吳慶昕

河南省息縣人民醫(yī)院中醫(yī)科(息縣464300)

祖國醫(yī)學稱“血不利則為水，血水本同源”，提示血和水在生理上相互化生且功用相近，病理上則“瘀水關聯(lián)”，強調對血瘀證治療關鍵是活血利水。水通道蛋白2(AQP2)廣泛存在于腎臟遠端小管和集合管的主細胞頂膜中，其作用作用是參與尿濃縮和稀釋功能，和腎的“利尿”作用相近。丹參作為臨床上應用最廣泛的中醫(yī)藥材，其具有“活血化瘀、曲瘀止痛、涼血養(yǎng)血，安神”等功效，現(xiàn)代藥理學證實，丹參具有降低血液黏度、抑制血小板聚集、抗血栓形成，同時能改善微循環(huán)和減少血管內皮細胞損傷，能降低血管通透性，能減少組織水腫，同時能調節(jié)AQP2表達[1]。研究[2]指出，中醫(yī)活血利尿本質是上調AQP2蛋白表達，促使局部肌肉和腎組織水吸收入紅細胞和血漿，通過代謝將水液消耗，降低AQP2蛋白表達，促使腎組織水通過尿液排出，實現(xiàn)消腫利尿，從而減輕組織血瘀和水腫病理狀態(tài)?；诖耍敬窝芯孔鋈缦聦嶒?，以證實該結論，為臨床用藥提供有力依據(jù)。

材料與方法

1 材 料 收集30只大鼠，分成正常組、模型組和丹參組，每組均為10只，均為雄性，體重150～210g，平均(180±20)g；藥物均購自復旦大學臨床實驗室研究中心，丹參根據(jù)《中國藥點》提取稱丹參干燥成粉劑，給藥前用生理鹽水調成混懸液，將丹參調劑成1g/ml。

2 方 法 將30只大鼠分成三組，正常組不建立模型，每日常規(guī)喂養(yǎng)生理鹽水10 μl/g。模型組和丹參組則采用定量化打擊法進行造模型，即將大鼠右后肢放置在打擊器上，砝碼為500 g，高度為58 cm，自由落下后打擊在后肢內側中上部，成功標志為單側肢體跛行，無皮膚破損，無出血，無骨折，模型組繼續(xù)生理鹽水10 μl/g灌胃，丹參組則用丹參混懸液1 g/kg灌胃，均連續(xù)治療1周。12周后處死，取局部肌肉和腎組織，部分標本迅速放入在4%多聚甲醛中進行固定，進行免疫組化和病理學觀察，用腎組織勻漿Western Blot法檢測AQP2蛋白表達。觀察在腎組織AQP2蛋白表達情況。

結 果

1 各組尿量和AQP2濃度等指標比較 尿量上以丹參組含量最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而在AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上以模型組最高，和其他兩組比較差異顯著(P<0.05)，而正常組和丹參組在以上三個指標上比較差異則不顯著(P>0.05)，見表1。

表1 各組尿量和AQP2濃度等指標比較

2 三組病理組織學觀察 正常組肌纖維結構清晰，腎小球正常，腎小管上皮細胞排列整齊。模型組局部肌纖維索損傷，周圍炎性細胞浸潤顯著，腎小球不同程度擴張，上皮細胞增生，毛細血管腫脹，腎小管擴張變性，毛細血管充血顯著。丹參組肌纖維接近正常，腎小管-間質變顯著改善，僅有少數(shù)毛細血管擴張，但程度均較輕。

討 論

水通道蛋白是近20年發(fā)現(xiàn)的一種廣泛存在機體各器官組織內，對水高度選擇性的細胞膜轉運蛋白，其主要分布在和液體吸收和分泌緊密相關的內皮細胞和上皮細胞上，參與調節(jié)和水跨細胞膜轉運相關的病理和生理過程[3-4]。目前對AQP在臨床上可分成13個亞型，AQP2主要分布在腎臟中，其主要是表達在遠端小管和集合管主細胞頂膜中，其主要參與尿液稀釋濃縮。研究[5-6]稱，AQP2集合管中約有3%隨尿液排出體外，在不同生理或病理下，其排出量不同，故可將AQP2作為腎功能的一個重要檢測指標。

結果顯示，AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上以模型組最高，而在尿量上則以丹參組最高，這點和報道[7-8]結論是一致的，實驗證明，糖尿病腎損傷模型組織AQP2表達增多，丹參則能顯著降低糖尿病大鼠腎組織中的AQP2蛋白表達，在腎臟AQP1高表達中近端小管和髓袢支細段上皮細胞頂膜和側膜，其主要參與水重吸收。當AQP1表達下降則代表腎臟對水重吸收功能減弱，AQP2表達增加則表示其原尿重吸收能力增加，故兩者有協(xié)同作用，能促使尿量增加[9]。這也證實外傷后血瘀證大鼠在AQP2表達上增加顯著，故尿液較正常顯著增加。

丹參在臨床上能降低血管通透性，能減輕血管源性水腫，能增加腎血流，且有利尿、調節(jié)腎組織局部微循環(huán)等作用。研究[10-11]指出，丹參能上調急慢性肺損傷的微血管內皮細胞AQP2蛋白的表達，能降低膽汁淤積性肝硬化大鼠肝硬化AQP2表達。報道稱，丹參能減輕血瘀證大鼠局部肌肉和腎組織血管內皮細胞損傷，能調高血管內皮細胞膜中的水通道蛋白表達，能減輕局部腎組織瘀腫，故丹參有很好“活血消腫”作用。結果顯示，丹參組在AQP2濃度、腎組織AQP2表達、Western blot表達上和正常組相近，而在尿量上則顯著高于正常組和模型組，且在病理組織學上也和正常組相近，這證實丹參能下調腎組織AQP2表達，能增加腎排出尿液功能[12-15]，推斷出AQP2能促使腎小管對原尿水重吸收有關，故丹參的活血功效其中主要和腎臟的利尿是一致的。

總之，丹參能降低腎臟遠端小管和集合管主細胞的AQP2表達，能升高近端血管上皮細胞的AQP1表達，故其能減少腎對原尿的重吸收功能，增加尿量，同時能減少腎水腫。而當體內水液不足，則AQP2表達增加，尿量減少，因AQP2能隨尿液排出3%，故其能在一定程度上反映腎組織利尿和水腫疾病相關性[16-17]，故丹參的“活血利尿”功效可能和其調節(jié)腎小管AQP2水平緊密相關[18-19]。

[1] 董曉靜.丹參調節(jié)AQPs表達詮釋“活血利水”之亞法本質的研究[D].第四軍醫(yī)大學,2013.

[2] 馬芳芳.心衰康及其拆方對慢性心衰大鼠心功能及尿液AQP2、下丘腦AVP影響的研究[D].河南中醫(yī)學院,2014.

[3] 胡 波,范紅偉,鮑軍強,等.丹參對糖尿病腎損傷大鼠水液代謝異常與水通道蛋白調節(jié)機制探討[J].時珍國醫(yī)國藥,2011,22(2)：356-358.

[4] Nephrology, dialysis, transplantation: official publication of the European Dialysis and Transplant Association-European Renal Association.Vasopressin increases S261 phosphorylation in AQP2-P262L, a mutant in recessive nephrogenic diabetes insipidus[J].Nephrol Dial Transplant，2012,27(12):4389-4397.

[5] Rugpolmuang,R.,Deeb,A,Hassan Y，etal.Novel AQP2 mutation causing congenital nephrogenic diabetes insipidus：Challenges in management during infancy[J].JPEM,2014,27(1/2)：193-197.

[6] 陳少軍,任紀龍.丹參作用于水通道蛋白AQP4的活性成分虛擬篩選[J].中成藥,2015,37(2)：438-442.

[7] 劉鳳琴,牛小媛,牛文華,等.大鼠腦缺血再灌注后腦組織水通道蛋白4的表達及丹參川芎嗪干預作用的研究[J].中華老年心腦血管病雜志,2012,14(12)：1321-1324.

[8] 胡 波,范紅偉,姚 欣,等.丹參注射液聯(lián)合卡托普利通過調節(jié)水通道蛋白2對Ⅳ期糖尿病腎病患者腎功能影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2013,24(2)：345-346.

[9] Sasaki S.,Yui N,Noda Y,etal.Actin directly interacts with different membrane channel proteins and influences channel activities：AQP2 as a model[J].Biochimica etbiophysica acta,2014,1838(2)：514-520.

[10] 胡 波,范紅偉,王燕午,等.丹參對糖尿病腎病大鼠腎臟水通道蛋白-2表達的影響[J].時珍國醫(yī)國藥,2010,21(5)：1103-1105.

[11] 張譯文,馬小燕,丁盛娣,等.復方丹參注射液對人羊膜上皮細胞水通道蛋白3表達的影響[J].中國中西醫(yī)結合雜志,2013,33(1)：51-55.

[12] Yui, Naofumi,Lu, Hua Jenny,Bouley, Richard.AQP2 is necessary for vasopressin-and forskolin-mediated filamentous actin depolymerization in renal epithelial cells[J].Biol Open，2012,5(3):41-43.

[13] 張 潔,羅序睿,陳耿靖,等.丹參酮ⅡA對心肺復蘇大鼠腦水通道蛋白4表達及腦水腫的影響[J].中國醫(yī)藥,2015,10(8)：1133-1136.

[14] Stdkilde, LN.Bilateral ureteral obstruction induces early downregulation and redistribution of AQP2 and phosphorylated AQP2[J].Am J Physiol Renal Physiol，2012,2(1):4-6.

[15] 胡 波,范紅偉,鮑軍強,等.丹參單體 IH764-3對糖尿病腎病大鼠水通道蛋白表達的影響[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結合雜志,2016,25(7)：693-698.

[16] 穆 鑫,康 白.水通道蛋白與糖尿病腎病[J].國際內分泌代謝雜志,2006,26(2):113-115.

[17] 王長志,景文莉.水通道蛋白-2的研究進展[J].承德醫(yī)學院學報,2012,29(3):297-299.

[18] 方有生,陳德松,顧玉東.黨參黃芪丹參等復方中草藥合劑對周圍神經再生影響的實驗研究[J].中華手外科雜志,1998,14(3):181.