毛佳泉，李學(xué)英，樊軍佑，顧玉姣，寇 煒

（西北民族大學(xué)醫(yī)學(xué)院，甘肅 蘭州 730030）

近年來，我國心血管疾病的患病率和死亡率呈逐漸上升趨勢。據(jù)統(tǒng)計(jì)推算，我國心血管疾病現(xiàn)患人數(shù)2.9億，其中高血壓2.45億，腦卒中1300萬，冠心病1100萬，心力衰竭450萬等[1]。其中高血壓患病人數(shù)居于心血管疾病榜首，我國成人高血壓患病率27.9%、知曉率51.6%、治療率為45.8%、控制率為16.8%，治療控制率37.5%[1]。上述數(shù)據(jù)表明，我國高血壓患者對高血壓知曉率、疾病危害認(rèn)知水平仍較低。原發(fā)性高血壓（EH）的發(fā)生受多重因素影響，主要分為遺傳因素和環(huán)境因素兩個(gè)方面。其中不合理的飲食結(jié)構(gòu)，如過量攝入食鹽是引起我國人群高血壓最常見的環(huán)境因素[2]。已有大量研究數(shù)據(jù)表明，鈉的攝入量與血壓值之間密切相關(guān)[3]。過量的攝入鈉會(huì)顯著增高血壓，增加患高血壓及其他心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)[4，5]。心血管疾病的患病風(fēng)險(xiǎn)存在性別差異，據(jù)報(bào)道，與同年齡的女性相比，男性更容易患心血管疾病，因心血管疾病死亡的可能性也越大[6]。為與我國人群高鹽飲食致高血壓疾病的實(shí)際情況更加接近，本實(shí)驗(yàn)通過給予SD大鼠8%高鹽飼料，動(dòng)態(tài)觀察大鼠尾動(dòng)脈收縮壓變化的方法建立高鹽誘導(dǎo)高血壓大鼠模型，旨在觀察高鹽飲食對雄性SD大鼠血壓、心血管及腎臟的影響。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物及分組

120-140g雄性SD大鼠14只，購于蘭州獸醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，置于室溫22-25℃、相對濕度45%左右的動(dòng)物房內(nèi)飼養(yǎng)。普通級大鼠正常鹽（0.5% NaCl）和高鹽（8% NaCl）飼料購于北京科澳協(xié)力有限公司。所有SD大鼠給予正常鹽飼料、自由飲水適應(yīng)性喂養(yǎng)1w后，隨機(jī)分為2組：對照組（6 只，含 0.5% Nacl飼料喂養(yǎng)）、高鹽組（8 只，含8% Nacl飼料喂養(yǎng)）共飼養(yǎng)12周。大鼠模型建立參考文獻(xiàn)[7]。

1.2 測定體重、血壓

在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠體重通過稱重天平于實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)第12周時(shí)測定。體重變化百分比的計(jì)算方法為最終體重與初始體重之差除以初始體重。SD大鼠血壓測量采用標(biāo)準(zhǔn)無創(chuàng)尾部測壓法測量大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，分別在實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)第10周、實(shí)驗(yàn)第12周時(shí)測量，每只大鼠間隔3min測量1次共3次，取3次測量值的平均值作為該只大鼠尾動(dòng)脈收縮壓。

1.3 血樣本留取及檢測方法

造模結(jié)束后，2%戊巴比妥鈉按照50mg/kg的劑量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行大鼠腹腔注射麻醉。腹主動(dòng)脈取血6ml于EDTA 抗凝管中，4℃離心（3000r/min）15min，分離血漿，-80℃保存?zhèn)溆谩２捎肊LISA法測定大鼠血漿中ICAM-1、TNF-α水平，所有操作步驟嚴(yán)格遵照試劑盒操作說明書進(jìn)行，試劑盒購自南京建成生物工程研究所。

1.4 左心室質(zhì)量指數(shù)LVMI、雙腎肥大指數(shù)測定及組織切片的制備、染色

12周末，血樣本留取完畢后斷頭處死大鼠，立即開胸取出心臟、胸主動(dòng)脈段用冰生理鹽水進(jìn)行清洗，吸水紙吸干后剪去多余部分留取左心室部分進(jìn)行稱重，計(jì)算LVMI，LVMI=左心室質(zhì)量 （mg）/體重（g）。隨后迅速取出大鼠雙側(cè)腎臟，置于冰生理鹽水中清洗，吸水紙吸干后稱重，計(jì)算雙腎肥大指數(shù)，即雙腎質(zhì)量（mg）/體重（g）。將取得的大鼠胸主動(dòng)脈段、雙側(cè)腎臟組織放入4%多聚甲醛中固定，常規(guī)脫水，石蠟包埋，30μm連續(xù)切片，做HE、Masson染色。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

使用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間樣本數(shù)據(jù)比較采用t檢驗(yàn)法，采用Pearson法進(jìn)行相關(guān)性分析，以P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高鹽飲食對SD大鼠血壓、體重、LVMI和雙腎指數(shù)的影響

實(shí)驗(yàn)10周時(shí)，與對照組相比，高鹽飲食組大鼠血壓顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且血壓持續(xù)升高至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。對照組大鼠血壓在整個(gè)實(shí)驗(yàn)周期中變化不明顯，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表 1。

與對照組相比，高鹽飲食組大鼠體重變化百分比、LVMI和雙腎指數(shù)明顯增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示高鹽飲食組大鼠出現(xiàn)了腎損害和左室代償性肥厚及重構(gòu)現(xiàn)象，見表2。

2.2 大鼠血漿TNF-、ICAM-1水平測定

實(shí)驗(yàn)?zāi)?，與對照組相比，高鹽飲食組大鼠血漿TNF-、ICAM-1水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

表1 高鹽飲食期各組大鼠血壓值比較[mmHg，（±s）]

表1 高鹽飲食期各組大鼠血壓值比較[mmHg，（±s）]

與 0 周時(shí)比較，?P＞0.05；與對照組比較，??P＜0.01；

組別 0周 1 0周 1 2周對照組 9 8.2±2.7 1 1 3.1±2.1 1 1 4.8±1.6*高鹽組 1 0 0.4±3.2 1 4 7.3±8.8** 1 5 6.6±6.4**

表2 高血壓組與對照組大鼠試驗(yàn)后血漿TNF-α、ICAM-1水平比較（±s）

表2 高血壓組與對照組大鼠試驗(yàn)后血漿TNF-α、ICAM-1水平比較（±s）

與對照組比較，**P＜0.01。

組別 體重變化（%） L V M I(m g/g) 雙腎肥大指數(shù)（g/m g） I C A M-1(n g/m l) T N F-（n g/m l)對照組 4 9.6 0±8.7 4 1.3 3±0.1 1 5.4 2±0.3 0 2 2.2 2±5.2 3 1 1 8.5 8±1 6.0 4高鹽組 8 5.8 4±1 4.0 3** 1.7 4±0.2 6** 7.3 9±0.5 2** 4 2.8 9±9.8 7** 1 6 8.0 4±1 5.0 2**

2.3 大鼠胸主動(dòng)脈、腎組織HE、Masson染色

與對照組相比，根據(jù)高鹽組大鼠腎組織HE染色結(jié)果，可見大部分腎小管擴(kuò)張、萎陷、肥大，腎間質(zhì)充血水腫，血管球萎縮腎小囊腔擴(kuò)大；與對照組相比，高鹽組大鼠腎組織Masson染色結(jié)果顯示高鹽組大鼠腎間質(zhì)纖維化顯著，如圖1所示。與對照組相比，HE染色結(jié)果顯示，高鹽飲食組大鼠胸主動(dòng)脈內(nèi)膜、中膜增厚，內(nèi)彈力膜斷裂，如圖1所示。

圖1 兩組大鼠腎組織、胸主動(dòng)脈HE、Masson染色

3 討論

鹽攝入量與高血壓發(fā)病率呈正相關(guān)，高鹽攝入是引起我國人群高血壓疾病發(fā)生發(fā)展的主要原因之一[8]。我國人群日均鈉攝入量在全球其他國家人群日均鈉攝入量調(diào)查中排名第一，相關(guān)研究顯示，人每日每增加2g鹽攝入，平均血壓可升高2mmHg左右，而減少鈉攝入量可顯著降低心肌梗死、冠心病等心血管事件的發(fā)生率[9]。相關(guān)研究證實(shí)，長期以8% NaCl高鹽飼料喂養(yǎng)SD大鼠，飼喂12周后大鼠尾動(dòng)脈收縮壓顯著增加并將持續(xù)增高[10]。本研究對8只SD大鼠進(jìn)行高鹽飼料喂養(yǎng)，第10周時(shí)發(fā)現(xiàn)高鹽組大鼠尾動(dòng)脈收縮壓顯著高于對照組且尾動(dòng)脈收縮壓持續(xù)增高直至實(shí)驗(yàn)?zāi)?，提示高鹽飲食能增加高血壓的發(fā)生率。已有研究證明，EH不僅與遺傳因素、飲食習(xí)慣、神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)等有著密切聯(lián)系外，還與炎癥反應(yīng)有關(guān)[11]。TNF-為一類炎癥因子，Yang等[12]研究發(fā)現(xiàn)其對血管不僅有促收縮作用還具有舒張血管的作用，與TNF-劑量有關(guān)。少量的TNF-通過促進(jìn)血管壁平滑肌細(xì)胞增殖和激活1，4，5-三磷酸肌醇受體通路促進(jìn)血管收縮，血壓升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高鹽組大鼠血漿TNF-水平遠(yuǎn)高于對照組，提示高鹽組大鼠體內(nèi)存在炎癥反應(yīng)，可能是由于高鹽組大鼠血壓長期處于較高水平，體內(nèi)血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變，血管內(nèi)皮細(xì)胞受損，激活了體內(nèi)炎癥反應(yīng)系統(tǒng)，促使T淋巴細(xì)胞等炎癥反應(yīng)細(xì)胞合成分泌少量的TNF-。ICAM-1屬于黏附分子免疫球蛋白家族，正常大鼠體內(nèi)表達(dá)量極少，主要參與介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞間、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間的識別與黏附[1 3]。ICAM-1在多種炎癥細(xì)胞內(nèi)均有所表達(dá)[14]，通過介導(dǎo)白細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附和與腎小管上皮細(xì)胞ICAM-1受體結(jié)合促使炎癥細(xì)胞在腎小管、腎間質(zhì)內(nèi)浸潤，從而加重血管和腎臟損傷，促進(jìn)了高血壓的發(fā)生發(fā)展[14]。本實(shí)驗(yàn)中高鹽組HE染色顯示大鼠胸主動(dòng)脈出現(xiàn)內(nèi)彈性膜斷裂、結(jié)構(gòu)紊亂和中膜增厚，HE、Masson染色顯示大鼠腎臟受損嚴(yán)重間質(zhì)纖維化明顯，大鼠血漿ICAM-1水平顯著高于對照組，提示在高鹽飲食下，機(jī)體血流動(dòng)力學(xué)發(fā)生改變，血管壁受損后ICAM-1等黏附因子表達(dá)增高，進(jìn)一步促進(jìn)了白細(xì)胞與血管內(nèi)皮細(xì)胞黏附，從而加重了大鼠血管和腎臟損傷，促進(jìn)了高血壓發(fā)生發(fā)展。相關(guān)研究顯示，高鈉環(huán)境對心肌細(xì)胞有獨(dú)立于血壓外的直接損害作用[15]，在高鈉環(huán)境干預(yù)下，離體心肌細(xì)胞出現(xiàn)增生肥大。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，高鹽組大鼠LVMI顯著高于對照組，提示高鹽組大鼠左室心肌出現(xiàn)代償性肥大和重構(gòu)現(xiàn)象，推測與腎素-血管緊張素系統(tǒng)參與調(diào)節(jié)水鈉代謝有關(guān)。

綜上所述，長期8%高鹽飼料飼喂SD大鼠可誘導(dǎo)高血壓，高鹽飲食可致大鼠血漿中炎癥因子TNF-、黏附分子ICAM-1分泌異常，同時(shí)高鹽飲食對大鼠血管、腎臟有不同程度的損害作用，這些因子水平的改變和臟器實(shí)質(zhì)性損害都與血壓升高密切相關(guān)。高鹽飲食是我國高血壓人群主要特點(diǎn)之一，因此在高血壓防治工作中應(yīng)強(qiáng)調(diào)限鹽飲食，減小高血壓所致靶器官損害。