鄧 娜 吳振山

鄭州鐵路公安局刑事技術(shù)處，河南 鄭州 450000

在鐵路盜竊案件中，潛在生物物證，尤其脫落細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)難、提取難是制約DNA證據(jù)使用的瓶頸。近年來，隨著DNA檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展，微量痕跡物證發(fā)現(xiàn)、提取等方法的日趨成熟，為鐵路公安偵破案件提供了突破口。本文結(jié)合筆者日常工作中的實(shí)際案例，在經(jīng)過502膠熏顯后的指印處，使用棉簽二次轉(zhuǎn)移法提取指印表面脫落細(xì)胞，并用硅珠法提取純化DNA，獲得STR分型，比中嫌疑人，成功破獲案件。

一、案例資料

(一)2017年2月，某地火車站內(nèi)旅客攜帶的現(xiàn)金被盜，報(bào)警后勘查現(xiàn)場，提取到被透明膠帶纏繞的書籍一本，送檢要求做DNA檢驗(yàn)。

(二)2017年4月，某鐵路沿線鋁錠被盜，現(xiàn)場遺留長條狀鋁錠捆扎帶數(shù)根，提取遺留的金屬捆扎帶送檢，要求做DNA檢驗(yàn)鑒定。

二、檢驗(yàn)方法

(一)痕跡檢驗(yàn)人員首先對送檢的檢材進(jìn)行502膠熏顯，但熏顯出的指印痕跡殘缺不全，不具備指紋檢驗(yàn)鑒定和入庫比對條件。

(二)法醫(yī)物證檢驗(yàn)人員在熏顯出的指印痕跡處，使用棉簽二次擦拭轉(zhuǎn)移，先取一根棉簽，將其頭部蘸取少量蒸餾水，擦拭指印處，再用另一根干棉簽頭部擦拭同一部位。將棉簽拭子用硅珠法提取純化DNA，使用D盾超敏提取試劑盒。

步驟為：①剪取棉簽擦拭子適量放入離心套管內(nèi)，緩慢向套管中滴加裂解混合液(裂解液 A：裂解液 B=5：1)200μL，56℃溫浴45min，再99℃裂解10min；②將離心管投入-20℃冰箱內(nèi)迅速降溫至常溫，再加吸附液200μL，后放入離心機(jī)內(nèi)13000r/min離心2min，開蓋后去離心套管，再加入吸附液800μL，吸附珠懸液20μL混合均勻，室溫靜置15min；③8000r/min離心1min，除去上清液，向沉淀物加入-20℃漂洗液800μL，充分混勻；④8000r/min離心1min，去漂洗液；⑤開啟管蓋56℃烘干吸附珠2min；⑥加洗脫液20μL，充分混勻后56℃保溫15min，4℃保存待擴(kuò)增用。

采用AmpFISTR Identifiler?Plus試劑盒 在 9700 型擴(kuò)增儀上對 16 個(gè)基因座進(jìn)行復(fù)合擴(kuò)增，體系為 20μL，其中 DNA 模板8μL，28個(gè)循環(huán)反應(yīng)。取 30μL 內(nèi)標(biāo) LIZ500 和1000μL 去離子甲酰胺混合，取混合物10μL 加入1μL 擴(kuò)增產(chǎn)物，以 3500XL 遺傳分析儀毛細(xì)管電泳，Collection 軟件收集數(shù)據(jù)，GeneMapper?ID-X軟件做等位基因分型。

三、結(jié)果

在兩個(gè)案例中，均獲得完整STR分型，圖譜峰高均在1500以上，均衡性較好，質(zhì)量高；將結(jié)果導(dǎo)入DNA數(shù)據(jù)庫，案例1比中本地庫人員；案例2比中全國庫人員。據(jù)此，抓獲上述犯罪嫌疑人，相關(guān)案件告破。

圖2 案例2捆扎帶上手印拭子DNA分型圖譜

四、討論

由于鐵路流動(dòng)性大、人員密集，發(fā)生在鐵路上的盜竊案件，尤其是列車上的財(cái)物被盜案件通常不能明確案發(fā)時(shí)間和具體地點(diǎn)，沒有傳統(tǒng)意義上的現(xiàn)場，只遺留少量犯罪嫌疑人觸摸過的物品(如錢包、捆扎物等)，故在這些物品上發(fā)現(xiàn)提取到嫌疑人的指紋和脫落細(xì)胞成為偵破案件的關(guān)鍵。脫落細(xì)胞提取過程中肉眼很難發(fā)現(xiàn)，具體位置不能確定，如果盲目提取，難以獲得所需要的靶DNA；如果大面積擦拭，靶DNA的濃度就會(huì)下降，且可能會(huì)遭到外來污染或干擾。為解決上述問題，在非滲透客體上遺留的汗?jié)撝赣√幪崛∶撀浼?xì)胞，是一種針對性強(qiáng)且又簡單易行的方法。

痕跡檢驗(yàn)時(shí)，常用502膠熏顯法顯現(xiàn)指印，但不是每一份檢材均可顯現(xiàn)出清晰、有比對鑒定價(jià)值的指紋。有一部分檢材熏顯后只能看到模糊不清或殘缺不全的指印，這類指印在比對檢驗(yàn)時(shí)沒有利用價(jià)值，但卻給DNA檢驗(yàn)人員提取脫落細(xì)胞指明了方向，在指印處轉(zhuǎn)移提取脫落細(xì)胞比盲目提取的檢出率要高出很多。本文中的兩例案件，都是在502膠熏顯后的模糊指印處，利用擦拭轉(zhuǎn)移法提取脫落細(xì)胞，最終獲得較好的STR分型圖譜。從圖譜的峰值結(jié)果來看，經(jīng)502膠熏顯后的檢材樣本DNA的含量并不低，均能獲得理想的STR分型。

根據(jù)筆者的實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，在轉(zhuǎn)移提取時(shí)采用棉簽二次擦拭轉(zhuǎn)移法效果更佳，因?yàn)橹赣√幍拿撀浼?xì)胞在502膠熏顯過程中，發(fā)生了離子聚合，可將脫落細(xì)胞封在檢材上，二次擦拭轉(zhuǎn)移法通過反復(fù)擦拭、干濕結(jié)合，能最大限度地提取到脫落細(xì)胞。同時(shí)，由于檢材上脫落細(xì)胞數(shù)量本來就少，轉(zhuǎn)移提取后數(shù)量更少，為提高檢出率，在提取純化環(huán)節(jié)，可使用靈敏度更高的D盾試劑盒硅珠法進(jìn)行提純，并在復(fù)合擴(kuò)增時(shí)適當(dāng)調(diào)整模板DNA的用量及體系以獲得較好的分型數(shù)據(jù)。

綜上所述，經(jīng)過502膠熏顯后的檢材仍可通過檢驗(yàn)人體脫落細(xì)胞，獲得STR分型，進(jìn)行比對認(rèn)定或入庫查詢，最大限度利用物證，為偵查破案提供證據(jù)。