李敬芳，鄭文香

（廊坊衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，河北廊坊 065000）

隨著我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，動(dòng)物養(yǎng)殖數(shù)量逐年增多，已經(jīng)形成了集約化、規(guī)?；酿B(yǎng)殖模式，在養(yǎng)殖過(guò)程中為了更好防治相關(guān)的疾病，濫用抗菌藥物，導(dǎo)致許多耐藥細(xì)菌出現(xiàn)，降低了抗菌藥物的治療效果，同時(shí)也造成肉、蛋、奶等多種畜產(chǎn)品中的藥物殘留，危害著人們健康，成為了公共的衛(wèi)生問(wèn)題（張召興，2017；易曉菲，2016）。因此，研發(fā)代替抗菌藥物使用的新型添加劑成為了新的研究方向。復(fù)合益生菌制劑是由多種類的益生菌經(jīng)過(guò)多種特殊工藝制成的一種活菌制劑，該制劑具有促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育、調(diào)整腸道內(nèi)菌群平衡、提高免疫機(jī)能等多種優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖中（仲偉光等，2018；胡興義等，2017；劉政，2017）。相關(guān)研究表明，益生菌可以替代抗菌藥物使用，具有廣闊的應(yīng)用前景（李世傳等，2016）。本試驗(yàn)旨在研究復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠生長(zhǎng)性能、 免疫及抗氧化能力的影響，為復(fù)合益生菌制劑在臨床進(jìn)一步的應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)菌株 復(fù)合益生菌制劑主要包括乳酸桿菌、乳雙歧桿、酵母菌，其中乳酸桿菌、乳雙歧桿的活菌數(shù)為 9.0×109cfu/g、 酵母菌的活菌數(shù)為4.5×109cfu/g，由本試驗(yàn)制備的干燥固體制劑。

1.2 主要試劑與儀器 免疫球蛋白IgG、IgM、I-gA ELISA Kit 試 劑 盒 、 細(xì) 胞 因 子 IL-2、IL-6 ELISA Kit 試劑盒均購(gòu)于 Elabscience 公司；總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH-Px）均購(gòu)于北京中控生物技術(shù)有限公司；高速小型離心機(jī)均有德國(guó)Eppendorf 公司生產(chǎn)；全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀由北京凱奧科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)；常規(guī)的試劑及儀器由本實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因素設(shè)計(jì)試驗(yàn)，選擇體質(zhì)量為（20±2.2）g 健康昆明系小白鼠 120 只（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），隨機(jī)分成4 組，每組3 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 只，1組為空白對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)2、3、4 組分別在基礎(chǔ)日糧中添加0.5%、1.0%、1.5%的復(fù)合益生菌制劑，試驗(yàn)期為56 d。按照常規(guī)的飼養(yǎng)方式對(duì)試驗(yàn)小白鼠進(jìn)行飼養(yǎng)與管理，每個(gè)重復(fù)組單獨(dú)飼養(yǎng)，自由采食和飲水。

1.4 試驗(yàn)飼糧配比 參考秦哲（2017）的方法配制試驗(yàn)小白鼠的基礎(chǔ)飼糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（干物質(zhì)基礎(chǔ)） %

1.5 指標(biāo)測(cè)定及方法

1.5.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 在試驗(yàn)期間斷料12 h，對(duì)每個(gè)試驗(yàn)組小白鼠逐個(gè)稱重，記錄試驗(yàn)開始與結(jié)束的體重及耗料量。測(cè)定平均日增重、平均日采食量、料重比。

1.5.2 免疫及抗氧化能力檢測(cè) 在試驗(yàn)后1、25、56 d，斷料12 h，每個(gè)組隨機(jī)抽取5 只小白鼠摘眼球取血，離心分離血清。按照說(shuō)明書測(cè)定血清中免疫球蛋 IgG、IgM、IgA 及細(xì)胞因子 IL-2、IL-6 的含量，按說(shuō)明書檢測(cè) T-SOD、GSH-Px、T-AOC 等抗氧化能力指標(biāo)。

1.6 試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用 “平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件SPSS 18.0 對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行單因素方差分析，以P ＜0.05 表示差異顯著性。

2 結(jié)果

2.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠生長(zhǎng)性能的影響由表2 可知，試驗(yàn)3、4 組小白鼠平均日增重顯著高于 1組 （P ＜ 0.05），與 1組相比分別提高36.9%、30.43%；試驗(yàn)2 組平均日增重高于1組，差異性不顯著 （P＞0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）；試驗(yàn) 2、3、4 組平均采食量均高于1組，差異性不顯著 （P＞0.05）；試驗(yàn) 3、4 組料重比顯著低于 1組（P ＜ 0.05），與 1組相比分別降低17.0%、15.6%；試驗(yàn)2 組低于1組，差異性不顯著 （P＞0.05）；3 個(gè)試驗(yàn)組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。

表2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠生長(zhǎng)性能的檢測(cè)結(jié)果

2.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠免疫指標(biāo)的影響由表3 可知，在試驗(yàn)后 1 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中IgG 含量均高于 1組，差異性不顯著（P＞0.05）；在試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 IgG 含量均顯著高于 1組 （P ＜ 0.05），與 1組相比分別提高20.3%、20.3%、13.9%、12.8%；試驗(yàn) 2 組高于 1組，差異性不顯著 （P＞0.05），3 個(gè)試驗(yàn)組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）。在試驗(yàn)后 1 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 IgA 含量均高于 1組，差異性不顯著（P＞0.05）；在試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 IgA 含量均顯著高于 1組（P ＜ 0.05），與 1組相比分別提高18.0%、16.5%、15.8%、14.4%；試驗(yàn)2 組高于 1組，差異性不顯著 （P＞0.05），3 個(gè)試驗(yàn)組之間相比，差異性不顯著（P＞0.05）；在試驗(yàn)后 1、28、56 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 IgM 含量均高于 1組，差異性不顯著（P＞0.05）。

表3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠血清中免疫球蛋白含量的檢測(cè)結(jié)果 ng/mL

由表4 可知，在試驗(yàn)后 1 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中IL-2 含量均高于1組，差異性不顯著 （P >0.05）；在試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 IL-2含量均顯著高于 1組（P ＜ 0.05），與 1組相比分別提高 29.4%、27.5%、18.6%、18.1%；試驗(yàn) 2 組高于1組，差異性不顯著（P > 0.05），3 個(gè)試驗(yàn)組之間相比，差異性不顯著（P > 0.05）；在試驗(yàn)后 1、28、56 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 IL-6 含量均高于 1組，差異性不顯著（P > 0.05）。

表4 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠血清中細(xì)胞因子含量的檢測(cè)結(jié)果 ng/mL

2.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠抗氧化能力的影響 由表5 可知，在試驗(yàn)后 1 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中T-SOD 活性均高于1組，差異性不顯著（P >0.05）；在試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 TSOD 活性均顯著高于 1組（P ＜ 0.05），與 1組相比分別提高 7.8%、7.6%、9.1%、8.9%；試驗(yàn) 2 組高于 1組，差異性不顯著（P > 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組之間相比，差異性不顯著（P > 0.05）；在試驗(yàn)后1、28、56 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 T-AOC、GSH-Px含量均高于1組，差異性不顯著（P > 0.05）。

表5 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠清中抗氧化能力指標(biāo)的檢測(cè)結(jié)果

3 討論

3.1 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠生長(zhǎng)性能的影響相關(guān)研究表明, 益生菌富含多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及消化酶類，可促進(jìn)飼料在動(dòng)物體內(nèi)的消化吸收，提高動(dòng)物的生長(zhǎng)性能。王杰等（2016）報(bào)道了復(fù)合益生菌制劑可以顯著提高仔豬生長(zhǎng)性能。申紅春（2018）報(bào)道，復(fù)合微生物制劑可以提高肉牛的生長(zhǎng)性能。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)3、4 組小白鼠平均日增重顯著高于 1組 （P ＜ 0.05），料重比顯著低于 1組（P ＜ 0.05），試驗(yàn) 2、3、4 組平均采食量均高于 1組，差異性不顯著 （P > 0.05），說(shuō)明了復(fù)合益生菌制劑可以提高小白鼠的平均日增重、 平均日采食量、降低料肉比，以1.5%添加為適宜。復(fù)合益生菌制劑的添加可以促進(jìn)小白鼠調(diào)節(jié)腸道菌群平衡，抑制有害菌的生長(zhǎng)，促進(jìn)消化道內(nèi)消化酶的分泌，提高飼料在體內(nèi)的利用率，從而提高小白鼠的生產(chǎn)性能。

3.2 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠免疫指標(biāo)的影響免疫球蛋白主要包括IgG、IgM、IgA，其主要的功能為介導(dǎo)體液免疫，其含量變化是評(píng)價(jià)免疫機(jī)能的重要指標(biāo)之一，IgG、IgA 在抗感染免疫中起著重要作用，IgM 是機(jī)體免疫中出現(xiàn)最早的抗體，具有殺菌功能（張召興，2017；胡興義，2017；易曉菲，2016）。IL-2 是介導(dǎo)細(xì)胞免疫主要細(xì)胞因子，可以刺激機(jī)體T 淋巴細(xì)胞增殖，在免疫過(guò)程中具有重要作用（宋麗霞，2011）。細(xì)胞因子 IL-6 是免疫系統(tǒng)中重要的細(xì)胞因子，主要參與機(jī)體的體液免疫和細(xì)胞免疫，促進(jìn)B 細(xì)胞分化、增殖和再次產(chǎn)生免疫應(yīng)答（宋巴達(dá)瑪，2010）。本試驗(yàn)研究表明，在試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 IgG、IgA、IL-2 含量均顯著高于 1組（P ＜ 0.05），在試驗(yàn)期間，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 IgM、IL-6 含量均高于 1組，差異性不顯著（P > 0.05），說(shuō)明復(fù)合益生菌制劑可以誘導(dǎo)小白鼠產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答，提高其免疫機(jī)能。與劉明生等（2018）、胡興義（2017）報(bào)道的一致。由于復(fù)合益生菌所含的有效活性物質(zhì)可以刺激小白鼠免疫系統(tǒng)，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體與細(xì)胞因子，從而增強(qiáng)小白鼠的免疫機(jī)能。

3.3 復(fù)合益生菌制劑對(duì)小白鼠抗氧化能力的影響 機(jī)體在新陳代謝過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生多種氧化自由基，這些氧化自由基可以導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激性損傷，給動(dòng)物機(jī)體造成嚴(yán)重?fù)p傷 （賈青輝等，2017；王傳龍等，2017）。動(dòng)物體內(nèi)所含 T-AOC、TSOD、CAT 和GSH-Px 等酶系統(tǒng)具有清除自由基的作用（張建斌等，2018；王傳龍等，2017）。本試驗(yàn)研究表明，試驗(yàn)后 28、56 d，試驗(yàn) 3、4 組血清中 TSOD 活性均顯著高于 1組（P ＜ 0.05），在試驗(yàn)后1、28、56 d，試驗(yàn) 2、3、4 組血清中 T-AOC、GSH-Px含量均高于 1組，差異性不顯著（P > 0.05）。說(shuō)明復(fù)合益生菌制劑可以提高小白鼠血清中T-SOD、T-AOC、GSH-Px 活性，因而提高抗氧化能力。與王傳龍等（2017）報(bào)道的酵母菌培養(yǎng)物可以提高蛋雞抗氧化性能一致。復(fù)合益生菌制劑所含酶類物質(zhì)激活了體內(nèi)的酶系統(tǒng)，提高了清除自由基的能力，因而提高其抗氧化能力。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加1.0%復(fù)合益生菌制劑，可以提高小白鼠生長(zhǎng)性能、免疫機(jī)能及抗氧化能力。