魏 磊，趙金良，劉 偉，錢葉周，吳 超，錢 德

(1.上海海洋大學(xué)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部淡水水產(chǎn)種質(zhì)資源重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，水產(chǎn)動(dòng)物遺傳育種中心上海市協(xié)同創(chuàng)新中心，水產(chǎn)科學(xué)國家級實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，上海 201306；2.池州市秋浦特種水產(chǎn)開發(fā)有限公司，安徽池州 247104)

回交是雜交方式之一，是通過雜交子代與輪回親本間再次雜交，從而使得輪回親本一些優(yōu)良性狀在雜交后代中得到穩(wěn)定遺傳，同時(shí)，非輪回親本的一些優(yōu)良性狀也得以保留[1]。回交在魚類雜交中較為廣泛，如云斑尖塘鱧(Oxyeleotrismarmoratus)♂與線紋尖塘鱧(O.lineolatus)♀的雜交子代與云斑尖塘鱧(♂)回交，回交子代的斑紋偏向于云斑尖塘鱧，同時(shí)保留了線紋尖塘鱧生長快、耐粗飼等特性[2]；“易捕鯉”(GS-01-002-2014)即是以[(大頭鯉Cyprinuspellegrini♀×散鱗鏡鯉C.carpioL.mirror♂)♀×(黑龍江鯉C.carpiohaematopterus♀×散鱗鏡鯉♂)♂]后代 ♀與大頭鯉♂回交獲得的子一代群體為基礎(chǔ)群體，再經(jīng)選育獲得的，該回交種棲息于水體中上層，起捕率高[3]?；亟蛔哟袝r(shí)也會(huì)表現(xiàn)出超過輪回親本的性能優(yōu)勢，如用斑點(diǎn)叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)♀與長鰭叉尾鮰(I.furcatus)♂雜交F1，與長鰭叉尾鮰♀回交，回交子代的體重生長性狀明顯超過長鰭叉尾鮰[4]。

鱖是我國傳統(tǒng)的名貴淡水經(jīng)濟(jì)魚類，主要養(yǎng)殖種類有鱖(Sinipercachuatsi)和斑鱖(S.scherzeri)，兩者均為肉食性魚類，但不同種類的外形、生長、餌料系數(shù)等都不相同。目前，已采用斑鱖♀×鱖♂雜交方式獲得了雜交新品種—“秋浦雜交斑鱖(GS 02-005-2014)”，平均體重比斑鱖提高160%以上，餌料系數(shù)降低[5]。而采用斑鱖♂×鱖♀獲得的“長珠雜交鱖(GS 02-003-2016)”，7月齡時(shí)平均體重是斑鱖的3.2倍[6]。鑒于雜交在鱖魚育種上取得了明顯成效，在雜交鱖(斑鱖♀×鱖♂)基礎(chǔ)上，采用回交方式獲得了斑鱖♀×雜交鱖♂回交子代，通過比較其與斑鱖、雜交鱖在早期發(fā)育階段的外形(體斑和體型)、生長和攝食特性，評價(jià)輪回親本與非輪回親本各自性狀的遺傳特征，為鱖雜交育種深入研究提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料

實(shí)驗(yàn)在安徽省池州市秋浦特種水產(chǎn)開發(fā)有限公司進(jìn)行?！扒锲蛛s交斑鱖”(以下簡稱“雜交鱖”)是由斑鱖♀×鱖♂雜交而得，回交子代由斑鱖♀×雜交鱖♂回交而得。2018年4月16日，同時(shí)開展斑鱖、雜交鱖和回交子代繁育。其中，雜交鱖受精卵采用人工授精方式獲得；斑鱖和回交子代受精卵均采用自然受精方式獲得，受精卵放入孵化環(huán)道內(nèi)流水孵化；孵化水溫為15～20 ℃。出膜第5天，仔魚開口，開口餌料魚為剛出膜的鰱、鳙魚苗。開口一周后，再將仔魚從孵化環(huán)道轉(zhuǎn)入水泥池(7 m×8 m×1 m)內(nèi)進(jìn)行培育，餌料魚為鰱、鳙和鯽魚苗。每天早、晚各投喂1次。

1.2 方法

1.2.1 早期體斑和體型

鱖出膜后，回交子代、雜交鱖和斑鱖魚苗每日采樣1次，每次10尾，用解剖鏡觀察色素分布、體斑形成，同時(shí)拍照記錄。觀察時(shí)間為初孵仔魚至斑紋穩(wěn)定期(40-45日齡，不同種魚時(shí)期略有差異)。45日齡，測定三種魚苗頭部隆角(頭后背前與魚體長軸間夾角)、體高/體長指標(biāo)。

1.2.2 生長測量

在魚苗孵化出膜至孵化后45日齡，每日采樣1次，每次10尾，用游標(biāo)卡尺測量魚苗全長。計(jì)算日均增長率：AGL=(Lt-L0)/D

式中：AGL為全長日均增長率(mm/d)；Lt為測量的末全長；L0為測量的初全長；D為實(shí)驗(yàn)的間隔天數(shù)。

1.2.3 攝食量測定

出膜后20日齡，三種魚苗各取30尾，于20 cm×30 cm×20 cm的水族箱中進(jìn)行飼養(yǎng)，裝有循環(huán)水裝置，定期更換新水，實(shí)驗(yàn)周期為20 d。每天分別在8時(shí)和16時(shí)投喂鰱、鳙餌料魚苗。當(dāng)天上午第一次投喂前，稱量投喂餌料魚質(zhì)量，記為m1；下午第二次投喂餌料魚質(zhì)量，記為m2；第二天上午投喂前，測定剩余餌料魚質(zhì)量，記為m3。每隔5天，各隨機(jī)抽測10尾試驗(yàn)魚苗的質(zhì)量，并進(jìn)行三次重復(fù)，計(jì)算出日均增重率和餌料系數(shù)。

AGW=(Wt-W0)/D×N

DF=(m1+m2-m3)/N×D

FC=3(m1+m2-m3)/(Wt-W0)

式中：AGW為日均增重率(g/d)；Wt為稱量的末體質(zhì)量；W0為稱量的初體質(zhì)量；D為實(shí)驗(yàn)間隔天數(shù)；N為取樣魚的數(shù)目；DF為平均日攝食量(g/d)；m1、m2、m3分別為餌料魚的質(zhì)量；FC(Feed Coefficient)為餌料系數(shù)。

1.2.4 數(shù)據(jù)處理分析

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用SPSS19.0軟件統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05表示差異顯著。數(shù)據(jù)作圖均采用GraphPad Prism5.0軟件。圖片使用Adobe Photoshop CC 2018處理。

2 結(jié)果與分析

2.1 色素和斑紋比較

如圖1所示，三種魚初孵仔魚黑色素主要分布在卵黃囊上，回交子代和斑鱖背部前段也有少量分布。出膜第2、3天，臀鰭基部位置均出現(xiàn)黑色素。出膜第4天，頭部出現(xiàn)黑色素，回交子代和斑鱖背部前段黑色素分布增多，雜交鱖背部前段開始出現(xiàn)黑色素，且軀干后段中間位置也出現(xiàn)黑色素。出膜第5天，回交子代和斑鱖軀干后段中間位置未見黑色素出現(xiàn)。黃色素主要分布于頭部和卵黃囊，三種魚的黃色素分布差異不明顯。

圖1 回交子代、斑鱖和雜交鱖1-5日齡色素變化Fig.1 Pigment changes of S.scherzeri，backcrossing progeny and hybrid at day1-5

三種魚早期的斑紋形成如圖2所示。11-13日齡，三種魚黑色素分布位置差異不大，未見明顯斑紋；16-18日齡，黑色素除在軀體前半段大量分布外，背鰭硬棘、軟棘基部，臀鰭基部也有分布，軀干后端中間位置分布明顯；23-24日齡，斑紋初步形成，三種魚背部出現(xiàn)5個(gè)黑色鞍狀帶，回交子代和斑鱖軀干后段中間位置出現(xiàn)黑色橫帶，雜交鱖沿背鰭硬棘基部向下出現(xiàn)縱帶；43-45日齡，回交子代和斑鱖體側(cè)斑塊排列緊密，橫向規(guī)則排布，而雜交鱖斑塊較稀疏，排列不規(guī)則。

2.2 頭部隆角、體高/體長比較

如表1所示，45日齡，回交子代、斑鱖和雜交鱖頭部隆角分別為25.48°±0.85°、24.52°±0.65°、29.44°±1.34°，回交子代、斑鱖與雜交鱖差異顯著。三種魚體高/體長值分別為0.26±0.03、0.25±0.09、0.32±0.05，回交子代、斑鱖與雜交鱖差異顯著。

2.3 全長比較

回交子代、斑鱖和雜交鱖初孵仔魚全長分別為(4.24±0.21)、(4.17±0.24)、(4.27±0.32)mm，45日齡全長分別為(78.52±1.55)、(55.51±0.71)、(83.81±1.22)mm?；亟蛔哟喵Z和雜交鱖的日均增長率分別為1.65、1.14、1.78 mm，回交子代、雜交鱖與斑鱖間差異顯著(見表2)。

圖2 回交子代、斑鱖和雜交鱖體斑形成Fig.2 Body spots formation of S.scherzeri，backcrossing progeny and hybrid

表1 45日齡三種魚的頭部隆角、體高/體長值Tab.1 Head ridge angle，body height/body length value of three kinds of fish at 45 days age

注：同行數(shù)字后不同字母代表差異性顯著，下同。

表2 三種魚的初孵全長、45日齡全長和日均增長率比較Tab.2 Comparison of the initial hatching length，45 days age full length and average daily growth rate of the three kinds of fish

2.4 攝食水平比較

如表3所示，回交子代、斑鱖和雜交鱖的日均攝食量分別為(0.217±0.02)、(0.153±0.01)、(0.220±0.04)g，日均增重率分別為(0.067±0.02)、(0.031±0.03)、(0.073±0.06)g，回交子代、斑鱖與雜交鱖的餌料系數(shù)分別為2.99±0.16、4.40±0.22、2.76±0.13?；亟蛔哟碗s交鱖的日均攝食量大于斑鱖的，回交子代和雜交鱖的餌料系數(shù)顯著低于斑鱖的。

表3 三種魚的日均攝食量、日均增重率和餌料系數(shù)比較Tab.3 Comparison of daily food intake,average daily weight rate and feed coefficiontof the three kinds of fish

3 討論

3.1 鱖回交子代體斑和體型

本研究中，出膜1-5日齡，回交子代的黑色素分布與斑鱖類似，與雜交鱖差異明顯；如圖2所示魚體發(fā)育的前兩個(gè)階段中，三種魚差異不明顯，而后兩個(gè)階段差異較明顯?？傊?，回交子代早期色素分布和體斑特征與斑鱖相似?；亟蛔哟捏w斑特征與母本斑鱖相似，這可能是因?yàn)榘喵Z作為輪回親本時(shí)，回交子代的遺傳物質(zhì)組成比例更多來自于斑鱖的緣故[7]，也可能是控制體斑特征的功能基因來源于母本。

在魚類雜交中，雜交子一代的性狀通常處于兩親本的中間狀態(tài)[8]。在鱖魚雜交子一代中，宓國強(qiáng)等[9]研究發(fā)現(xiàn)正交雜交鱖(鱖♀×斑鱖♂)與鱖相似，背部向下出現(xiàn)垂直軀干的條帶，而單建杰[10]研究認(rèn)為反交雜交鱖(斑鱖♀×鱖♂)體側(cè)無垂直條帶，與斑鱖相似，正反雜交子代體側(cè)斑紋呈不規(guī)則分布，體高/體長值分別為：鱖0.36±0.04、斑鱖0.26±0.02、正交子代0.29±0.02、反交子代0.30±0.02，雜交子代體型介于鱖與斑鱖之間，正反交子代間差異不大。本研究中，回交子代頭部隆角和體高/體長值分別為25.48°±0.85°、0.26±0.03，與斑鱖無明顯差異，回交子代較穩(wěn)定遺傳了輪回親本斑鱖的體型特征。

本研究中，斑鱖既作為輪回親本，又作為雜交母本，回交子代表型上偏向斑鱖，除了斑鱖遺傳物質(zhì)組成比例較高外，一定程度上也受母系效應(yīng)影響[11]。

3.2 鱖回交子代早期生長與攝食

在魚類回交育種中，回交子代的生長性能有時(shí)會(huì)接近雜交子一代或子二代，如建鯉[元江鯉♀×荷元鯉(荷包紅鯉♀×元江鯉♂)♂回交子代]與元江鯉生長速度接近，且成活率、起捕率高[12]；薩尼F1(薩羅♀×尼羅♂)♀×尼羅♂回交子代的生長速度與尼羅接近[13]。在本研究中，45日齡，回交子代生長速度略低于雜交鱖，兩者差異不明顯。孫際佳等[14]研究認(rèn)為，在正交子一代中，鱖♀×斑鱖♂雜交種0.3月齡、7月齡和11月齡的生長速度與鱖無顯著差異，雜交子一代遺傳了鱖的快速生長速度；而許淼洋[15]也研究發(fā)現(xiàn)，反交雜交子一代初孵仔魚全長(4.12±0.12)mm介于雙親之間，出膜后0-43日齡，雜交子一代全長日平均增長率為1.10 mm，與鱖1.54 mm較為接近，雜交子一代的早期生長速度偏向于鱖。即正反雜交子代生長均表現(xiàn)偏向生長速度較快的親本。本研究中，在45日齡內(nèi)，回交子代生長速度與雜交鱖接近，回交子代的快速生長性能偏向雜交鱖，這也可能與原始雜交親本鱖(非輪回親本)的生長性能在雜交后代中能穩(wěn)定遺傳有關(guān)[16]。

另外，就三種魚的攝食水平進(jìn)行比較，回交子代與雜交鱖的日均攝食量差異不大。回交子代和雜交鱖的餌料系數(shù)顯著小于斑鱖，餌料系數(shù)反映了魚類對餌料的利用率大小，餌料系數(shù)越小，餌料利用率越大。研究表明，初始體重在10 g左右的鱖、雜交鱖和斑鱖30 d的平均日攝食量分別為(6.1±0.31)、(5.26±0.33)、(4.24±0.23)g，日增重率分別為(1.171±0.180)、(1.019±0.104)和(0.433±0.078)g[17]。在相同的養(yǎng)殖條件下，不同鱖魚的生長速率次序與其攝食量大小次序相對應(yīng)，推測鱖魚的生長快慢與其日均攝食水平間正相關(guān)。

雜交育種中，選擇合適親本與正確配組是育種工作的關(guān)鍵，而在回交育種中，輪回親本選擇對子代性狀有著重要影響[18]。本研究初步分析了鱖魚回交子代早期形態(tài)、生長與攝食量表現(xiàn)，以及性狀遺傳特征，可為今后鱖魚雜交育種中親本選配與預(yù)期效果提供重要參考。