郭 華，刁全平,黃港茵，侯冬巖

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,遼寧 鞍山 114007)

黑果腺肋花楸(Aroniamelanocarpa(Michx.)Elliott)，又名野櫻莓、不老莓，薔薇科，腺肋花楸屬，多年生落葉灌木.全球品種資源達(dá)30余個(gè)，該樹種原產(chǎn)于美國(guó)東北部，歐洲已有100余年的引種栽培歷史,1990年開始引進(jìn)到我國(guó)的東北部地區(qū)[1].黑果腺肋花楸果實(shí)中含有豐富的花青素、黃酮等多酚類化合物，其提取物具有較強(qiáng)的抗氧化能力,對(duì)高血壓、高血糖以及心血管疾病具有很好的療效[2-8].2018年,遼寧富康源黑果花楸科技開發(fā)有限公司申報(bào)的黑果腺肋花楸被國(guó)家衛(wèi)生健康委員會(huì)公布為新食品原料，其食、藥用價(jià)值得到社會(huì)的進(jìn)一步認(rèn)可.本文擬采用超聲波輔助法結(jié)合正交試驗(yàn)提取黑果腺肋花楸中黃酮類化合物并進(jìn)行工藝優(yōu)化[9].

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

黑果腺肋花楸由遼寧富康源黑果花楸科技開發(fā)有限公司提供，冷凍保存，實(shí)驗(yàn)時(shí)取出解凍，用研缽研磨成勻漿，備用.

蘆丁(中國(guó)藥品生物制品檢定所)，其他試劑均為分析純.

Cary 50紫外分光光度計(jì) (美國(guó)Varian公司)；CQX2525-24超聲波清洗器(上海必能信超聲有限公司).

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 最佳吸收波長(zhǎng)的確定 于波長(zhǎng)200～800 nm掃描蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品顯色后和樣品顯色后的吸收曲線，見圖1和圖2,確定503 nm 為測(cè)定最佳吸收波長(zhǎng).

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 準(zhǔn)確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10.0 mg，用70% 乙醇定容至50 mL，標(biāo)樣濃度為0.2 mg/mL.分別吸取待用的標(biāo)樣0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20 mL 至10 mL容量瓶中，加70% 的乙醇至2 mL；加入5% 亞硝酸鈉0.7 mL，搖勻，放置6 min；加入10% 硝酸鋁0.7 mL，搖勻，放置6 min；再加入4% 氫氧化鈉5 mL，用70% 乙醇定容，搖勻靜置30 min，在503 nm處測(cè)定吸光度.以不加蘆丁標(biāo)液作為空白對(duì)照，以蘆丁含量的質(zhì)量濃度作為橫坐標(biāo)，以一定濃度下所對(duì)應(yīng)的吸光度作為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得回歸方程

Y=0.014 2X+0.091 4，r=0.996 9.

1.2.3 黑果腺肋花楸中黃酮類化合物提取及測(cè)定 準(zhǔn)確稱取黑果腺肋花楸勻漿1.0 g，用乙醇溶液溶解后超聲提取，提取結(jié)束后減壓抽濾，用乙醇定容至50 mL容量瓶中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作方法測(cè)定吸光度，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算并換算成樣品中黃酮含量，即為得率.

黃酮得率=提取的黃酮質(zhì)量/黑果腺肋花楸質(zhì)量×100%

圖1 顯色后蘆丁吸收譜圖 圖2 顯色后樣品吸收譜圖

1.2.4 單因素實(shí)驗(yàn) 選取乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間3個(gè)因素進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn).

(1)選取乙醇濃度40%，50%，60%，70%，80%，90%,固定料液比1∶20，提取時(shí)間20 min；

(2)選取料液比1∶10，1∶15，1∶20,1∶25，1∶30，1∶35,固定乙醇濃度60%，提取時(shí)間20 min；

(3)選取提取時(shí)間5,10,15,20,25,30 min，固定乙醇濃度60%，料液比1∶20，按照1.2.3方法提取黑果腺肋花楸中黃酮類化合物，篩選較優(yōu)的單因素范圍.

1.2.5 正交實(shí)驗(yàn) 在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，選用L9(33)正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對(duì)提取條件進(jìn)行優(yōu)化，因素與水平設(shè)計(jì)見表1.

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素與水平

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.1.1乙醇濃度對(duì)黃酮得率的影響 由圖3所示，樣品中黃酮類化合物提取率隨乙醇濃度的增加呈先上升后下降趨勢(shì)，在50%時(shí)黃酮類化合物提取率達(dá)到最大值，下降趨勢(shì)先快后慢.

2.1.2 料液比對(duì)黃酮得率的影響 由圖4所示，不同液料比對(duì)樣品中的黃酮類化合物提取率的影響為先增加后下降，在1∶25處為最大值.

2.1.3 提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響 由圖5可知，不同提取時(shí)間對(duì)樣品中黃酮得率的影響曲線比較平坦，但也呈現(xiàn)先增加后下降趨勢(shì)，在20 min處為最大值.

2.2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析見表2.

圖3 乙醇濃度對(duì)黃酮得率的影響 圖4 液料比對(duì)黃酮得率的影響

圖5 提取時(shí)間對(duì)黃酮得率的影響

由表2得出：樣品中黃酮類化合物提取的最佳提取條件為A1B2C3，即乙醇濃度為40%、料液比為1∶25(g/mL)、提取時(shí)間為25 min；由極差R分析可知，對(duì)樣品中黃酮類化合物提取率影響因素大小為B>A>C，即料液比>乙醇濃度>提取時(shí)間.

2.3 最佳提取條件驗(yàn)證

在最佳提取條件下平行提取5次，結(jié)果如表3所示.

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

由表3可知，樣品中黃酮類化合物的平均提取率為0.166%，且RSD為0.25%，最佳提取條件得到驗(yàn)證.

表3 最佳提取條件驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

3 結(jié)論

本文對(duì)黑果腺肋花楸中黃酮類化合物進(jìn)行超聲提取，并用正交實(shí)驗(yàn)確定了最佳提取工藝條件：乙醇濃度為40%、料液比為1∶25(g/mL)、提取時(shí)間為25 min.實(shí)驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步開發(fā)利用黑果腺肋花楸提供科學(xué)依據(jù).