王 靜，董振華，符德玉,2*

（1.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心內(nèi)科，上海 200437；2.上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院心血管研究室，上海 200437）

肥胖是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[1]，可加劇高血壓靶器官損害及其心血管并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展進(jìn)程[2]。肥胖高血壓心肌肥厚顯著增加惡性心血管事件的發(fā)生，是亟待解決的治療難點(diǎn)。AngⅡ是腎素—血管緊張素系統(tǒng)中的重要效應(yīng)分子，具有生長因子樣作用，可誘導(dǎo)心肌肥厚[3]。氧化應(yīng)激可引起內(nèi)皮功能障礙、血管損傷，也是導(dǎo)致高血壓心肌肥厚的重要病理因素之一[4-5]。研究[6]報(bào)道，AngⅡ可通過氧化應(yīng)激途徑參與心肌肥厚的發(fā)生。本研究以高脂飲食喂養(yǎng)自發(fā)性高血壓大鼠（Spontaneous hypertensive rats，SHR）誘導(dǎo)建立的肥胖高血壓大鼠模型為研究對(duì)象，施以活血潛陽祛痰方干預(yù)治療，檢測心肌肥厚相關(guān)指標(biāo)，探討活血潛陽祛痰方治療肥胖高血壓心肌肥厚的可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SPF級(jí)雄性SHR 120只，體質(zhì)量（150±20）g，性別相匹配的Wistar-Kyoto大鼠（WKY）12只，5周齡，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（北京）2016-0006。所有大鼠在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心飼養(yǎng)室適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 藥物 活血潛陽祛痰方為在丹蛭降壓方基礎(chǔ)上加減[7]，由丹參、石決明、川芎、鉤藤、桑寄生、山楂等藥物組成。按照課題組前期研究[8]，大鼠用量為臨床用量的18 倍，委托南京軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科按標(biāo)準(zhǔn)流程制備浸膏備用。纈沙坦，規(guī)格：80 mg/粒，7粒/盒，由諾華制藥公司（北京）生產(chǎn)，國藥準(zhǔn)字：H20040217。

1.3 主要試劑與儀器 MDA生化試劑盒（貨號(hào)：A003-1-2），Mn-SOD生化試劑盒（貨號(hào)：A001-2-2），GSH-Px生化試劑盒（貨號(hào)：A005），以上均由南京建成生物工程研究所提供。Ang II酶聯(lián)免疫試劑盒，由上海源葉生物科技有限公司提供。多功能酶標(biāo)儀（BioTek），臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)（Eppendorf），以上由上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬岳陽中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合研究所提供。高分辨率小動(dòng)物超聲影響系統(tǒng)：Vevo2100，探頭：MS250，動(dòng)物麻醉機(jī)：Vaporizer，超聲診斷儀：SuperSonic Aixplorer，以上由上海市東方醫(yī)院提供。

1.4 實(shí)驗(yàn)分組及造模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，根據(jù)SHR體質(zhì)量隨機(jī)篩選出12只繼續(xù)喂養(yǎng)普通飼料（高血壓組，n=12），余108只喂養(yǎng)高脂飼料（配方參考文獻(xiàn)[9]改進(jìn)：普通飼料60%、豬油12%、蔗糖5%、蛋黃粉10%、奶粉3%、生花生4.7%、麻油1%、食鹽2%、膽固醇2%、膽鹽0.3%，委托上海普路騰生物科技有限公司制作，4℃冷藏保存，每日投放）。造模干預(yù)10周后將108只高脂飼料喂養(yǎng)的SHR中體質(zhì)量位于上游前1/3的大鼠（n=36）選為肥胖高血壓大鼠[10]，用于后期研究。

1.5 藥品干預(yù)方案 36只肥胖高血壓大鼠按體質(zhì)量隨機(jī)分為3組，各12只。給藥分組：WKY（正常血壓組，n=12），普通飼料+正常飲用水灌胃；高血壓組（n=12），普通飼料+正常飲用水灌胃；模型組（n=12），高脂飼料+正常飲用水灌胃；纈沙坦組（n=12），高脂飼料+30 mg/（kg·d）灌胃；活血潛陽祛痰方組（n=12），高脂飼料+生藥38.7 g/（kg·d）灌胃。藥物干預(yù)10周。

1.6 觀察指標(biāo)及檢測方法

1.6.1 各組大鼠心臟超聲參數(shù)檢測 末次藥物干預(yù)結(jié)束后，大鼠行脫毛處理，異氟烷吸入麻醉滿意后，采用高分辨率小動(dòng)物超聲儀進(jìn)行心臟超聲檢查，檢測項(xiàng)目包括LVM、LVIDd、IVSd、LVPWd，每只大鼠均取3個(gè)心動(dòng)周期進(jìn)行測量，取平均值。每組檢測3只。

1.6.2 標(biāo)本取材 末次給藥結(jié)束后，大鼠禁食不禁水12 h后取材。大鼠稱重并記錄體質(zhì)量（BW），2%的戊巴比妥鈉（40 mg/kg）腹腔注射，麻醉滿意后固定，胸腹部脫毛，75%酒精消毒皮膚，暴露腹腔，以一次性采血針行腹主動(dòng)脈取血8～10 mL，離心，吸取上層血清，分裝置于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6.3 各組大鼠心臟質(zhì)量指數(shù)檢測 腹主動(dòng)脈取血結(jié)束后，迅速開胸取出心臟，用預(yù)冷的生理鹽水沖洗干凈殘余血液，濾紙吸干水分后，用微型電子天平稱取心臟質(zhì)量（HW），并結(jié)合BW計(jì)算心臟質(zhì)量指數(shù)（HMI）：HMI=HW/BW，評(píng)估心肌肥厚程度。

1.6.4 血清Ang II檢測 利用ELISA試劑盒檢測血清Ang II水平，按照上海源葉生物科技有限公司提供的試劑盒說明書進(jìn)行操作。每組檢測6只。

1.6.5 氧化應(yīng)激指標(biāo)檢測 利用生化試劑盒檢測血清脂質(zhì)過氧化物MDA及抗氧化酶（CAT、Mn-SOD、GSHPx）水平，分別按照南京建成生物工程研究所提供的試劑盒說明書進(jìn)行操作。每組檢測6只。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究采用Excel進(jìn)行數(shù)據(jù)整理，采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。計(jì)量資料符合正態(tài)分布及方差齊性時(shí)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多樣本均數(shù)比較采用One-Way ANOVA及SNK多重比較。以P＜0.05為差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較 見表1。

表1 各組大鼠超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較（±s，n=3）

表1 各組大鼠超聲心動(dòng)圖指標(biāo)比較（±s，n=3）

注：與正常血壓組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與高血壓組比較，△△P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

2.2 各組大鼠心臟質(zhì)量/體質(zhì)量（HW/BW）數(shù)值比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠HW/BW數(shù)值分別為（3.27±0.72）mg/g、（3.70±0.23）mg/g、（4.04±0.17）mg/g、（3.45±0.09）mg/g、（3.48±0.13）mg/g。高血壓組與模型組大鼠的HW/BW值均明顯高于正常血壓組水平（P＜0.05或P＜0.01）；模型組HW/BW值高于高血壓組水平（P＜0.05）；藥物干預(yù)后，纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的HW/BW值均明顯低于模型組（P＜0.01）。

2.3 各組大鼠血清Ang Ⅱ水平比較 正常血壓組、高血壓組、模型組、纈沙坦組、活血潛陽祛痰方組大鼠血清Ang Ⅱ含量分別為（112.23±14.17）pg/mL、（263.29±26.20）pg/mL、（378.58±33.84）pg/mL、（340.67±31.06）pg/mL、（335.65±34.05）pg/mL。高血壓組與模型組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均明顯高于正常血壓組（P＜0.01）；模型組血清Ang Ⅱ水平明顯高于高血壓組（P＜0.01）；藥物干預(yù)后，纈沙坦組與活血潛陽祛痰方組大鼠的血清Ang Ⅱ水平均低于模型組（P＜0.05）。

2.4 各組大鼠氧化應(yīng)激指標(biāo)MDA、CAT、Mn-SOD、GSH-Px水平比較 見表2。

表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標(biāo)比較（±s，n=6）

表2 各組大鼠血清MDA及抗氧化酶指標(biāo)比較（±s，n=6）

注：與正常血壓組比較，# P＜0.05，## P＜0.01；與高血壓組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

3 討論

心臟重塑是指由心臟負(fù)荷或損傷引起的心臟大小、形狀、成分和功能的改變，心肌肥厚是其重要表現(xiàn)之一[11]。肥胖會(huì)引起心臟形態(tài)與功能的改變，肥胖與高血壓對(duì)心肌肥厚產(chǎn)生交互、疊加作用，肥胖增加高血壓發(fā)生心肌肥厚的風(fēng)險(xiǎn)[12-13]。研究[14]報(bào)道，SHR是研究人類高血壓心肌肥厚的經(jīng)典模型。本研究中，SHR的HW/BW、LVM、IVSd、LVPWd較正常血壓大鼠WKY升高，LVIDd有下降趨勢，表現(xiàn)出向心性心肌肥厚，且高脂飲食喂養(yǎng)構(gòu)建的肥胖高血壓大鼠心肌肥厚更加明顯?；钛獫撽栰钐捣礁深A(yù)10周后可明顯改善肥胖高血壓大鼠心肌肥厚。

肥胖高血壓多合并代謝綜合征，歐洲高血壓指南推薦其降壓治療應(yīng)以阻斷腎素—血管緊張素—醛固酮系統(tǒng)為首選方案[15]。腎素—血管緊張素系統(tǒng)的過度激活在肥胖相關(guān)的心肌肥厚中發(fā)揮重要作用[16]，AngⅡ的產(chǎn)生是SHR早期心肌肥厚發(fā)生發(fā)展的重要機(jī)制[17-18]。本研究中，肥胖高血壓大鼠循環(huán)AngⅡ含量明顯升高，活血潛陽祛痰方治療后可有效降低血清AngⅡ含量，改善肥胖高血壓心肌肥厚。活性氧的合成與抗氧化防御系統(tǒng)對(duì)活性氧的清除之間的不平衡，會(huì)誘發(fā)氧化應(yīng)激，其在心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展過程中起到重要作用[19-20]。證據(jù)表明，AngⅡ參與了SHR模型中活性氧介導(dǎo)的氧化應(yīng)激的發(fā)生[21]，病理?xiàng)l件下，活性氧增加可能是AngⅡ引起心肌肥大的潛在機(jī)制，其可通過傳遞AngⅡ等細(xì)胞外信號(hào)，進(jìn)而激活下游肥大信號(hào)激酶和轉(zhuǎn)錄因子引起心肌肥厚[22]。本研究發(fā)現(xiàn)，肥胖高血壓大鼠表現(xiàn)出更高的氧化應(yīng)激狀態(tài)，活血潛陽祛痰方可通過降低血清MDA含量以及提高CAT活力、Mn-SOD含量來改善其氧化應(yīng)激水平。

符德玉教授認(rèn)為“陽亢、痰濁、血瘀”是肥胖高血壓及其靶器官損害的主要病理因素，并在此基礎(chǔ)上總結(jié)出活血潛陽祛痰方共奏平肝潛陽、祛痰化濕、活血化瘀之功，臨床中已取得顯著療效。本研究中，活血潛陽祛痰方可抑制肥胖高血壓大鼠心肌肥厚，具有靶器官保護(hù)作用。其作用機(jī)制與降低血清Ang II含量，降低脂質(zhì)過氧化物MDA、升高抗氧化酶CAT活力、提高M(jìn)n-SOD含量從而降低氧化應(yīng)激水平有關(guān)，但分子作用機(jī)制尚需要深入研究。