肖欣

子宮內(nèi)膜癌是女性生殖系統(tǒng)常見的三種惡性腫瘤之一,在發(fā)達國家, 其發(fā)病率已高居女性生殖道惡性腫瘤之首［1］。近年來, 我國上海等大中城市的子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率有逐年上升的趨勢, 且發(fā)病年齡漸趨年輕化。目前, 在上海市區(qū),子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率已超過宮頸癌, 其中, 以子宮內(nèi)膜樣腺癌(endometrioid adenocarcinoma, EA)最為常見［2］。而有關(guān)遵義地區(qū)婦女子宮內(nèi)膜樣腺癌的發(fā)生率, 尚未見相關(guān)報告。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 收集本院2006年1月～2016年12月刮宮或手術(shù)切除經(jīng)病理科確診的標(biāo)本100例, 按照組織學(xué)分級分為Ⅰ級38例, Ⅱ級 41例, Ⅲ級 21例, 上述標(biāo)本經(jīng)過 10%福爾馬林液固定, 常規(guī)脫水 , 石蠟包埋 , 連續(xù)切片 4 μm厚為標(biāo)準(zhǔn), 蘇木精-伊紅染色法(HE)染色, 并進行重新閱片明確診斷。選取同期正常子宮內(nèi)膜、增生性病變、子宮內(nèi)膜上皮內(nèi)瘤變 (endometrial intraepithelial neoplasia, EIN) 各 20 例作為對照。

1.2 試劑 鼠抗人單克隆抗體C-erbB-2、鼠抗人單克隆抗體p53、免疫組化試劑盒均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司, 工作濃度分別為1∶100、1∶150.

1.3 方法 將存檔的石蠟塊4 μm厚標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)切片, 行 HE染色和免疫組化染色。免疫組化實驗步驟嚴格按照試劑盒說明書進行操作：石蠟切片脫蠟至水后, 蒸餾水沖洗, 3%過氧化氫溶液封閉(10 min), 抗原修復(fù)(p53采用pH 6.0枸櫞酸鹽緩沖液高壓修復(fù), C-erbB-2采用pH 9.0 EDTA 抗原修復(fù)液微波修復(fù)), 磷酸緩沖鹽溶液(PBS)沖洗, 加一抗 , 濕盒 4℃冰箱過夜 , PBS 沖洗 , 滴加二抗 (室溫 30 min), PBS 沖洗 , 用 DAB顯色 (鏡下控制 ), 蘇木素復(fù)染 , 酒精脫水 , 二甲苯透明 , 封片。一抗的工作濃度為1∶100, 二抗為即用型。用PBS代替一抗作陰性對照, 用預(yù)試驗中已知的陽性片作陽性對照。

1.4 染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) C-erbB-2的陽性信號主要定位于細胞膜, p53蛋白的陽性信號主要定位于細胞核。細胞出現(xiàn)棕黃色顆粒、黃色顆?；蜃睾稚w粒為陽性, 評分標(biāo)準(zhǔn)如下：①著色強度：無色為0分, 淡黃色為 1分, 棕黃色為2分, 棕褐色為 3分；②計數(shù)標(biāo)準(zhǔn)：無陽性細胞為0分, 陽性細胞≤25%為1分, 陽性細胞26%～50%為2分, 陽性細胞51%～75%為3分, 陽性細胞＞75%為4分, 以①②兩項相加的結(jié)果作為綜合評分：0分為 (-), 1～3分為 (±), 4～5 分為 (+),6～7 分為 (++), 其中 (+)和 (++)判為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行處理。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 C-erbB-2、p53在子宮內(nèi)膜不同病變組織中陽性表達情況比較 C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率分別為5.00%、0, 在增生性病變組織中陽性表達率分別為10.00%、15.00%, 在EIN組織中陽性表達率分別為60.00%、45.00%, 在EA組織中陽性表達率分別為50.00%、59.00%；C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病變組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率與在增生性病變組織中比較, 在EIN組織中陽性表達率與在EA組織中比較, 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義 (P＞0.05)。見表 1, 圖 1, 圖 2。

2.2 C-erbB-2和p53在不同EA組織學(xué)分級中陽性表達情況比較 不同EA組織學(xué)分級中C-erbB-2、p53蛋白的陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表2。

表1 C-erbB-2、p53在子宮內(nèi)膜不同病變組織中陽性表達情況比較(n,%)

圖1 EA腫瘤細胞膜表達C-erbB-2, Elivision法×400

圖2 EA腫瘤細胞核表達p53 Elivision法×400

表2 C-erbB-2和p53在不同EA組織學(xué)分級中陽性表達情況比較(n,%)

3 討論

C-erbB-2是表皮生長因子受體家族成員之一, 定位于染色體17q21, 編碼相對分子量185 kD的絡(luò)氨酸蛋白。在許多種惡性腫瘤組織中存在C-erbB-2基因擴增及蛋白的過度表達, 許多研究［3］顯示, 腫瘤組織內(nèi)存在 C-erbB-2過度表達和基因擴增時, 更容易發(fā)生轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā), 而且預(yù)后不佳。人類p53基因定位于染色體17p13, 是一種轉(zhuǎn)錄因子 , 轉(zhuǎn)錄 2.8 kD的mRNA, 編碼蛋白質(zhì)為p53, p53是迄今為止發(fā)現(xiàn)的與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因, 通過生長抑制、誘導(dǎo)細胞凋亡、促進細胞分化達到抑制腫瘤的作用。該基因突變、失活在腫瘤生長與浸潤過程中具有重要作用［4］。

本研究結(jié)果顯示, C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, C-erbB-2、p53蛋白在增生性病變組織中陽性表達率與在EIN、EA組織中比較, 差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義 (P＜0.05)。C-erbB-2、p53蛋白在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率與在增生性病變組織中比較, 在EIN組織中陽性表達率與在EA組織中比較, 差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示兩種基因蛋白的陽性表達參與了EA的發(fā)生發(fā)展。

本組100例EA中, C-erbB-2的陽性表達率隨組織學(xué)分級的升高而逐漸降低, 而p53的陽性表達率則隨組織學(xué)分級的升高而逐漸升高, 但不同EA組織學(xué)分級中C-erbB-2、p53蛋白的陽性表達率比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。提示兩種基因蛋白的陽性表達與惡性程度無關(guān), 但C-erbB-2可能在EA發(fā)生的起始階段發(fā)揮一定的作用, 是EA發(fā)生的早期事件；一旦出現(xiàn)p53基因的突變, 則腫瘤可能向更高的惡性程度發(fā)展。

總之, 聯(lián)合檢測C-erbB-2和p53可能成為臨床診治子宮內(nèi)膜樣腺癌的重要參考依據(jù)。