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        不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛體色及部分免疫指標(biāo)的影響

        2019-03-22 02:23:42孫金輝李家鑫崔培楊燕菁魏東白東清
        湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2019年2期
        關(guān)鍵詞:艷紅胡蘿卜素肝臟

        孫金輝 李家鑫 崔培 楊燕菁 魏東 白東清

        摘要:研究了不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛(Copadichromis trimaculatus)體色以及部分免疫指標(biāo)的影響。試驗(yàn)配制4種飼料,分別為不添加藻粉的基礎(chǔ)組和添加藻粉的鹽藻組、裂壺藻組及小球藻組,添加水平均為1%。將平均體重為(9.39±0.55) g的180尾血艷紅慈鯛,隨機(jī)分為4組,每組3次重復(fù),每次重復(fù)設(shè)置15尾魚(yú),進(jìn)行為期45 d的攝食生長(zhǎng)試驗(yàn)。結(jié)果表明,鹽藻組皮膚和鰭條中總類(lèi)胡蘿卜素含量顯著高于其他3組(P<0.05),裂壺藻組對(duì)血艷紅慈鯛體表a*的增加有著明顯的促進(jìn)作用(P<0.05)。鹽藻組可顯著提高血艷紅慈鯛肝臟中的酸性磷酸酶(AKP)、堿性磷酸酶(ACP)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)的活性(P<0.05),而各組試驗(yàn)魚(yú)血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)的活性均無(wú)顯著差異,空白組含量較高。鹽藻組和裂壺藻組對(duì)血艷紅慈鯛體色有著明顯的改善作用,鹽藻組可提高其肝臟的免疫機(jī)能。

        關(guān)鍵詞:血艷紅慈鯛(Copadichromis trimaculatus);體表著色;免疫指標(biāo)

        中圖分類(lèi)號(hào):S9? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

        文章編號(hào):0439-8114(2019)02-0100-04

        DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.02.022? ? ? ? ? ?開(kāi)放科學(xué)(資源服務(wù))標(biāo)識(shí)碼(OSID):

        血艷紅慈鯛(Copadichromis trimaculatus)為馬拉維湖特有的巖棲類(lèi)慈鯛,因其體表鮮艷的血紅色和較高的懷卵量,得到大多數(shù)觀賞魚(yú)養(yǎng)殖者的青睞。國(guó)內(nèi)經(jīng)多代繁殖的慈鯛品質(zhì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象,原生態(tài)環(huán)境與養(yǎng)殖環(huán)境的差異也導(dǎo)致了其體色暗淡,降低其觀賞及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。如何維持慈鯛的良好品質(zhì),已成為養(yǎng)殖過(guò)程中一個(gè)普遍性問(wèn)題。

        除環(huán)境和基因外,改變飼料的營(yíng)養(yǎng)成分在一定程度上也可重新展現(xiàn)慈鯛的美麗[1],而在飼料中添加著色劑也是改變魚(yú)類(lèi)體色的一種有效方式,可以提高其觀賞價(jià)值。目前,將微藻作為飼料添加劑來(lái)提高魚(yú)的生長(zhǎng)性能及控制體色方面已有諸多研究[2],但對(duì)于血艷紅慈鯛的研究還未見(jiàn)報(bào)道。微藻中含有各種多糖和大量的天然色素[3],已有研究表明微藻多糖可增強(qiáng)免疫力、具有抗病毒抗炎等多種功效[4]。藻類(lèi)對(duì)于提高水生動(dòng)物的生長(zhǎng)、免疫力以及增強(qiáng)其體色都具有重要意義[5]。

        本研究通過(guò)在飼料中添加鹽藻、裂壺藻及小球藻探究其對(duì)血艷紅慈鯛體色及部分免疫指標(biāo)的影響,旨在為血艷紅慈鯛增色餌料的研制和開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù),提高血艷紅慈鯛的觀賞價(jià)值。

        1? 材料與方法

        1.1? 試驗(yàn)用魚(yú)及飼養(yǎng)管理

        本試驗(yàn)選擇3月齡血艷紅慈鯛(9.39±0.55) g為試驗(yàn)對(duì)象,分別投喂添加1%的鹽藻、1%的裂壺藻、1%的小球藻以及不添加藻粉的4組試驗(yàn)飼料,每個(gè)試驗(yàn)組下設(shè)置3個(gè)平行,每個(gè)平行喂養(yǎng)15尾血艷紅慈鯛,以Diet1-Diet4分別表示對(duì)照組、鹽藻組、裂壺藻組、小球藻組,養(yǎng)殖期內(nèi)水溫控制在(26±0.5) ℃,pH為7.8±0.2,投餌率3%,每天9:00和15:30投喂,試驗(yàn)持續(xù)養(yǎng)殖45 d。

        1.2? 樣本采集

        在試驗(yàn)過(guò)程中,每15 d取樣1次,取樣前各試驗(yàn)組血艷紅慈鯛禁食24 h,每重復(fù)組取10尾魚(yú),使用色彩色差儀測(cè)定其體色,對(duì)魚(yú)進(jìn)行尾靜脈取血(每重復(fù)組選出2尾用不含有抗凝劑的針管取血),離心(4 000 r/min ,5 min,4 ℃),取上清并于-80 ℃保存。取皮膚(測(cè)線以上)、尾鰭、胸鰭,取肝臟和腸速凍,-80 ℃保存,待測(cè)酶活力。

        1.3? 總類(lèi)胡蘿卜素測(cè)定

        用電子分析天平準(zhǔn)確分別稱(chēng)取皮膚(帶鱗片)、鰭(背鰭、尾鰭、臀鰭)、肌肉0.1 g,置于5 mL離心管中,用丙酮定容至5 mL,放入超聲波清洗機(jī)低溫超聲波振蕩45 min后取出,以4 000 r/min離心10 min,4 ℃靜置24 h。將所得的色素萃取液分別置于1 cm比色皿中,以丙酮為空白對(duì)照管(比色皿加蓋以防止丙酮揮發(fā),影響比色效果),用Thermo Spectronic UVmini-1240型紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描,找出最大吸收峰處的波長(zhǎng)(448 nm),在該波長(zhǎng)下測(cè)定各組色素萃取液的吸光度??傤?lèi)胡蘿卜素含量(mg/kg)=(A×K×V)/(E×G),其中,E為摩爾消光系數(shù)(2 500),G為樣品質(zhì)量(g),A為吸光度,K為常數(shù)(104),V為提取液體積(mL)。

        1.4? 體表色差值的測(cè)定

        分別在試驗(yàn)開(kāi)始前、第15天、第30天和結(jié)束時(shí)測(cè)定試驗(yàn)魚(yú)體表色差值,用紗布將魚(yú)體表面的水分吸干,將色差儀的探頭垂直緊貼于魚(yú)體背鰭和測(cè)線間部位測(cè)定各試驗(yàn)魚(yú)體表亮度值L*、紅度值a*、黃度值b*。

        1.5? 生化指標(biāo)測(cè)定

        第45天時(shí),對(duì)試驗(yàn)魚(yú)進(jìn)行尾靜脈取血(每重復(fù)組選出6尾用不含有抗凝劑的針管取血),離心(4 000 r/min,5 min,4 ℃),取肝臟和腸速凍,-80 ℃保存,待測(cè)酶活力。樣品解凍后用預(yù)冷的生理鹽水清洗干凈并用濾紙吸干后稱(chēng)重。在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗,除去血液,濾紙拭干,將組織塊和預(yù)冷勻漿介質(zhì)(0.85%的氯化鈉注射液)按1∶9混合,在勻漿器中進(jìn)行勻漿,4 ℃下4 000 r/min離心15 min,取上清液備用。采用丙谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒測(cè)定血艷紅的肝臟、血清;采用酸性磷酸酶(ACP)試劑盒、堿性磷酸酶(AKP)試劑盒測(cè)定血艷紅的腸、肝臟、血清。

        1.6? 數(shù)據(jù)分析

        數(shù)據(jù)使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 18.0進(jìn)行單因素方差分析(One-way ANOVA),差異顯著時(shí)進(jìn)行鄧肯多重比較(Duncans multiple range tests),P<0.05表示差異顯著。

        2? 結(jié)果與分析

        2.1? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素含量的影響

        添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素含量的影響見(jiàn)表1。由表1可知,血艷紅慈鯛皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素的含量在第15天和第30天時(shí)各試驗(yàn)組無(wú)顯著性差異,第45天時(shí),鹽藻組皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素含量顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組和小球藻組。

        2.2? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛鰭條中總類(lèi)胡蘿卜素含量的影響

        添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛鰭條中總類(lèi)胡蘿卜素含量的影響見(jiàn)表2。由表2可知,血艷紅鰭條中總類(lèi)胡蘿卜素的含量,在第15天和第30天時(shí)各試驗(yàn)組無(wú)顯著性差異,第45天時(shí),添加藻粉組顯著高于對(duì)照組。

        2.3? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛 L*值的影響

        各試驗(yàn)組血艷紅慈鯛L*值(表3)無(wú)顯著性差異,整體呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)。

        2.4? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛a*值的影響

        添加不同藻源組血艷紅慈鯛a*大致呈上升趨勢(shì)(表4),其中第15天時(shí),裂壺藻組a*顯著高于小球藻組,與對(duì)照組和鹽藻組無(wú)顯著性差異;第30天時(shí),裂壺藻組顯著高于小球藻組、對(duì)照組與鹽藻組無(wú)顯著性差異;第45天時(shí),裂壺藻組顯著高于其他3組。

        2.5? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛腸道生化指標(biāo)的影響

        添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛腸道ACP、AKP活性的影響見(jiàn)表5,其中Diet 1、Diet 2、Diet 4組腸道的ACP活性顯著高于Diet 3組(P<0.05),AKP活性Diet 4組顯著高于Diet 3組(P<0.05)。

        2.6? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛肝臟生化指標(biāo)的影響

        添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛肝臟ACP、AKP、GOT、GPT活性的影響見(jiàn)表6。其中,Diet 2組肝臟的ACP活性和GPT活性都顯著高于Diet 1、Diet 3和Diet 4組(P<0.05),AKP活性顯著高于Diet 4,與Diet 1、Diet 3無(wú)顯著性差異(P>0.05),GOT活性與其他各組無(wú)顯著性差異。

        2.7? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛血清生化指標(biāo)的影響

        添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性的影響見(jiàn)表7,血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性各試驗(yàn)組組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒(méi)有顯著差異(P>0.05),但對(duì)照組的ACP、AKP、GOT、GPT活性都要高于添加不同藻源。

        3? 討論

        3.1? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚、鰭條、肌肉中總類(lèi)胡蘿卜素含量的影響

        類(lèi)胡蘿卜素是一種脂溶性色素,魚(yú)體表由黃到紅的顏色都是由其決定的[6],而魚(yú)體自身又不能合成類(lèi)胡蘿卜素只能將從食物中獲取的類(lèi)胡蘿卜素將其沉積或轉(zhuǎn)化為自身所需的類(lèi)胡蘿卜素。β-胡蘿卜素是鹽藻中類(lèi)胡蘿卜素的主要組成部分[7],本試驗(yàn)中,第45天時(shí),鹽藻組慈鯛皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素的含量要顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組和小球藻組,添加藻粉后各組鰭條中總類(lèi)胡蘿卜素的含量均顯著高于對(duì)照組(P<0.05),這表明鹽藻中的類(lèi)胡蘿卜素經(jīng)過(guò)代謝能夠在血艷紅慈鯛體內(nèi)得到有效轉(zhuǎn)化,從而起到增色效果,這與楊育凱等[8]和方珍珍等[9]研究相符,說(shuō)明3種藻粉對(duì)于血艷紅均有一定增色效果,其中鹽藻的增色效果最好。

        3.2? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛L*、a*、b*的影響

        一般情況下,對(duì)血艷紅慈鯛的體表紅色是用肉眼來(lái)進(jìn)行識(shí)別的,但當(dāng)其紅色差別不大時(shí),很難有一個(gè)準(zhǔn)確的評(píng)判,為了建立更好的分色評(píng)判系統(tǒng),在測(cè)定血艷紅慈鯛皮膚、鰭條和肌肉中類(lèi)蘿卜素的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步對(duì)其體表紅質(zhì)L*、a*、b*數(shù)值做了相關(guān)測(cè)定。在姜志強(qiáng)等[10]和崔培等[11]對(duì)錦鯉的研究中發(fā)現(xiàn),以螺旋藻和蝦青素為著色劑,對(duì)錦鯉魚(yú)體表紅度a*值的增加都表現(xiàn)出了較好的效果。血艷紅作為觀賞魚(yú)的一種,通常考察的是其紅度值和亮度值,本試驗(yàn)裂壺藻組對(duì)血艷紅體色表現(xiàn)出較好的促進(jìn)作用,可能與其含有大量的DHA有關(guān),宋建婷等[12]研究表明,類(lèi)胡蘿卜素作為一種脂溶性色素,必須以脂類(lèi)為載體運(yùn)輸和吸收利用,若脂類(lèi)含量不足,會(huì)影響到魚(yú)體消化道對(duì)飼料原料中類(lèi)胡蘿卜素的吸收。只有保證有足夠量的飼料油脂含量,才可有效保障魚(yú)體對(duì)飼料中的色素物質(zhì)的吸收。

        3.3? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛ACP和AKP活力的影響

        ACP和AKP 在各種生物體內(nèi)都大量存在,一方面其在體內(nèi)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、運(yùn)輸中起著關(guān)鍵作用,另一方面還參與對(duì)磷酸酯進(jìn)行水解,在機(jī)體消化代謝中起著關(guān)鍵作用[13],同時(shí)還具有機(jī)體防御、免疫調(diào)節(jié)和很強(qiáng)的解毒效果[14],作為溶菌酶的重要組成,其通過(guò)自身的水解作用清除體內(nèi)異物[15],它們的活性在一定水平上可以反映整個(gè)機(jī)體的免疫情況。黃亮華等[16]的研究表明裂壺藻能提高刺參的免疫機(jī)能。馮偉[17]的研究表明,裂壺藻可以提高對(duì)蝦的免疫機(jī)能,在飼料中添加1%鹽藻可顯著提高血艷紅肝臟中的AKP和ACP活性(P<0.05),說(shuō)明鹽藻具有提高血艷紅免疫機(jī)能的作用,這可能與鹽藻含有大量的β-胡蘿卜素有關(guān)。高前欣[18]研究表明類(lèi)胡蘿卜素的抗氧化作用可有效地捕殺動(dòng)物體內(nèi)過(guò)量的活性氧和自由基,提高動(dòng)物的非特異性免疫機(jī)能。

        3.4? 不同藻源對(duì)血艷紅體內(nèi)GOT和GPT活力的影響

        轉(zhuǎn)氨酶是催化氨基酸和酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類(lèi)酶,在生物體組織中普遍存在,GOT和GPT 是其中最重要的兩種,是生命體正常生命活動(dòng)不可缺少的酶,在生物體大多數(shù)物質(zhì)代謝過(guò)程中有著非常重要的作用[19]。正常情況下,GOT和GPT在血清中活性極低,但當(dāng)肝臟細(xì)胞受損或通透性改變后,血清GOT 和GPT的值就會(huì)升高,因此GOT和GPT是肝臟損傷的重要指示酶[19]。本試驗(yàn)中,鹽藻組肝臟中GOT活力與其他各組無(wú)顯著性差異,GPT活性顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組、小球藻組(P<0.05),這表明在飼料中添加一定量的鹽藻可以平衡飼料中氨基酸的含量,使機(jī)體的氨基酸代謝維持在一個(gè)穩(wěn)態(tài),在一定程度上提高了氨基酸的吸收效果,減輕了血艷紅慈鯛肝臟的負(fù)擔(dān)。而3個(gè)藻組血清中GOT和GPT的含量均與對(duì)照組無(wú)顯著差異,說(shuō)明在飼料中添加一定量藻粉對(duì)魚(yú)體肝臟沒(méi)有造成負(fù)影響,這與張燕[20]研究結(jié)果一致。

        4? 結(jié)論

        本試驗(yàn)通過(guò)在飼料中添加3種不同藻粉投喂血艷紅慈鯛,研究結(jié)果表明,①在飼料中添加3種藻粉對(duì)血艷紅慈鯛的生長(zhǎng)沒(méi)有明顯的促進(jìn)作用;②在飼料中添加1%鹽藻能顯著提高血艷紅皮膚中總類(lèi)胡蘿卜素含量,飼料中添加1%裂壺藻能顯著提高血艷紅慈鯛體表紅質(zhì)a*值,說(shuō)明這兩種藻粉具有促進(jìn)血艷紅著色的作用(P<0.05);③在飼料中添加1%鹽藻可顯著提高肝臟中的AKP、ACP和GPT活性(P<0.05),可促進(jìn)魚(yú)體肝臟的代謝機(jī)能;④飼料中添加裂壺藻、鹽藻、小球藻對(duì)血艷紅慈鯛的肝臟不會(huì)產(chǎn)生副作用。

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