn)

稱取適量腎茶藥材于具塞錐形瓶中，按下表進(jìn)行提取，提取兩次，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，取續(xù)濾液20μL注入高效液相色譜儀，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算迷迭香酸百分含量；同時取續(xù)濾液0.1mL于具塞試管，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸檢測方法測定熊果酸含量，計算其中熊果酸百分含量；綜合考慮，總含量/%=迷迭香酸百分含量+熊果酸百分含量，結(jié)果見表6。

表6 提取正交試驗(yàn)結(jié)果

表6(續(xù))

對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果如下：

表7 提取正交試驗(yàn)方差分析

從正交試驗(yàn)結(jié)果可以看出，3個因素對腎茶滴丸提取工藝的影響程度為：乙醇含量>提取時間>料液比，乙醇含量對正交試驗(yàn)結(jié)果的影響極顯著，提取時間和料液比的影響不顯著，并且影響程度相近。理論上最佳組合為A2B3C3，即理論最佳工藝條件為：乙醇濃度65%，料液比為1∶25，提取時間2h，但由于提取時間和料液比對總含量的影響并不顯著，綜合成本考慮最佳工藝條件定為：乙醇濃度65%，料液比為1∶15，提取時間2h。

2.4 腎茶提取工藝驗(yàn)證及提取次數(shù)的確定

2.4.1 提取工藝驗(yàn)證

稱取適量腎茶藥材于平底燒瓶中，按工藝條件乙醇濃度65%，料液比為1∶10，提取時間2h進(jìn)行提取，90℃下提取150min，提取兩次，過濾，合并兩次濾液并定容，過0.45μm微孔濾膜，高效液相色譜儀設(shè)置進(jìn)樣量20μL，按質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下熊果酸、迷迭香酸檢測方法測定迷迭香酸含量，計算熊果酸、迷迭香酸含量；綜合考慮，總含量/%=迷迭香酸含量+熊果酸含量，結(jié)果見表8。

表8 提取正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果可知，按最優(yōu)工藝進(jìn)行提取后，迷迭香酸含量平均值為0.3406%，熊果酸含量平均值為0.1697%，總含量0.5103%，均高于正交試驗(yàn)中其它各組數(shù)據(jù)，達(dá)到了優(yōu)化的目的，該工藝穩(wěn)定可行。

2.4.2 提取次數(shù)確定

稱取適量腎茶藥材于5個平底燒瓶中，按最優(yōu)工藝A2B1C2進(jìn)行提取，分別提取1次、2次，3次，4次，5次，收集提取液，過濾，量取體積，過0.45μm微孔濾膜，高效液相色譜儀設(shè)置進(jìn)樣量20μL，按內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)草案項(xiàng)下迷迭香酸與熊果酸檢測方法測定迷迭香酸與熊果酸含量，結(jié)果見表9。

表9 提取次數(shù)的確定

由結(jié)果可以看出，經(jīng)過兩次提取后，第2、3、4、5次提取液中迷迭香酸及熊果酸含量相近，因此確定腎茶滴丸提取次數(shù)為2次。

2.3 腎茶滴丸制備工藝

采用熔融法制備腎茶滴丸，使腎茶浸膏粉達(dá)到高度分散狀態(tài)，提高腎茶滴丸中有效成分的溶出。聚乙二醇-4000和聚乙二醇-6000為水溶性載體材料，當(dāng)與溶出介質(zhì)接觸時，藥物隨著水溶性載體的溶解而迅速溶出，能提高腎茶滴丸的溶解度和溶出速率。

2.3.1 腎茶滴丸制備工藝方案

以溶散時限、硬度、圓整度等為指標(biāo)并綜合考慮，首先對基質(zhì)的選擇、冷凝劑的選擇、藥物與基質(zhì)配比的選擇、助懸劑的選擇、藥液溫度的選擇、滴距的選擇等進(jìn)行單因素考察，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)，優(yōu)選腎茶滴丸的最佳制備工藝，并對結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。其中：

(1)溶散時限：按照《中國藥典》2015版第四部[3]通則0921項(xiàng)下崩解時限的方法進(jìn)行，以溶散時限為指標(biāo)，計分值見表10。

表10 滴丸溶散時限指標(biāo)

(2) 硬度：記錄從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中隨機(jī)抽取的5粒滴丸的硬度平均值，計分值見表11。

表11 滴丸硬度指標(biāo)

(3) 圓整度記錄從實(shí)驗(yàn)結(jié)果中隨機(jī)抽取的5粒滴丸的圓整度平均值，計分值見表12。

表12 滴丸圓整度指標(biāo)

綜合考慮各因素，以總分為指標(biāo)考察各因素對腎茶滴丸制備工藝的影響。

總分=溶散時限得分+硬度得分+滴丸圓整度得分。

2.4 滴丸制備工藝單因素實(shí)驗(yàn)

2.4.1 滴丸中基質(zhì)的配比

采用PEG4000 和PEG6000采用不同比例進(jìn)行溶散滴制試驗(yàn)，結(jié)果見表13。

表13 基質(zhì)的配比滴丸制備工藝的影響

根據(jù)制劑中藥物的性質(zhì)，選擇目前最為常用的水溶性基質(zhì)聚乙二醇類(PEG4000和PEG6000)，PEG無毒無味，內(nèi)聚力和分散力都有優(yōu)勢，是比較理想的滴丸基質(zhì)，試驗(yàn)結(jié)果表明，PEG4000與PEG6000比例為7∶13時，腎茶浸膏粉能與基質(zhì)較好的結(jié)合，制得滴丸硬度適中，圓整度較好，溶散時限短，故選擇1∶4、7∶13、4∶1為正交試驗(yàn)基質(zhì)比。

2.4.2 滴丸中冷凝劑的選擇

根據(jù)《中國藥典》對冷凝劑的要求，實(shí)驗(yàn)選擇液體石蠟、二甲基硅油和大豆油三種溶劑作為冷凝劑。以滴丸的滴制情況，溶散時限、硬度及圓整度為考察指標(biāo)，確定冷凝劑對滴丸制備工藝的影響，結(jié)果見表14。

表14 冷凝劑對滴丸制備工藝的影響

冷凝劑是制備滴丸的重要輔助劑，其密度和粘度直接影響藥液的沉降速度和滴丸的圓整度。選擇大豆油為冷凝劑時，滴丸沉降速度稍慢，下落后粘連，且滴丸呈扁圓形，圓整度較差；選擇二甲基硅油為冷凝劑時，滴丸沉降速度稍慢，偶有粘連，可能是因?yàn)槎谆栌捅砻鎻埩π?，與藥液比重差大，黏滯大；選擇液體石蠟為冷凝劑時，滴丸沉降速度適中，下落后不粘連，且滴丸圓整度好，硬度適中，溶散時限短，故選擇液體石蠟為滴丸的冷凝劑。

2.4.3 滴丸中藥物與基質(zhì)配比的選擇

考察藥物與基質(zhì)比例對滴丸制備工藝的影響，結(jié)果見表15。

藥物浸膏粉(藥物)與基質(zhì)的比例值直接影響滴丸的質(zhì)量，其比例一般情況下為1∶1～1∶10，但如果載藥量過小，則不符合實(shí)際要求。結(jié)果表明，當(dāng)藥物含量為50%時，化料容易出渣，藥液黏度大，不容易成形，滴制時容易堵滴頭；因此選擇20%、30%、40%作為正交試驗(yàn)的載藥量。

表15 藥物與基質(zhì)的配比對滴丸制備工藝的影響

2.4.4 滴丸中助懸劑的選擇

根據(jù)滴丸生產(chǎn)工藝要求，對助懸劑進(jìn)行了考察，結(jié)果見表16。

表16 助懸劑對滴丸制備工藝的影響

從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，硬脂酸和硬脂酸鎂對滴丸硬度、圓整度鴻潤溶散時限的影響較小。但對滴丸外觀影響較大，除添加3%硬脂酸鎂外，其余均可造成滴丸化料時出渣。故選擇3%硬脂酸鎂作為滴丸制劑所需助懸劑。

2.4.5 滴丸中藥液溫度的選擇

藥液溫度考察結(jié)果見表17。

表17 藥液溫度對滴丸制備工藝的影響

藥液溫度低則粘滯度大，滴丸易拖尾，丸型差，滴制困難，滴制速度慢，丸重增加，丸重差異大；溫度過高則藥液變稀，容易出渣，滴制口滴出的藥液呈線狀，常拖尾呈啞鈴狀或串珠狀而非滴丸，且溫度太高可能對主藥成分造成影響，故選擇藥液溫度80℃、90℃、100℃為正交試驗(yàn)溫度。

2.4.6 滴丸中滴距的選擇

根據(jù)滴丸外形、規(guī)格的要求，在不同條件下對滴制情況進(jìn)行了考察，其結(jié)果見表18。

滴制過程中，滴距過大，液滴會因重力作用被跌散而產(chǎn)生細(xì)粒，影響滴丸沉降速度，圓整度及丸重。同時，沉降速度增加，使得滴丸還未完全冷卻成就已沉降到底，可能造成硬度不夠及滴丸粘連現(xiàn)象。但滴距過小時，由于冷凝劑自身的表面張力作用，使得液滴漂浮在冷凝劑表面，不易沉降從而造成粘連。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)?shù)尉酁? cm時，滴丸的成形性較好，綜合評分較高。

表18 滴距對滴丸制備工藝的影響

2.5 滴丸制備工藝正交試驗(yàn)

2.5.1 制備工藝正交試驗(yàn)設(shè)計

通過單因素試驗(yàn)可知，基質(zhì)配比、載藥量、藥液溫度等因素對腎茶滴丸制備工藝影響較大，因此采用正交試驗(yàn)法對其進(jìn)行優(yōu)選，因素水平表見表19。

表19 滴丸制劑因素水平表

2.5.2 正交試驗(yàn)

取適量腎茶浸膏粉，按L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，并滴入液體石蠟中，測定滴丸溶散時限、硬度、圓整度，結(jié)果見表20。

表20 滴丸制劑正交試驗(yàn)結(jié)果

對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表21。

表21 制劑方差分析表

由正交試驗(yàn)結(jié)果可知，影響滴丸成形的工藝的主要因素是藥液溫度，其次是基質(zhì)(PEG4000：PEG6000)，影響最小的是藥物載藥量，載藥量低藥效減弱，但載藥量過高化料時容易出現(xiàn)藥渣聚集堵住滴頭。方差分析結(jié)果表明，基質(zhì)(PEG4000：PEG6000)及藥液溫度對滴丸滴制工藝有顯著影響。綜合考慮，最中確定滴丸最佳制備工藝為A2B2C3。即基質(zhì)(PEG4000：PEG6000)為7∶13，載藥量為30%，藥液溫度為100℃。但考慮到化料出渣以及有效物質(zhì)熱穩(wěn)定性的問題，在條件允許的情況下，最終化料溫度定為90℃。

2.5.3 滴丸制備工藝正交結(jié)果驗(yàn)證試驗(yàn)

驗(yàn)證滴丸制備工藝正交試驗(yàn)結(jié)果，結(jié)果見表22。

表22 正交試驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證

按照最佳制備工藝值制得的滴丸圓整度好，硬度高，丸重，溶散時限均符合要求。色澤均勻，成丸率在90%左右。結(jié)果表明，該工藝條件作為滴丸的最佳制備工藝，穩(wěn)定可行。

3 討論與展望

腎茶袋泡茶用的是溫水浸泡，浸出物相比直接提取是相當(dāng)少的，因此袋泡茶這一劑型大大限制了腎茶的藥效。腎茶用稀醇提取可以充分獲得其有效物質(zhì)，既有極性大的物質(zhì)又有極性小的物質(zhì)，但梯度分析方法不能很好地同時檢測迷迭香酸和熊果酸，因此可以對腎茶提取物和滴丸制劑中的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行同步檢測的方法還有待研究，以期望能對腎茶提取物和腎茶滴丸制劑的質(zhì)量進(jìn)行更好的控制。

腎茶針對的疾病一般都是慢性病，而滴丸這種制劑生物利用度高、質(zhì)量穩(wěn)定還可以添加控釋劑和緩釋劑，能充分發(fā)揮腎茶的功效。由于滴丸相對于其他劑型比如片劑等載藥量較低，因此劑量大的處方不適合制成滴丸制劑。目前大部分大生產(chǎn)用的滴丸機(jī)都是一體化的，簡便易控，易操作，操作人員的培訓(xùn)效率高、成本低，對于藥企來說滴丸這一劑型是必備的劑型。

影響中藥滴丸制劑成型的因素非常多，內(nèi)在因素就是中藥提取物的物理性質(zhì)，水提物比較容易成型，而醇提物由于有很多油性物質(zhì)導(dǎo)致成型非常困難；外在因素有基質(zhì)種類和配比、化料溫度、滴距、丸重、冷卻劑種類和冷卻劑溫度[4]。研究人員應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況選擇合適的正交設(shè)計方法，確定最佳工藝，保證滴丸制劑安全、穩(wěn)定、有效和可控。