□ 李紅麗 吳曉琴 蔡小欽 譚 珊 重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院

當(dāng)前畜牧業(yè)生產(chǎn)的過程中，獸藥在進(jìn)行畜禽疾病的預(yù)防及治療具有重要影響，同時(shí)其合理應(yīng)用對(duì)動(dòng)物性食品品質(zhì)方面也具有有利影響。但是濫用藥物或違規(guī)使用違禁藥物等現(xiàn)象是比較普遍存在的，在獸藥應(yīng)用的時(shí)候，動(dòng)物性食品中藥物殘留的現(xiàn)象對(duì)人類健康及生態(tài)健康等方面都具有比較嚴(yán)重的危害。對(duì)違禁藥物多殘留分析樣品前處理技術(shù)提出更高要求，而使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（LC-MS/MS）分析檢測畜禽肉獸藥殘留的內(nèi)容較多，但有關(guān)多類禁用藥物多殘留檢測的報(bào)道相對(duì)較少，需要進(jìn)一步觀察和研究[1]。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

美國安捷倫公司的Agilent 1200高效液相色譜系統(tǒng)，美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司的API 4000三重四極桿質(zhì)譜儀，上海安普科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)的Anpel Mcx固相萃取小柱等儀器。

對(duì)照品（中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，美國sigma公司），甲醇和乙腈及甲酸（美國Fisher Scientific公司），其中試劑使用分析純。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 樣品處理

在實(shí)驗(yàn)之前需要將豬肉樣本2.0 g樣本放入到50 mL的離心管中，之后加入10 mL的乙酸乙酯，混合1 min之后，以4 500 r/min的速度離心3 min。移取5 mL上清液放入到10 mL刻度管中，在45 ℃的溫度下用氮?dú)饩徛蹈芍?，加? mL的豬肉溶解殘?jiān)瑴u旋1 min。隨后加入1 mL乙腈飽和正己烷渦旋1 min，靜置之后分層處理，之后上機(jī)測試。

1.2.2 色譜條件

色 譜 柱：Waters Cortecs C18色譜，柱溫設(shè)置為40 ℃，進(jìn)樣量為1.0 μL。流動(dòng)相A為0.3%甲酸水溶液，流動(dòng)相B為乙腈；流速為0.3 mL/min。梯度洗脫程序：0～5 min，10%B→60%B；5.00～6.00 min。

1.2.3 質(zhì)譜條件

離子源選用電噴霧離子源正離子模式，將加熱的溫度設(shè)置為400 ℃，脫溶劑管的溫度為250 ℃；干燥氣流速為6 L/min，霧化氣流速設(shè)置為2.5 L/min；加熱氣流速主要顯示為10 L/min，掃描的模式為多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）。

2 結(jié)果與分析

2.1 儀器條件優(yōu)化

質(zhì)譜條件在設(shè)置的時(shí)候，首先對(duì)20種違禁藥物（0.5～10 mg/L）實(shí)施一級(jí)全掃描和子離子掃描處理（見表1），在這一過程中明確藥物所具有的母離子和子離子情況，選取其中干擾比較少的子離子作為定性離子和定量離子。

色譜柱和流動(dòng)相的選擇主要是應(yīng)用Thermo Hybrid Golden C18和10 mmoL/L乙酸銨溶液、0.1%甲酸-乙腈及0.1%甲酸-甲醇3種流動(dòng)相體系對(duì)藥物分離。

2.2 樣品前處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，10%甲醇溶液能溶解豬肉殘?jiān)械乃幬?，其中多?shù)藥物可以很好地保留。

表1 20種藥物的MRM質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)、保留時(shí)間及離子比

凈化處理由于目標(biāo)分析物極性差異明顯，其中的藥物多數(shù)具有弱堿性的特點(diǎn)，因此需要選擇其中非極性的C18。和陽離子交換作用構(gòu)成混合型小柱，對(duì)其實(shí)施富集凈化。本實(shí)驗(yàn)在實(shí)施Anpel MCx小柱凈化處理的過程中，2%甲酸可以進(jìn)行洗滌水溶性雜質(zhì)清除，但甲醇淋洗的過程中多數(shù)激素類的藥物會(huì)出現(xiàn)被洗脫的情況，能夠有效減少洗滌液中的甲醇含量，激素類藥物保留量也會(huì)得以提高，最后選擇其中的10%甲醇溶液作為淋洗液。表1為20種藥物的MRM質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)、保留時(shí)間及離子比。

3 結(jié)論

本研究中構(gòu)建高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中20種違禁藥物殘留的方法，在實(shí)施檢測時(shí)，首先進(jìn)行樣本離心和凈化處理之后，消除豬肉基質(zhì)對(duì)被測成分離子化所產(chǎn)生的干擾現(xiàn)象。與多數(shù)國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)研究中方式和國標(biāo)方法相比，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豬肉中違禁藥物殘留現(xiàn)象的時(shí)候，不需要使用高氯酸沉淀蛋白。這一方式的操作比較簡單，過程準(zhǔn)確靈敏，結(jié)果顯示的速度較快，在豬肉中20種違禁藥物殘留的定量實(shí)施有效測定，最終得到相關(guān)結(jié)論，在具體研究的時(shí)候，液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測方式具有對(duì)違禁物質(zhì)快速監(jiān)測的特點(diǎn)是比較突出的[2]。