朱力國，郭 陽，唐思媛，徐福成，包怡紅*

（1.黑河市林業(yè)科學院，黑龍江 黑河 164300；2.東北林業(yè)大學 林學院，黑龍江 哈爾濱 150040；3.黑河市中俄林業(yè)科技合作園區(qū)，黑龍江 黑河 164300）

藍靛果（Lonicera caerulea）是野生漿果類落葉小灌木，忍冬科忍冬屬植物，又稱為藍靛果、羊奶子、山茄子等。其個體小，呈橢圓形，深皮薄而軟，質(zhì)地細膩，果汁含量豐富[1]。主要產(chǎn)地為我國東北山區(qū)地帶，尤其是大小興安嶺及長白山地區(qū)，四川、西北等地也有分布。藍靛果呈藍色、紫色，其花色苷含量豐富，還富含多種維生素、礦物質(zhì)、黃酮類物質(zhì)多酚、蕓香苷等抗氧化成分[2]。已有研究表明，藍靛果中的活性物質(zhì)具有抗氧化、抗炎、抗菌、預防癌癥、心腦血管疾病等多種生理功效[3-5]。但不同種類藍靛果間的成分及活性比較未見報道。

本試驗對4種藍靛果的理化指標、抗氧化物質(zhì)含量進行測定，通過比較藍靛果水提物與醇提物的3種體外抗氧化指標：1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhy drazyl，DPPH）自由基（DPPH·）、超氧陰離子自由基（O2-·）、羥基自由基（·OH）清除能力說明其抗氧化活性的差異，為藍靛果忍冬種類的綜合加工利用提供一定的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

藍靛果（1-100-82、藍彷垂、加洛奇卡、藍鳥）：黑河林業(yè)局提供，采摘商業(yè)熟藍靛果于-40℃速凍備用；酒石酸鉀鈉、葡萄糖、硝酸鋁、乙醇、鹽酸（均為分析純）：國藥集團化學試劑有限公司；福林酚試劑、DPPH、鄰苯三酚、三羥甲基氨基甲烷（均為分析純）：上海阿拉丁試劑有限公司。

1.2 儀器與設備

JYL-C91T型榨汁機：九陽股份有限公司；DK-98-1型恒溫水浴鍋：天津市泰斯特儀器有限公司；721型可見光分光光度計：上海精密科學儀器有限公司；TGL-16G型高速離心機：北京普析通用儀器有限公司；PHS-3C型精密pH計：上海儀電科學儀器股份有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 理化指標的測定

水分含量：參照GB 5009.3—2010直接干燥法[6]；灰分含量：參照GB/T 5009.4—2010食品中灰分的測定[7]；可滴定酸含量（以檸檬酸計）：參照GB/T 12456—2008食品中總酸的測定方法[8]；還原糖含量（以葡萄糖計）：參照GB/T 5009.7—2008食品中還原糖的測定[9]；百粒質(zhì)量：隨機選取100粒藍靛果，測定其質(zhì)量。

1.3.2 抗氧化物質(zhì)含量的測定

總黃酮的提取、測定：提取條件為提取時間6.6 h、提取溫度61.3℃、乙醇體積分數(shù)55%vol，重復提取3次，合并提取液[10]。按照參考文獻[11]的方法進行測定。

總花色苷的提取、測定：提取條件為料液比1∶10（g∶mL），添加0.1%鹽酸酸化的體積分數(shù)60%的乙醇，超聲輔助提取90min，溫度40℃，提取至殘渣無色[12]。按照參考文獻[12]的方法進行測定。

總多酚的提取、測定：提取條件為料液比1∶25（g∶mL）、提取溫度40℃、乙醇體積分數(shù)50%、超聲功率300 W、提取時間90 min[13]。按照參考文獻[13]的方法進行測定。

1.3.3 抗氧化物的制備及抗氧化活力的測定

水提物的制備：稱取50 g勻漿后的藍靛果果漿，以蒸餾水為溶劑，料液比1∶20（g∶mL），80 ℃浸提2 h，抽濾，得到藍靛果水提物，定容至50 mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

醇提物的制備：稱取50 g勻漿后的藍靛果果漿，以體積分數(shù)40%、60%、80%的乙醇為溶劑，在料液比1∶2（g∶mL），超聲時間60 min，超聲溫度50℃，超聲功率200 W的條件下提取。將提取液3 000 r/min離心5 min，取上清液濃縮，定容至50 mL，4℃貯存?zhèn)溆谩?/p>

以4種藍靛果的水提物與醇提物為受試底物，測定不同濃度提取物的3種抗氧化活性（DPPH自由基清除能力、超氧陰離子清除能力、羥基自由基清除能力）。

（1）DPPH自由基清除能力

取各濃度提取物2 mL，加入0.2 mol/L的DPPH 2 mL，反應時間為30 min，以溶劑為對照，在波長517 nm處測定其吸光度值Ai。然后取各濃度提取物2 mL，與2 mL乙醇混合，測定其在波長517 nm處的吸光度值Aj。取2 mL DPPH，與2 mL溶劑混合后在波長517 nm處的吸光度值Ae[14]。DPPH自由基的清除能力（K）計算公式如下：

（2）超氧陰離子清除能力

取0.2 mL樣品溶液加入50 mmol/L的Tris-HCl緩沖液（pH8.2）5.7mL，25℃水浴鍋中溫育10min后，加入6mmol/L鄰苯三酚0.1 mL，測定反應時間1 min時波長320 nm處的吸光度值As，以等濃度樣品溶液為參比；用等體積水代替樣品，以Tris-HCl為空白，測定反應進行5min時波長320nm處的吸光度值A0。超氧陰離子自由基的清除能力（S）計算公式如下：

（3）羥基自由基清除能力

取1 mL樣品溶液，加入1 mL甲基紫（2.0×10-4mol/L）、1 mLFe3+（1.0×10-3mol/L），調(diào)節(jié)溶液pH為4.5，稀釋至10mL，30 min后于578 nm處測定吸光值As，甲基紫和Tris-HCl緩沖液為空白，以相同體積的Tris-HCl緩沖液和水溶液為參比分別測得A與A0。羥基自由基的清除能力（X）計算公式如下：

1.3.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

采用Origin8.0對數(shù)據(jù)進行處理，用SPSS19.0對數(shù)據(jù)進行差異顯著性分析，利用SigmaPlot14.0對數(shù)據(jù)進行相關性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 理化指標的測定

對4種藍靛果的水分含量、百粒質(zhì)量、總酸含量、還原糖含量、灰分含量進行測定，結(jié)果如表1所示。

表1 4種藍靛果的理化指標測定結(jié)果Table 1 Determination results of physicochemical indexes of four Lonicera edulis

由表1可知，4種不同品種藍靛果的基本成分存在一定差異。藍彷垂百粒質(zhì)量最高，與1-100-82相比差異不顯著（P＞0.05），與其他兩種藍靛果相比差異極顯著（P＜0.01）；總酸（以檸檬酸計）含量與藍鳥相比差異極顯著（P＜0.01），與加洛奇卡相比差異不顯著（P＞0.05），與1-100-82相比差異顯著（P＜0.05）；還原糖含量最高，與其他3種藍靛果相比差異極顯著（P＜0.01）；灰分含量最高，與其他3種藍靛果相比有極顯著性差異（P＜0.01），表明其中鈣、鎂、鉀等礦物質(zhì)元素含量較高[15]；因此藍彷垂在4種藍靛果中更適宜鮮食。藍鳥的總酸含量最高，與其他3個品種相比差異極顯著（P＜0.01），還原糖（以葡萄糖計）含量最低，適口性低于其他3種藍靛果。

2.2 抗氧化活性物質(zhì)含量的測定

藍靛果中功能性物質(zhì)的存在，賦予了其抗氧化、抗炎等活性功能。4種藍靛果的抗氧化活性物質(zhì)含量結(jié)果見表2。

表2 4種藍靛果抗氧化活性物質(zhì)含量比較Table 2 Comparison of antioxidant active substance contents in four Lonicera edulis

由表2可知，不同藍靛果多酚含量差異性極顯著（P＜0.01）。藍鳥的多酚含量及黃酮含量均最高，分別為612.08 mg/g、458.20mg/100g，與其他3種藍靛果相比差異極顯著（P＜0.01），藍鳥的活性物質(zhì)含量突出，適宜作為活性物質(zhì)的提取加工品種。加洛奇卡的花色苷含量最高，為322.64 mg/100 g，與其他3種藍靛果相比差異極顯著（P＜0.01）。

2.3 抗氧化活力的測定

2.3.1 水提物的抗氧化活性

對4種藍靛果不同濃度水提物抗氧化性的測定結(jié)果如表3所示。

表3 4種藍靛果不同濃度水提物抗氧化性差異Table 3 Differences in antioxidant activity of Lonicera edulis with different concentrations of aqueous extract

由表3可知，不同樣品濃度下，0.25 mg/mL 1-100-82水提物清除·OH能力最低，為5.9%。藍鳥水提物在不同樣品濃度時對DPPH·、O2-·、·OH清除率都達到最大，當樣品濃度為2.00 mg/mL時，清除率分別為為30.7%、30.9%、27.4%。

2.3.2 醇提物的抗氧化活性

（1）DPPH·清除能力

圖1 不同乙醇體積分數(shù)對藍靛果醇提物DPPH·清除率的影響Fig.1 Effect of different alcohol concentration on DPPH·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖1可以看出，在不同體積分數(shù)的乙醇溶液提取的4種藍靛果醇提物的DPPH·清除能力大小依次為藍鳥＞加洛奇卡＞藍彷垂＞1-100-82。在體積分數(shù)為60%的乙醇溶液中提取抗氧化物質(zhì)的DPPH·清除率高于其他體積分數(shù)的乙醇溶液。藍鳥在體積分數(shù)60%的乙醇溶液提取物清除DPPH·的能力最高，為76.3%。

（2）O2-·清除能力

圖2 不同乙醇體積分數(shù)對藍靛果醇提物O2-·清除率的影響Fig.2 Effect of different ethanol concentration on O 2-·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖2可知，在乙醇體積分數(shù)為20%、40%、80%時，藍靛果醇提物對O2-·清除率大小順序為藍鳥＞加洛奇卡＞藍彷垂＞1-100-82；當乙醇體積分數(shù)為60%時，對O2-·清除能力大小順序為加洛奇卡＞1-100-82＞藍彷垂＞藍鳥。這可能是由于不同抗氧化物質(zhì)在不同體積分數(shù)的乙醇溶液中溶出的含量不同，對不一樣的自由基結(jié)合能力也不相同[16]。加洛奇卡藍靛果的體積分數(shù)60%的乙醇提取物對O2-·清除率為86.3%，達到最高。

（3）·OH清除能力

圖3 不同乙醇體積分數(shù)對藍靛果醇提物OH·清除率的影響Fig.3 Effect of different ethanol concentration on OH·scavenging ability of ethanol extract of Lonicera edulis

由圖3可以看出，在乙醇體積分數(shù)為20%、40%、80%時，藍靛果醇提物對·OH清除能力大小順序為藍鳥＞加洛奇卡＞藍彷垂＞1-100-82；當乙醇體積分數(shù)為60%時，藍靛果醇提物對·OH清除能力大小順序為1-100-82＞加洛奇卡＞藍彷垂＞藍鳥，可能是由于體積分數(shù)60%的乙醇溶液的提取物對·OH的清除能力最強，尤其1-100-82最為明顯，·OH清除率為71.5%。

2.4 藍靛果抗氧化活性與抗氧化物含量的相關性

從表4可以看出，藍靛果水提物的DPPH·清除能力、O2-·清除能力、·OH清除能力與總多酚、總黃酮含量均呈現(xiàn)極顯著的相關性（P＜0.01）?？偦ㄉ蘸颗cO2-·清除能力無顯著相關性（P＞0.05），與DPPH·清除能力、·OH清除能力呈現(xiàn)極顯著相關（P＜0.01）、顯著性相關（P＜0.05）。

不同品種藍靛果的醇提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關性分析結(jié)果如表5所示。

表4 藍靛果水提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關性Table 4 Correlation between antioxidant activity and antioxidant content of Lonicera edulis aqueous extract

表5 藍靛果醇提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關性Table 5 Correlation between antioxidant activity and antioxidant content of ethanol extract of Lonicera edulis

由表5可知，藍靛果醇提物的DPPH·清除能力與總多酚含量呈極顯著相關性（P＜0.01），與O2-·清除能力呈負顯著相關性（P＜0.05）與·OH清除能力呈負極顯著相關性（P＜0.01）；總黃酮含量與O2-·清除能力、·OH清除能力呈負極顯著相關性（P＜0.01），與DPPH·清除能力呈正顯著相關性（P＜0.05）；總花色苷含量與DPPH·清除能力呈極顯著相關性（P＜0.05），與·OH清除能力呈顯著相關性，與O2-·清除能力無相關性（P＞0.05）。醇提物與水提物抗氧化活性與抗氧化物含量的相關性分析說明多酚是藍靛果抗氧化的主要活性部分。

3 結(jié)論

4種藍靛果種植條件及環(huán)境相同，同為高叢藍靛果，接受光照時常及比例近似相同。通過對不同品種藍靛果營養(yǎng)品質(zhì)的測定可知，不同種類的藍靛果水分、總酸、還原糖、多酚、黃酮、花色苷含量差異顯著，表明藍靛果的品種差異對果實品質(zhì)的影響是差異顯著的。藍彷垂百粒質(zhì)量（135.50 g）、還原糖含量（9.51 g/100 g）高，適宜鮮食；藍鳥多酚、黃酮含量最高（612.08 mg/g、458.20 mg/100 g），加洛奇卡花色苷含量最高（322.64 mg/100 g），適宜作為活性物質(zhì)的提取加工品種；4種藍靛果的醇提物抗氧化活性均優(yōu)于水提物，在乙醇體積分數(shù)為60%時，抗氧化活力達到最高。