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        川牛膝多糖硒酸酯對口蹄疫受免小鼠抗體的影響

        2019-01-05 16:31:32何述輝葉淑均黃楊欽
        中國畜禽種業(yè) 2019年3期
        關(guān)鍵詞:川牛膝佐劑口蹄疫

        何述輝 葉淑均 黃楊欽

        (重慶市渝北區(qū)畜牧水產(chǎn)站 401120)

        口蹄疫病毒是我國強(qiáng)制免疫病種,但口蹄疫疫苗在臨床上免疫效果并不理想。特殊情況下,嚴(yán)格隔離病畜后用中藥治療早期??谔阋呒膊≈斡士蛇_(dá)80%左右,獲得良好的治療效果[1]。中藥或其有效成分作為免疫增強(qiáng)劑配合疫苗免疫能提高疫苗的免疫效果[2,3]。

        1 材料與方法

        1.1 主要藥品和試劑

        川牛膝多糖提?。捍ㄅO?00g、蒸餾水、三氯甲烷、正丁醇、無水乙醇、丙酮。

        川牛膝多糖硒酸酯制備:川牛膝多糖粉末、0.5%HNO3、Na2SeO3、BaCl2、碳酸鈉、pH試紙、無水硫酸鈉、抗壞血酸。

        小鼠體外注射試驗(yàn)佐劑:試驗(yàn)小鼠50只、口蹄疫疫苗、鋁佐劑、硒酸酯多糖佐劑。

        1.2 主要儀器

        低速離心機(jī)(0412-1型):上海手術(shù)器械廠。

        隔水式恒溫培養(yǎng)箱(GHP-9160型):上海齊欣科學(xué)儀器有限公司。

        酶標(biāo)儀(Bio-RAD 680型):美國伯樂生物技術(shù)公司。

        1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

        昆明小白鼠50只,體重18~22g。

        1.4 試驗(yàn)方法

        川牛膝多糖的提取方法: (1)川牛膝100g研磨碾碎,加入1.2L蒸餾水煮2h,過濾并收集濾液。 (2)將濾液放入燒杯中,置于60℃水浴鍋中濃縮至100ml即得出提取液。 (3)提取液中加入提取液1/4體積的三氯甲烷、1/16體積的正丁醇,震蕩5min,在2000r/min條件下離心15min,如此重復(fù)5次。(4)加入適量的無水乙醇醇沉,靜置過夜,用丙酮、無水乙醇反復(fù)洗滌得到沉淀物,置于烘箱中烘干沉重,即可得到多糖。

        川牛膝多糖硒酸酯的制備方法: (1)取川牛膝多糖1g,加入5%HNO3及100ml蒸餾水,水浴加熱至70℃。 (2)分別加入0.8g左右Na2SeO3和1.44gBaCl2在70℃的水浴鍋中靜置加熱6h。 (3)6h后取出冷卻至室溫,過濾,取濾液用無水碳酸鈉調(diào)節(jié)pH=6~7。 (4)加入1.4g無水硫酸鈉入濾液中,振蕩1min,在2000r/min離心,離心15min。 (5)離心后去上清液裝入透析袋中透析,直到用抗壞血酸檢測無紅色為止。 (6)講透析后的藥品置于真空冷凍干燥機(jī)中冷凍干燥24h得川牛膝多糖硒酸酯,取出并密封保存。 (7)經(jīng)紅外光譜檢測,合成成功。

        分組及免疫程序:將小鼠隨機(jī)分為5組,每組10只。試驗(yàn)分為空白組(Naive)、多糖硒酸酯組(SRCPS)、疫苗組(FMDV)、疫苗+多糖硒酸酯組(FMDV+SRCPS)、疫苗+鋁佐劑組(FMDV+alum)。所有免疫均采取腹股溝皮下注射進(jìn)行免疫,空白組(Naive)小鼠注射生理鹽水(9%NaCl)200μL,多糖硒酸酯組(SRCPS)小鼠注射川牛膝多糖硒酸酯溶液200μL,疫苗組(FMDV)小鼠注射口蹄疫疫苗200μL,疫苗+多糖硒酸酯組(FMDV+SRCPS)小鼠注射口蹄疫疫苗200μL與川牛膝多糖硒酸酯溶液200μL,疫苗+鋁佐劑組(FMDV+alum)小鼠注射口蹄疫疫苗200μL與鋁佐劑200μL,14d后進(jìn)行二免,方法同前。

        血清采集及檢測:分別將對照組及試驗(yàn)組二免后14d時(shí)進(jìn)行眼眶采血1ml/只血樣靜置于4℃冰箱過夜,4000r/min,離心10min,分離出血清供檢測抗體,將血清分裝于0.2ml塑料離心管中,-20℃保存。

        2 試驗(yàn)結(jié)果

        2.1 SRCPS對血清特異性抗體IgG水平的影響

        結(jié)果顯示,各組試驗(yàn)小鼠于二免15d后血清中FMDV特異性IgG的水平,各組與FMDV免疫組相比,F(xiàn)MDV+SRCPS組的IgG水平均極顯著高于FMDV組,F(xiàn)MDV+alum組的IgG水平極顯著高于FMDV組,川牛膝多糖硒酸酯能顯著提高口蹄疫特異性IgG的水平。

        3 結(jié)論

        本試驗(yàn)結(jié)果顯示,與FMDV組相比較,F(xiàn)MDV+alum組與FMDV+SRCPS組的特異性抗體IgG水平差異顯著高于FMDV組。由此可見,川牛膝多糖硒酸酯作為口蹄疫疫苗免疫佐劑能很好地促進(jìn)機(jī)體體液免疫反應(yīng)水平,為進(jìn)一步將川牛膝多糖硒酸酯研究及開發(fā)成新型免疫佐劑提供理論依據(jù)。

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