尹思成?朱述英

摘要：目的：研究不同時(shí)期采收的大青葉中靛玉紅含量差異，確定大青葉的最佳采收時(shí)間。方法：采用高效液相色譜法測(cè)定不同采收期的大青葉中靛玉紅含量。結(jié)果：不同生長(zhǎng)時(shí)期的大青葉中靛玉紅存在一定差異，以7月上旬采收的大青葉中靛玉紅的含量最高。結(jié)論：7、8月份采收的大青葉質(zhì)量較好，以7月上旬采收時(shí)間為最佳。

關(guān)鍵詞：采收期;大青葉;質(zhì)量

大青葉（IsatistinctoriaL.），味苦，性寒;歸肝、胃經(jīng);具有清熱解毒，涼血消斑之功效，用治溫病發(fā)熱，發(fā)斑，風(fēng)熱感冒，咽喉腫痛及丹毒，流行性乙型腦炎、肝炎和腮腺炎等癥?，F(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn)其具有抗菌抗病毒、抗鉤端螺旋體、解毒、提高免疫、抗腫瘤、對(duì)抗白血病等作用。而靛玉紅是其主要的活性成分，因此測(cè)定靛玉紅的含量對(duì)于研究大青葉的質(zhì)量起著至關(guān)重要的影響。

許多研究表明，中藥材不同采收時(shí)節(jié)期限，對(duì)其內(nèi)含藥效物質(zhì)有一定影響，葉類(lèi)藥材多在植物生長(zhǎng)旺盛期，開(kāi)花前或果實(shí)成熟前采收。大青葉的傳統(tǒng)采收為夏秋2季分2次～3次采收葉片，除去雜質(zhì)，曬干。本項(xiàng)目對(duì)校內(nèi)種植的大青葉資源分三次采收，通過(guò)測(cè)定大青葉中靛玉紅的含量差異來(lái)確定最佳采收時(shí)期。

1 實(shí)驗(yàn)條件與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備

高效液相色譜儀（LC-10ATvp型，日本島津）;精密電子天平（METTLER TOLE-DO AG204型，瑞士）;TAS-986原子吸收分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）;優(yōu)普純水機(jī)（UPT-II-10T）。試劑：氯仿（AR級(jí)，天津化學(xué)試劑廠），色譜甲醇（美國(guó)Fisher公司），水為純化水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方案

1.2.1 采收與加工

7月上旬苗高18～20 cm時(shí)可收割一次葉子，割時(shí)留茬3～5 cm，之后于8月中旬、10月中旬待苗重新生長(zhǎng)可再分布割一次。割取的大青葉陰干。

1.2.2 薄層層析

取7月、8月和10月采摘的大青葉粉末各約0.5g，加氯仿20mL，加熱回流1h，濾過(guò)，濾液濃縮至1mL，作為供試品溶液。另取靛玉紅和靛藍(lán)對(duì)照品，加氯仿制成每1mL各含1mg的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述供試品和對(duì)照品溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以苯-氯仿-丙酮（5：4：1）為展開(kāi)劑，上行展開(kāi)10cm，取出，晾干。

1.2.3 靛玉紅含量測(cè)定

（1）色譜條件：色譜柱為ALLsphereODS-2（4.6mm×250mm，5μm）不銹鋼色譜柱，流動(dòng)相為甲醇-水（75∶25），檢測(cè)波長(zhǎng)為289nm，流速為1mL/min，室溫。理論板數(shù)按靛玉紅峰計(jì)算大于4000。

（2）對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取靛玉紅對(duì)照品5mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，配制成50μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)液作為原液。準(zhǔn)確移取原液2.5mL、2mL、1mL、2mL分別加入5mL、5mL、5mL、25mL的容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，配制成25μg/mL、20μg/mL、10μg/mL、2μg/mL的對(duì)照品溶液。

（3）供試品溶液的制備：精密稱(chēng)定7月、8月和10月大青葉粉末分別為0.5000g，0.4999g，0.5001g，置索氏提取器中，加三氯甲烷100mL，浸泡12h，加熱回流6h，至提取液無(wú)色，回收溶劑至干。殘?jiān)屑蛹状际谷芙獠⑥D(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，經(jīng)0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，濾液作為供試品溶液。

（4）系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：在“1.2.3.1”的色譜條件下，精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，分別注入液相色譜儀進(jìn)行試驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1 薄層掃描

通過(guò)薄層色譜圖比較，三次采收藥材在靛玉紅對(duì)照品的相同位置上均有相同顏色斑點(diǎn)，10月大青葉斑點(diǎn)明顯淺于7、8月大青葉，7月與8月的顏色差別不大。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

由圖1可知，靛玉紅峰形良好，分離效果好。

2.3 靛玉紅含量

7、8、9月采收的大青葉中靛玉紅的含量分別是2196μg/g、1918μg/g、1347μg/g。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)不同采收期大青葉中靛玉紅的含量測(cè)定比較，結(jié)果表明采收期對(duì)大青葉中主要藥效成分靛玉紅的含量具有明顯的影響。7、8月份采收藥材靛玉紅的含量遠(yuǎn)高于10月采收，其中7月上旬采收質(zhì)量最好。國(guó)內(nèi)大部分資料記載大青葉的傳統(tǒng)采收期為夏秋2季，分2～ 3次采收葉片，除去雜質(zhì)、曬干。在北方，6月下旬苗高18～ 20cm時(shí)可收割1次葉子，割時(shí)留茬3～ 5cm，待苗重新生長(zhǎng)可再割1次葉，氣候溫暖地區(qū)，每年可收葉3次。但從靛玉紅累積含量的角度分析，大青葉的采收時(shí)間以7月上旬為最佳時(shí)機(jī)。

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基金項(xiàng)目：山東協(xié)和學(xué)院2019年度大學(xué)生實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放項(xiàng)目“常見(jiàn)中藥材基原鑒定研究”（編號(hào)：2019SYKF03）。

指導(dǎo)老師：朱述英（1983—），女，山東滕州人，碩士，副教授，研究方向?yàn)橹兴幩幚韺W(xué)。

（作者單位：山東協(xié)和學(xué)院）