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        活血潛陽祛痰方對肥胖高血壓大鼠心肌肥厚相關(guān)指標(biāo)的影響

        2020-06-08 02:10:36董振華符德玉
        吉林中醫(yī)藥 2020年5期
        關(guān)鍵詞:潛陽活血氧化應(yīng)激

        王 靜,董振華,符德玉,2*

        (1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心內(nèi)科,上海 200437;2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心血管研究室,上海 200437)

        肥胖是心血管疾病的獨(dú)立危險因素[1],可加劇高血壓靶器官損害及其心血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程[2]。肥胖高血壓心肌肥厚顯著增加惡性心血管事件的發(fā)生,是亟待解決的治療難點(diǎn)。AngⅡ是腎素—血管緊張素系統(tǒng)中的重要效應(yīng)分子,具有生長因子樣作用,可誘導(dǎo)心肌肥厚[3]。氧化應(yīng)激可引起內(nèi)皮功能障礙、血管損傷,也是導(dǎo)致高血壓心肌肥厚的重要病理因素之一[4-5]。研究[6]報道,AngⅡ可通過氧化應(yīng)激途徑參與心肌肥厚的發(fā)生。本研究以高脂飲食喂養(yǎng)自發(fā)性高血壓大鼠(Spontaneous hypertensive rats,SHR)誘導(dǎo)建立的肥胖高血壓大鼠模型為研究對象,施以活血潛陽祛痰方干預(yù)治療,檢測心肌肥厚相關(guān)指標(biāo),探討活血潛陽祛痰方治療肥胖高血壓心肌肥厚的可能機(jī)制。

        1 材料與方法

        1.1 動物 SPF級雄性SHR 120只,體質(zhì)量(150±20)g,性別相匹配的Wistar-Kyoto大鼠(WKY)12只,5周齡,購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司,實(shí)驗(yàn)動物許可證號:SCXK(北京)2016-0006。所有大鼠在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動物中心飼養(yǎng)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

        1.2 藥物 活血潛陽祛痰方為在丹蛭降壓方基礎(chǔ)上加減[7],由丹參、石決明、川芎、鉤藤、桑寄生、山楂等藥物組成。按照課題組前期研究[8],大鼠用量為臨床用量的18 倍,委托南京軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科按標(biāo)準(zhǔn)流程制備浸膏備用。纈沙坦,規(guī)格:80 mg/粒,7粒/盒,由諾華制藥公司(北京)生產(chǎn),國藥準(zhǔn)字:H20040217。

        1.3 主要試劑與儀器 MDA生化試劑盒(貨號:A003-1-2),Mn-SOD生化試劑盒(貨號:A001-2-2),GSH-Px生化試劑盒(貨號:A005),以上均由南京建成生物工程研究所提供。Ang II酶聯(lián)免疫試劑盒,由上海源葉生物科技有限公司提供。多功能酶標(biāo)儀(BioTek),臺式高速冷凍離心機(jī)(Eppendorf),以上由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所提供。高分辨率小動物超聲影響系統(tǒng):Vevo2100,探頭:MS250,動物麻醉機(jī):Vaporizer,超聲診斷儀:SuperSonic Aixplorer,以上由上海市東方醫(yī)院提供。

        1.4 實(shí)驗(yàn)分組及造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后,根據(jù)SHR體質(zhì)量隨機(jī)篩選出12只繼續(xù)喂養(yǎng)普通飼料(高血壓組,n=12),余108只喂養(yǎng)高脂飼料(配方參考文獻(xiàn)[9]改進(jìn):普通飼料60%、豬油12%、蔗糖5%、蛋黃粉10%、奶粉3%、生花生4.7%、麻油1%、食鹽2%、膽固醇2%、膽鹽0.3%,委托上海普路騰生物科技有限公司制作,4℃冷藏保存,每日投放)。造模干預(yù)10周后將108只高脂飼料喂養(yǎng)的SHR中體質(zhì)量位于上游前1/3的大鼠(n=36)選為肥胖高血壓大鼠[10],用于后期研究。

        1.5 藥品干預(yù)方案 36只肥胖高血壓大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為3組,各12只。給藥分組:WKY(正常血壓組,n=12),普通飼料+正常飲用水灌胃;高血壓組(n=12),普通飼料+正常飲用水灌胃;模型組(n=12),高脂飼料+正常飲用水灌胃;纈沙坦組(n=12),高脂飼料+30 mg/(kg·d)灌胃;活血潛陽祛痰方組(n=12),高脂飼料+生藥38.7 g/(kg·d)灌胃。藥物干預(yù)10周。

        1.6 觀察指標(biāo)及檢測方法

        1.6.1 各組大鼠心臟超聲參數(shù)檢測 末次藥物干預(yù)結(jié)束后,大鼠行脫毛處理,異氟烷吸入麻醉滿意后,采用高分辨率小動物超聲儀進(jìn)行心臟超聲檢查,檢測項(xiàng)目包括LVM、LVIDd、IVSd、LVPWd,每只大鼠均取3個心動周期進(jìn)行測量,取平均值。每組檢測3只。

        1.6.2 標(biāo)本取材 末次給藥結(jié)束后,大鼠禁食不禁水12 h后取材。大鼠稱重并記錄體質(zhì)量(BW),2%的戊巴比妥鈉(40 mg/kg)腹腔注射,麻醉滿意后固定,胸腹部脫毛,75%酒精消毒皮膚,暴露腹腔,以一次性采血針行腹主動脈取血8~10 mL,離心,吸取上層血清,分裝置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

        1.6.3 各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)檢測 腹主動脈取血結(jié)束后,迅速開胸取出心臟,用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈殘余血液,濾紙吸干水分后,用微型電子天平稱取心臟質(zhì)量(HW),并結(jié)合BW計算心臟質(zhì)量指數(shù)(HMI):HMI=HW/BW,評估心肌肥厚程度。

        1.6.4 血清Ang II檢測 利用ELISA試劑盒檢測血清Ang II水平,按照上海源葉生物科技有限公司提供的試劑盒說明書進(jìn)行操作。每組檢測6只。

        1.6.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 利用生化試劑盒檢測血清脂質(zhì)過氧化物MDA及抗氧化酶(CAT、Mn-SOD、GSHPx)水平,分別按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說明書進(jìn)行操作。每組檢測6只。

        1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 本研究采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計量資料符合正態(tài)分布及方差齊性時以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,多樣本均數(shù)比較采用One-Way ANOVA及SNK多重比較。以P<0.05為差別有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 各組大鼠超聲心動圖指標(biāo)比較 見表1。

        表1 各組大鼠超聲心動圖指標(biāo)比較(±s,n=3)

        表1 各組大鼠超聲心動圖指標(biāo)比較(±s,n=3)

        注:與正常血壓組比較,# P<0.05,## P<0.01;與高血壓組比較,△△P<0.01;與模型組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01

        2.2 各組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量(HW/BW)數(shù)值比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠HW/BW數(shù)值分別為(3.27±0.72)mg/g、(3.70±0.23)mg/g、(4.04±0.17)mg/g、(3.45±0.09)mg/g、(3.48±0.13)mg/g。高血壓組與模型組大鼠的HW/BW值均明顯高于正常血壓組水平(P<0.05或P<0.01);模型組HW/BW值高于高血壓組水平(P<0.05);藥物干預(yù)后,纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的HW/BW值均明顯低于模型組(P<0.01)。

        2.3 各組大鼠血清Ang Ⅱ水平比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠血清Ang Ⅱ含量分別為(112.23±14.17)pg/mL、(263.29±26.20)pg/mL、(378.58±33.84)pg/mL、(340.67±31.06)pg/mL、(335.65±34.05)pg/mL。高血壓組與模型組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均明顯高于正常血壓組(P<0.01);模型組血清Ang Ⅱ水平明顯高于高血壓組(P<0.01);藥物干預(yù)后,纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均低于模型組(P<0.05)。

        2.4 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、CAT、Mn-SOD、GSH-Px水平比較 見表2。

        表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標(biāo)比較(±s,n=6)

        表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標(biāo)比較(±s,n=6)

        注:與正常血壓組比較,# P<0.05,## P<0.01;與高血壓組比較,△P<0.05;與模型組比較,▲P<0.05,▲▲P<0.01

        3 討論

        心臟重塑是指由心臟負(fù)荷或損傷引起的心臟大小、形狀、成分和功能的改變,心肌肥厚是其重要表現(xiàn)之一[11]。肥胖會引起心臟形態(tài)與功能的改變,肥胖與高血壓對心肌肥厚產(chǎn)生交互、疊加作用,肥胖增加高血壓發(fā)生心肌肥厚的風(fēng)險[12-13]。研究[14]報道,SHR是研究人類高血壓心肌肥厚的經(jīng)典模型。本研究中,SHR的HW/BW、LVM、IVSd、LVPWd較正常血壓大鼠WKY升高,LVIDd有下降趨勢,表現(xiàn)出向心性心肌肥厚,且高脂飲食喂養(yǎng)構(gòu)建的肥胖高血壓大鼠心肌肥厚更加明顯?;钛獫撽栰钐捣礁深A(yù)10周后可明顯改善肥胖高血壓大鼠心肌肥厚。

        肥胖高血壓多合并代謝綜合征,歐洲高血壓指南推薦其降壓治療應(yīng)以阻斷腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)為首選方案[15]。腎素—血管緊張素系統(tǒng)的過度激活在肥胖相關(guān)的心肌肥厚中發(fā)揮重要作用[16],AngⅡ的產(chǎn)生是SHR早期心肌肥厚發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制[17-18]。本研究中,肥胖高血壓大鼠循環(huán)AngⅡ含量明顯升高,活血潛陽祛痰方治療后可有效降低血清AngⅡ含量,改善肥胖高血壓心肌肥厚?;钚匝醯暮铣膳c抗氧化防御系統(tǒng)對活性氧的清除之間的不平衡,會誘發(fā)氧化應(yīng)激,其在心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用[19-20]。證據(jù)表明,AngⅡ參與了SHR模型中活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激的發(fā)生[21],病理?xiàng)l件下,活性氧增加可能是AngⅡ引起心肌肥大的潛在機(jī)制,其可通過傳遞AngⅡ等細(xì)胞外信號,進(jìn)而激活下游肥大信號激酶和轉(zhuǎn)錄因子引起心肌肥厚[22]。本研究發(fā)現(xiàn),肥胖高血壓大鼠表現(xiàn)出更高的氧化應(yīng)激狀態(tài),活血潛陽祛痰方可通過降低血清MDA含量以及提高CAT活力、Mn-SOD含量來改善其氧化應(yīng)激水平。

        符德玉教授認(rèn)為“陽亢、痰濁、血瘀”是肥胖高血壓及其靶器官損害的主要病理因素,并在此基礎(chǔ)上總結(jié)出活血潛陽祛痰方共奏平肝潛陽、祛痰化濕、活血化瘀之功,臨床中已取得顯著療效。本研究中,活血潛陽祛痰方可抑制肥胖高血壓大鼠心肌肥厚,具有靶器官保護(hù)作用。其作用機(jī)制與降低血清Ang II含量,降低脂質(zhì)過氧化物MDA、升高抗氧化酶CAT活力、提高M(jìn)n-SOD含量從而降低氧化應(yīng)激水平有關(guān),但分子作用機(jī)制尚需要深入研究。

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