陶然 李秋彤

摘要：人乳頭瘤病毒（HPV）可誘發(fā)宮頸癌等上皮相關(guān)的惡性腫瘤疾病，嚴(yán)重威脅人類健康，研制疫苗能夠有效預(yù)防和治療其感染。本文分析了HPV疫苗相關(guān)專利的主要申請人及其核心專利，以期為我國HPV疫苗的開發(fā)方向和專利申請?zhí)峁﹨⒖肌?/p>

關(guān)鍵詞：人乳頭瘤病毒;HPV;疫苗;專利

中圖分類號：G306;R737.33 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1003-5168（2020）27-0106-03

1 序言

人乳頭瘤病毒（HPV）是一種屬于乳多空病毒科乳頭瘤空泡病毒A屬的無包膜閉環(huán)雙鏈DNA病毒[1]。目前，其已知基因型多達(dá)200種，根據(jù)對宿主細(xì)胞的轉(zhuǎn)化能力和致癌能力可分為高危型和低危型。高危型HPV的持續(xù)反復(fù)感染可導(dǎo)致多種惡性腫瘤疾病如宮頸癌等的發(fā)生。近年來，通過研制疫苗預(yù)防和治療由HPV感染導(dǎo)致的疾病成為臨床研究熱點(diǎn)。

HPV疫苗根據(jù)功能可分為預(yù)防性和治療性。HPV衣殼蛋白L1高度保守，是其型特異性抗原，而衣殼蛋白L2變異度較高，與其抗原多態(tài)性相關(guān)[2]。L1/L2蛋白體外表達(dá)形成的重組病毒樣顆粒（VLP）不具有感染能力，但保留免疫原性，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性抗體中和病毒，預(yù)防HPV感染。早期蛋白E6和E7是HPV主要致癌蛋白 [3]，為治療性疫苗的重要靶點(diǎn)。

2006年，Gardasil 4（Merck，HPV6/11/16/18）成為全球首個(gè)上市的HPV預(yù)防性疫苗。2009年，Cervarix（GSK，HPV16/18）獲批在美上市。2014年，推出新一代疫苗Gardasil 9（Merck，HPV6/11/16/18/31/33/45/52/58），拓寬了預(yù)防范圍。我國首個(gè)國產(chǎn)HPV預(yù)防性疫苗Cecolin（萬泰生物，隸屬養(yǎng)生堂有限公司，HPV16/18）于2020年5月獲批。而HPV治療性疫苗仍然處于臨床試驗(yàn)的早期階段。

自HPV疫苗上市以來，受到了女性群體的廣泛關(guān)注，九價(jià)疫苗更是一針難求、依賴國外產(chǎn)品，因此，亟需加快國產(chǎn)疫苗的研究。本文從專利角度對HPV疫苗相關(guān)技術(shù)進(jìn)行總結(jié)，以期為我國HPV疫苗的開發(fā)和專利申請?zhí)峁﹨⒖肌?/p>

2 主要申請人分析

使用DWPI檢索HPV疫苗專利，獲得初步結(jié)果后進(jìn)行人工去噪，數(shù)據(jù)截止2020年7月。

圖1顯示了全球HPV疫苗專利申請量排名。其中，英國葛蘭素史克公司、德國默克集團(tuán)、廈門大學(xué)和養(yǎng)生堂集團(tuán)的專利申請量占有絕對優(yōu)勢，且三者均擁有上市疫苗產(chǎn)品。本文對上述申請人的核心專利進(jìn)行了梳理。

3 重點(diǎn)申請人核心專利分析

3.1 葛蘭素史克

葛蘭素史克首個(gè)HPV疫苗專利申請始于1998年，EP1007551B1公開了一種包含融合蛋白的疫苗組合物，在E6/E7蛋白中引入突變以消除其潛在的轉(zhuǎn)化能力作為抗原，然后連接至流感嗜血菌B的蛋白D，該疫苗激活與CD4+ T細(xì)胞有關(guān)的抗腫瘤免疫應(yīng)答，治療HPV誘導(dǎo)的腫瘤病變。之后，葛蘭素史克專注于預(yù)防性疫苗的專利布局，技術(shù)分支包括VLP制備、多價(jià)疫苗、多聯(lián)疫苗。

對于VLP制備，WO03078455A2采用昆蟲細(xì)胞作為生產(chǎn)系統(tǒng);US20120087937A1在HPV18L1多肽中插入L2表位肽制備嵌合VLP。

對于多價(jià)疫苗，CN1325117C公開了包含HPV16/18的L1 VLPs、氫氧化鋁和3D-MPL的疫苗，其為Cervarix的核心專利;CN100528226C公開了包含HPV16/18/31/45的L1蛋白的疫苗組合物;CN1976718B公開了包含HPV16/18和至少一種選自HPV31/45/52的VLP的免疫原性組合物，其中HPV31/45/52的劑量少于HPV16/18，其特點(diǎn)在于HPV16/18的VLP可提供對HPV31/45/52的交叉保護(hù)。

對于多聯(lián)疫苗，包括HPV、HBV、HSV、HIV等的聯(lián)合疫苗組合物（EP1064025B1、CN1522153A、CN1171637C）。

3.2 默克

CA2022394A1是默克首個(gè)HPV疫苗專利申請，始于1990年，公開了一種多肽，能有效阻斷HPV E7蛋白與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因編碼的蛋白的結(jié)合，用于治療生殖器疣和宮頸癌。此后，還于1992年和1998年再次提交了治療性疫苗專利申請，但主要申請方向也轉(zhuǎn)向了預(yù)防性疫苗領(lǐng)域，技術(shù)分支包括L1/L2蛋白制備、多價(jià)疫苗、蛋白和疫苗的穩(wěn)定。

對于L1/L2蛋白制備，CN1152935A、CN1100876C、CN1154732C、US5821087A、US5888516A采用酵母細(xì)胞作為生產(chǎn)系統(tǒng)，涉及HPV6a/6b/11/16/18/31/33/35/41/45/58;EP1212358B1、CN100506999C、CN1859923B、CN1942

583B、CN1934131B優(yōu)化L1蛋白編碼基因的密碼子或去除酵母識別的內(nèi)部轉(zhuǎn)錄終止信號，提高酵母細(xì)胞中L1蛋白的表達(dá);EP1105466B1公開了純化VLP的方法，將細(xì)胞裂解物通過羥基磷灰石層析柱，然后用含磷酸根陰離子的溶液洗脫VLP，純度至少為75%。

對于多價(jià)疫苗，US6689366B1公開了一種包含重組HPV6 L1蛋白的疫苗，所述蛋白還包含HPV11的構(gòu)象表位，可產(chǎn)生針對兩種病毒表位的中和抗體;US7709010B2公開了一種HPV疫苗制劑，包含至少一種HPV型別的重組L1/L2蛋白和鋁佐劑、ISCOMATRIX佐劑，其為Gardasil 9的核心專利。

對于蛋白和疫苗的穩(wěn)定，CN1259051A在HPV抗原制劑中添加50mM～500mM的氯化鈉以及至少0.2%w/v的多乙氧基醚80，在2℃～8℃穩(wěn)定至少1個(gè)月;US6251678B1添加鹽、非離子表面活性劑和緩沖劑使HPV疫苗長期穩(wěn)定;US6436402B1通過谷胱甘肽促進(jìn)硫醇氧化和30-40℃高溫孵育和/或暴露于可溶性金屬表面使純化的L1/L2蛋白成熟，所得VLP具有增加的保質(zhì)期和更高效力;WO2012177970A1添加甘露醇和蔗糖增加凍干HPV抗原制劑穩(wěn)定性。