王東旭， 吳佳遙， 梁鵬志， 李留安， 焦小麗

（天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津市農(nóng)業(yè)動(dòng)物繁育與健康養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津西青300384）

黃曲霉毒素（AFT）是由產(chǎn)曲霉菌屬真菌在經(jīng)過次生代謝而產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，其中黃曲霉毒素B1（AFB1）的毒性及致癌性最強(qiáng)，損害波及到肝臟組織以及機(jī)體正常的新陳代謝，嚴(yán)重情況下可導(dǎo)致死亡（Falade 等，2018）。 人與家畜長(zhǎng)時(shí)間食用受AFB1污染的種子或其他植物部分后會(huì)產(chǎn)生毒素積累，造成機(jī)體肝臟損害、致畸缺陷、免疫抑制、幼畜發(fā)育遲緩、認(rèn)知能力降低等，AFB1還會(huì)引發(fā)人類產(chǎn)生曲霉病（馬洪青，2017；Majumdar 等，2017）。

酵母細(xì)胞壁是具有生物活性的酵母菌經(jīng)過特殊處理獲得的產(chǎn)品， 發(fā)揮主要功能的是酵母細(xì)胞壁多糖，其是一種高效的免疫增強(qiáng)劑，主要成分包括相對(duì)分子質(zhì)量為2000 ～20000 的甘露聚糖（MOS） 及由10 ～20 個(gè)單糖組成特異型結(jié)構(gòu)的β-葡聚糖。 主要作用有提升免疫力、調(diào)節(jié)腸胃環(huán)境、吸附霉菌毒素等（Tiwari 等，2018）。

紫外線（UV）照射是常見的低廉而高效的殺毒滅菌物理方法。 紫外線對(duì)AFB1有著明顯的脫毒效果， 隨紫外線強(qiáng)度的增加， 脫毒效果越顯著（呂濟(jì)敏等，2013）。 紫外線滅菌范圍廣泛，在滅活A(yù)FB1的同時(shí)，也能殺滅其他有害病菌（梁劍鋒等，2017）。 但紫外線照射與酵母細(xì)胞壁共同作用對(duì)AFB1的脫毒效果鮮見報(bào)道，本試驗(yàn)旨在探討酵母細(xì)胞壁以及酵母細(xì)胞壁與紫外線共同作用對(duì)玉米AFB1的脫毒效果，為AFB1脫毒提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)樣品 發(fā)霉玉米采自天津郊區(qū)某農(nóng)戶，經(jīng)過粉碎后混合均勻，使95%以上的玉米粉通過20 目篩，通過酶聯(lián)免疫法（ELISA）檢測(cè)AFB1的含量為（34.22±3.40）μg/kg。

1.2 主要試劑 釀酒酵母細(xì)胞壁由山東省圣琪有限公司生產(chǎn)；AgraQuant○RAFB1檢測(cè)試劑盒為Romer Labs 產(chǎn)品；分析級(jí)甲醇采自天津永大有限公司。

1.3 儀器和設(shè)備 CMax Plus 酶標(biāo)儀 （型號(hào)為SpectraMax○RAbsorbance Reader）為Molecular Devices 公司產(chǎn)品，紫外線燈（UVD，185 nm）為奧萊蒂燈飾有限公司生產(chǎn)，Eppendorf 移液槍（型號(hào)為20 ～200 μL），振蕩器（型號(hào)為EMS—18C），電子天平（型號(hào)為AX224ZH/E）購(gòu)自奧豪斯儀器有限公司， 烘干箱購(gòu)自上海一恒科學(xué)儀器有限公司，Whatman#1 濾紙、槍頭、密封袋等購(gòu)自天津晟佰昊生物技術(shù)有限公司。

1.4 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 采用單因素設(shè)計(jì)分為10 組，1 個(gè)空白對(duì)照組，9 個(gè)處理組分別為每5 g 發(fā)霉玉米中添加2、1、0.5、0.1 g 酵母細(xì)胞壁組，上述4 個(gè)處理均置于紫外線照射組， 以及沒有添加酵母細(xì)胞壁僅紫外線照射組，每組設(shè)4 個(gè)重復(fù)。加入不同量酵母細(xì)胞壁后各處理組均加入20 mL 蒸餾水充分混勻，在通風(fēng)室溫條件下放置3 d。 紫外線為真空紫外線，波長(zhǎng)為185 nm。

1.5 試驗(yàn)方法 采用GB/T 17480-2008《飼料中黃曲霉毒素B1的測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附法》測(cè)定玉米中AFB1的含量， 參照AgraQuant○RAFB1試劑盒說明書檢測(cè)各處理組玉米AFB1的含量，最低檢出濃度為2 μg/kg。 精確稱取5 g 玉米粉樣品于250 mL 錐形瓶中，添加不同量的酵母細(xì)胞壁（2、1、0.5、0.1 g），同時(shí)紫外線照射組額外架設(shè)輻射均勻且同等強(qiáng)度的紫外線。 室溫下3 d 后將所有處理組放置烘干箱絕干后取出。 每份樣品中加入70%甲醇25 mL，使用均質(zhì)器均置3 min 后，Whatman#1 濾紙過濾得到濾液，收集足夠?yàn)V液待檢。

1.6 脫毒率計(jì)算

式中：a 為空白組玉米粉中AFB1的含量，b為各處理組玉米粉中AFB1的含量。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 使用SPSS 20.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用單因素ANOVA 方差分析和Duncan’s 檢驗(yàn)各組間差異顯著性，P ＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 酵母細(xì)胞壁不同添加量對(duì)AFB1的脫毒率比較 如表1 所示， 不同添加量酵母細(xì)胞壁均對(duì)AFB1含量有影響，1 g 酵母細(xì)胞壁組脫毒率最高，但各組間差異不顯著（P ＞0.05）。

2.2 紫外線條件下添加和不添加酵母細(xì)胞壁對(duì)AFB1的脫毒率比較 如表2 所示，不同量酵母細(xì)胞壁同時(shí)經(jīng)紫外線照射均對(duì)AFB1含量有影響，1 g酵母細(xì)胞壁紫外線照射組脫毒率最高， 但各組間差異不顯著（P ＞0.05），此外，經(jīng)紫外線照射后4個(gè)添加酵母細(xì)胞壁處理組脫毒率均有所降低。

表1 不同添加量酵母細(xì)胞壁對(duì)AFB1 脫毒率的比較%

表2 不同添加量酵母細(xì)胞壁在紫外線條件下對(duì)AFB1 脫毒率的比較%

2.3 不同處理組間AFB1的脫毒率比較 如表3可知，添加1 g 酵母細(xì)胞壁AFB1的脫毒率最高為（29.25±2.22）%，顯著高于添加酵母細(xì)胞壁經(jīng)紫外線照射組以及僅紫外線照射組（P ＜0.05）。 添加2 g 和1 g 酵母細(xì)胞壁同時(shí)紫外線照射組脫毒率雖高于未添加酵母細(xì)胞壁紫外線照射組， 但各組間差異不顯著（P ＞0.05）。

表3 不同試驗(yàn)組AFB1 的脫毒率比較%

3 討論與結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明， 各試驗(yàn)組均對(duì)AFB1含量有一定的影響，添加1 g 酵母細(xì)胞壁后對(duì)AFB1含量影響最大，脫毒率為（29.25±2.22）%，但不同酵母細(xì)胞壁添加量脫毒率為14.25% ～29.25%（P ＞0.05）。 靳志強(qiáng)（2018）等研究表明，在體外條件下酵母細(xì)胞壁的脫毒率與其添加量呈現(xiàn)正相關(guān)，隨著添加量的提高， 最高可獲得77%的脫毒率，并且酵母細(xì)胞壁在經(jīng)過改良后，可獲得高達(dá)95%的脫毒率。 本試驗(yàn)酵母細(xì)胞壁對(duì)所有處理組AFB1含量均有一定影響，但脫毒率較低。萬曉莉（2013）研究發(fā)現(xiàn)， 脫毒物質(zhì)及方法在低水平毒素條件下能發(fā)揮更好的脫毒效果，本試驗(yàn)霉變玉米的AFB1含量為（34.22±3.40）μg/kg，遠(yuǎn)超國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)20 μg/kg，試驗(yàn)中酵母細(xì)胞壁對(duì)AFB1含量產(chǎn)生影響，但脫毒率較低，可能與玉米AFB1含量較高有關(guān)。

紫外線能降低AFT 的活性，從而減少毒素代謝， 又能改變AFB1的分子結(jié)構(gòu)， 使其毒性降低（沈祥震，2014）。 試驗(yàn)中僅紫外線照射對(duì)AFB1含量產(chǎn)生影響， 但脫毒率較低， 可能也與玉米樣品AFB1含量較高有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)酵母細(xì)胞壁經(jīng)紫外線照射后脫毒率沒有提高，反而下降。酵母細(xì)胞壁吸附霉菌的特性來源于其表面具有特殊結(jié)構(gòu)的多糖、蛋白質(zhì)以及脂類等分子結(jié)構(gòu)，它們可通過離子鍵、疏水作用、氫鍵等對(duì)毒素進(jìn)行吸附（徐智鵬等，2015）。 酵母細(xì)胞壁在紫外線照射條件下脫毒率降低， 推測(cè)可能與紫外線破壞酵母細(xì)胞壁有效活性成分的分子結(jié)構(gòu)有關(guān)。