付晗，崔世紅，劉靈，陳娟，孟潔，閆書(shū)君，綦月，劉貝貝，汪田田

（鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州）

0 引言

重度子癇前期（sPE）常伴有嚴(yán)重的并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅母嬰生命健康，但其病因及發(fā)病機(jī)制尚不明確。目前普遍認(rèn)為胎盤(pán)缺血缺氧是子癇前期發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[1,2]。甘油-3-磷酸脫氫酶-1-樣（GPD1L是新發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)控細(xì)胞的增殖分化、新生血管的形成、能量的產(chǎn)生及免疫應(yīng)答的生物學(xué)功能，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)低氧環(huán)境的適應(yīng)[3,4]。因此本文主要通過(guò)檢測(cè)GPD1L在重度子癇前期胎盤(pán)組織中的表達(dá)情況，分析其在重度子癇前期中的發(fā)病機(jī)制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年3月至2019年3月在鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院并分娩的孕婦100例，其中50例為患有重度子癇前期的孕婦，即實(shí)驗(yàn)組；50例產(chǎn)前檢查正常的健康孕婦，即為對(duì)照組。同時(shí)為排除年齡的影響，兩組孕婦的年齡控制在2歲以?xún)?nèi)。排除標(biāo)準(zhǔn)：自身免疫性疾病、嚴(yán)重炎癥、慢性肝腎心功能不全、慢性高血壓、妊娠期高血壓病史及其它產(chǎn)科合并癥或并發(fā)癥者等。重度子癇前期的診斷標(biāo)準(zhǔn)均符合《婦產(chǎn)科學(xué)》第9版[5]。同時(shí)對(duì)兩組孕婦的年齡、孕周、收縮壓、舒張壓等基本數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。本研究經(jīng)鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

胎盤(pán)娩出后5分鐘內(nèi)在母體面4個(gè)象限的中央部位避免出血、梗死及鈣化灶等異常組織各取1塊約1 cm3大小的胎盤(pán)組織，其中取任意兩塊組織經(jīng)石蠟包埋后編號(hào)；另兩塊組織經(jīng)過(guò)清洗編號(hào)后保存于-80℃冰箱。

（1）免疫組化法檢測(cè)胎盤(pán)組織中GPD1L蛋白的表達(dá)情況 將標(biāo)本制成切片后經(jīng)過(guò)一系列的脫蠟、水化，抗原高溫修復(fù)等一系列操作步驟。采用盲法由2名副主任醫(yī)師以上的病理科醫(yī)生在光學(xué)顯微鏡（400倍）下觀察免疫組化染色后的組織并評(píng)分。陽(yáng)性細(xì)胞判斷標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)細(xì)胞質(zhì)染色情況和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)來(lái)判定蛋白的表達(dá)情況；即染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)+陽(yáng)性細(xì)胞百分比≥2分為陽(yáng)性，染色強(qiáng)度分?jǐn)?shù)+陽(yáng)性細(xì)胞百分比＜2分為陰性。

（2）實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)胎盤(pán)組織中GPD1L mRNA的表達(dá) 提取胎盤(pán)組織中的總RNA，進(jìn)過(guò)一系列的沉淀洗滌干燥等操作步驟后測(cè)RNA濃度和純度。GPD1L mRNA的上 游 引 物：5’-TCGTTAGTTGTCAGAATA-3’，下 游 引 物：5’-TGTTAATCAGAAGAATGTG-3’；擴(kuò)張反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min；95℃變性30 s；58℃退火；72℃延伸30 s；40個(gè)循環(huán)。采用2-ΔΔCt法計(jì)算兩組胎盤(pán)組織中GPD1L mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 21.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。正態(tài)分布的計(jì)量數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用百分比表示；P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況

2組孕婦的年齡控制在2歲以?xún)?nèi)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；孕周、收縮壓及舒張壓、孕次及產(chǎn)次比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1）。

表1 兩組孕婦一般情況比較

表1 兩組孕婦一般情況比較

組別 n 年齡（歲） 孕周（天） 收縮壓（mmHg） 舒張壓（mmHg） 孕次 產(chǎn)次實(shí)驗(yàn)組 50 30.480±5.384 230.500±14.967 184.720±19.336 116.920±9.113 2.440±1.013 1.540±6.676對(duì)照組 50 29.440±4.891 276.940±7.665 113.140±7.166 71.280±6.698 1.620±0.923 1.140±0.351 t值 - 1.011 -19.528 24.545 28.535 4.224 3.713 P值 - P＞0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05 P＜0.05

2.2 兩組胎盤(pán)組織中GPD1LmRNA的表達(dá)水平及GPD1L蛋白的陽(yáng)性表達(dá)情況

與對(duì)照組相比，重度子癇前期胎盤(pán)組織中GPD1L mRNA的表達(dá)量明顯低于對(duì)照組（P值＜0.001）；GPD1L蛋白的陽(yáng)性率（66%，P＜0.05），明顯低于對(duì)照組（見(jiàn)表2）。

表2 兩組胎盤(pán)組織中GPD1LmRNA，n=50）

表2 兩組胎盤(pán)組織中GPD1LmRNA，n=50）

images/BZ_13_201_556_1207_615.png實(shí)驗(yàn)組 50 19（38%） 0.439±0.082對(duì)照組 50 33（66%） 1.0061±0.137 t值 - - -25.201 P值 - - ＜0.001

3 討論

重度子癇前期是妊娠期一種特發(fā)性疾病，可導(dǎo)致母體全身多臟器功能受累、胎兒生長(zhǎng)受限、胎兒窘迫、早產(chǎn)及死產(chǎn)等不良結(jié)局，是母嬰患病率及死亡率死率升高的主要原因之一[6,7]。目前普遍認(rèn)為子癇前期是一種多因素、多機(jī)制及多通路致病的疾病，其中胎盤(pán)功能受損導(dǎo)致的胎盤(pán)缺血缺氧是子癇前期發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[5]。因此，參與胎盤(pán)在低氧環(huán)境下調(diào)解的缺氧因子是目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究熱點(diǎn)之一。

人類(lèi)的GPD1L基因位于3p22.3染色體上，其編碼的由351個(gè)氨基酸組成的蛋白質(zhì)與GPD有同源性，故二者具有相似的生物學(xué)功能[8,9]。研究表明，GPD蛋白參與磷酸甘油穿梭，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖凋亡、新生血管的形成、滲透調(diào)節(jié)及影響能量的產(chǎn)生等功能[10,11]。

Kelly等研究表明[12]，GPD1L蛋白參與調(diào)節(jié)HIF-1a蛋白的降解過(guò)程，而在低氧條件下，這一調(diào)節(jié)作用被抑制導(dǎo)致HIF-1a蛋白大量累積參與細(xì)胞對(duì)缺氧環(huán)境的適應(yīng)。馮芝恩等[13]研究證實(shí)，GPD1L在腫瘤細(xì)胞中同樣具有調(diào)節(jié)HIF-1a的作用進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞增殖分化及凋亡。目前大量研究證實(shí)[14-19]，HIF-1a參與子癇前期相關(guān)的低氧反應(yīng)基因表達(dá)調(diào)節(jié)，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）及其受體（sFlt-1）、胎盤(pán)生長(zhǎng)因子（PIGF）、腫瘤壞死因子、及內(nèi)皮素-1（ET-1）等，進(jìn)而影響子癇前期胎盤(pán)新生血管的形成及滋養(yǎng)細(xì)胞的增殖與分化能力。因此可以推測(cè)，GPD1L參與細(xì)胞及機(jī)體的低氧應(yīng)答調(diào)控。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，在重度子癇前期患者胎盤(pán)組織中GPD1L mRNA低表達(dá)且GPD1L蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率明顯降低，說(shuō)明胎盤(pán)處于缺氧狀態(tài)及GPD1L參與重度子癇前期胎盤(pán)的低氧應(yīng)答調(diào)控。

因此，本研究說(shuō)明GPD1L可能參與重度子癇前期的發(fā)生發(fā)展過(guò)程，但其具體機(jī)制尚需進(jìn)一步探索及大樣本數(shù)據(jù)的支持。但本研究為重度子癇前的未來(lái)提供一個(gè)新的思路。