田璐　李媛媛　陳曉玲　朱文博　李達(dá)　孫遠(yuǎn)遠(yuǎn)　郭建軍

摘要：單胞藻作為貝類育苗過程中的重要生物餌料，其培育技術(shù)是貝類繁育的重要環(huán)節(jié)。因此為探索研究紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）苗種繁育中所需單胞藻培育及投喂技術(shù)，結(jié)合日照地區(qū)水文條件開展紫彩血蛤苗種單胞藻培育實驗。實驗結(jié)果表明利用多種藻類分階段混合投喂有助于紫彩血蛤幼蟲發(fā)育。總結(jié)實驗結(jié)果得到一套繁育速度快、密度高的單胞藻培育技術(shù)，及其適宜紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的投喂方式，以期為紫彩血蛤苗種繁育提供理論支撐。

關(guān)鍵詞：單胞藻培育技術(shù)；紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）；餌料

單胞藻一般為幾微米到幾十微米的單細(xì)胞藻類或者單細(xì)胞藻群體。單胞藻含有豐富營養(yǎng)，不僅可以作為貝類及其他水生生物的直接或間接餌料，還是水中溶解氧的重要來源。作為海珍品苗種培育的重要基礎(chǔ)生物餌料，目前生產(chǎn)條件下單胞藻培育仍然受到諸多條件的制約，如氣候、設(shè)備、操作方法等，因此為解決單胞藻餌料供應(yīng)對育苗生產(chǎn)的不利影響，單胞藻的培育技術(shù)及其應(yīng)用成為了貝類及其他水生生物工廠化生產(chǎn)的重要課題。筆者通過多年來單胞藻培育的經(jīng)驗，總結(jié)出一套單胞藻培育技術(shù)并開展了其在紫彩血蛤育苗中的應(yīng)用試驗，以期為單胞藻快速培育技術(shù)的推廣提供一定理論基礎(chǔ)。

1單胞藻培育技術(shù)

1.1培養(yǎng)設(shè)施

為了適應(yīng)紫彩血蛤（Nuttallia olivacea）生產(chǎn)季節(jié)所需并保持單胞藻的高純度，在育苗場所附近應(yīng)建有專用的藻類保種室及擴種室或擴種棚，其面積按照育苗規(guī)模進(jìn)行計算。一般1 000 m3水體的育苗廠，需配備20～30 m2的保種室一間。保種室需保證采光條件良好，可加裝人工光源，以防止連續(xù)陰雨天對藻類生長的影響。另外，在夏季高溫期應(yīng)安裝遮光設(shè)施，同時進(jìn)行通風(fēng)或者降溫處理。

對純凈優(yōu)質(zhì)的藻類進(jìn)行保種與擴種生產(chǎn)，保種需用容器常見為3 000 mL或5 000 mL的三角燒瓶及透明塑料桶（20 L）及煮沸過濾海水；擴種則需容器為細(xì)口瓶（20 L）、白塑料桶（50 L或者500 L）及消毒過濾海水。本實驗未使用常見尼龍袋（30 L蝦苗袋）進(jìn)行擴種，原因為尼龍袋易破損導(dǎo)致擴種過程發(fā)生交叉污染現(xiàn)象。以上設(shè)施均需安置于通風(fēng)良好的專用擴種室或四面采光良好的擴種棚內(nèi)，并加裝可移動遮光簾調(diào)節(jié)光線。

藻類三級擴種池應(yīng)單獨設(shè)置，培養(yǎng)室需采用透明玻璃鋼瓦，并及時更換透光不良的鋼瓦，保證采光率70%以上。培養(yǎng)室需通風(fēng)良好，并安裝遮光設(shè)施，池深不超過1 m。

1.2培養(yǎng)用水

一級保種用水為潔凈砂濾海水經(jīng)脫脂棉過濾沉淀后，煮沸冷卻后使用。二級擴種用水為潔凈砂濾海水煮沸冷卻使用，同時也可混合使用一級保種用水及NaCIO消毒后過濾海水。三級擴種用水為潔凈砂濾海水經(jīng)蛋白分離器處理后利用NaCIO消毒處理曝氣2 h以上，靜止沉淀24 h以上，經(jīng)Na2S2O3中和至無余氯為止后使用。

1.3一級培養(yǎng)（保種）

紫彩血蛤育苗階段開始于每年3至4月份，育苗階段開始前藻類提前進(jìn)入保種及快速擴種階段，一般開始于每年1月份。保種常用藻類種類為球等鞭金藻（Isochrysis galbana）、叉鞭金藻（Dicrateria inornata）、角毛藻（Chaetoceros calcitrons）、扁藻（Platymonas spp.）、小球藻（Chlorella spp.）等，藻種適宜生長溫度如表1所示。

本試驗藻種購買于中國海洋大學(xué)及中國科學(xué)水產(chǎn)研究所黃海水產(chǎn)研究所的優(yōu)質(zhì)純種藻種。首次接種到1～2只三角燒瓶中，接種比例1：1，較高接種比例可保證藻種盡快適應(yīng)培養(yǎng)用水。培育密度達(dá)到一定要求后添加消毒海水與營養(yǎng)液。藻液滿瓶后，利用瓶接瓶方式快速分瓶培養(yǎng)。接種過程中容器、工具均須經(jīng)煮沸消毒后使用，接種后瓶口用雙層經(jīng)消毒過的濾紙包扎，放在保種室內(nèi)光照合適的位置培養(yǎng)，每天搖動2～4次。

1.4二級培養(yǎng)

二級擴種過程選用部分細(xì)口瓶及白色塑料桶進(jìn)行封閉式擴種，塑料桶體積分為50 L和500 L兩種規(guī)格。細(xì)口瓶具有透光度高、密封條件好、不易污染等特點，但由于接種及搬運過程中易碎僅少量應(yīng)用于光照照度要求較高的藻種。白色塑料桶具有消毒方便、接種及搬運易操作，且可重復(fù)使用的優(yōu)點，但透光性較差。

利用50 L塑料桶接種時，需先清洗干凈，后加滿過濾海水及適宜濃度的NaCIO進(jìn)行浸泡消毒，浸泡時間不得少于12 h。待浸泡時間到，中和余氯后倒出部分海水，按照比例加入營養(yǎng)鹽后進(jìn)行接種，連接充氣管，加蓋尼龍薄膜進(jìn)行通氣培養(yǎng)。接種好的塑料桶需放置于適宜光照條件下的擴種棚或擴種室內(nèi)，高溫期適當(dāng)進(jìn)行遮光通風(fēng)，以免由于溫度過高影響藻類生長。500 L塑料桶與50 L塑料桶相比較，雖然在接種過程中操作較困難，但接種后藻類生長速度快、抗污染能力高、可實現(xiàn)快速擴種，因此在溫度達(dá)到藻種適宜生長溫度時可選用。

二級擴種過程一般分為（1）瓶接桶擴種，接種密度為：金藻、角毛藻50×10⁴ind·mL^-1以上；扁藻10×10⁴ind·mL^-1以上。先接種至桶的1/4～1/3體積，隨著單胞藻生長逐漸加滿培養(yǎng)液。（2）桶接桶擴種，待達(dá)到較高生長密度后，利用分桶的方式繼續(xù)進(jìn)行接種培養(yǎng)，利用這種方式可實現(xiàn)藻類快速擴種，但易發(fā)生污染，建議接種次數(shù)不超過3次。接種比例不低于1：20。

1.5三級培養(yǎng)（生產(chǎn)性培養(yǎng)）

利用NaCIO消毒培養(yǎng)池并中和后使用。接種盡量選擇在晴朗天氣的早上，適宜的環(huán)境條件有助于確保接種成功。接種密度為：金藻40×10⁴～50×10⁴ind·mL^-1，扁藻8×10⁴～10×10⁴ind·mL^-1。接種時加入消毒海水15～30 cm，按照藻種類型加入相應(yīng)比例營養(yǎng)鹽，并充氣。接種后視天氣情況，根據(jù)藻液密度加水及施肥。投喂前需停止施肥1～2 d。當(dāng)藻液達(dá)到一定密度且鏡檢無污染情況下可進(jìn)行分池培養(yǎng)，抽取1/3～1/2左右藻液進(jìn)行接種，留下藻液加入消毒海水繼續(xù)培養(yǎng)。

三級培養(yǎng)過程中，即使在通氣培養(yǎng)條件下，還需要適當(dāng)進(jìn)行攪池，一般每日2～4次。同時應(yīng)注意隨著藻液水位的變化適當(dāng)調(diào)節(jié)光線，保證藻類采光。

1.6營養(yǎng)鹽

藻類生長需要適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)鹽，本試驗藻類培養(yǎng)采用的營養(yǎng)鹽主要參照竺俊全等及孫成渤等所采用的的單胞藻培養(yǎng)所需營養(yǎng)鹽配方。

2紫彩血蛤幼蟲不同發(fā)育階段投喂情況

貝類人工育苗過程中適宜的幼蟲餌料是決定育苗成功的關(guān)鍵，孫虎山等實驗證明紫彩血蛤幼蟲發(fā)育至面盤幼蟲后添加適宜餌料，可縮短幼蟲培養(yǎng)周期，并保證幼蟲變態(tài)發(fā)育整齊。本實驗通過總結(jié)孫虎山等實驗結(jié)果結(jié)合日照地區(qū)紫彩血蛤生長狀況，探索出適宜日照地區(qū)紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的餌料投喂方法，具體情況如表2所示。試驗數(shù)據(jù)顯示，根據(jù)紫彩血蛤幼蟲發(fā)育的不同時期，混合投喂多種餌料，可以有效促進(jìn)幼蟲發(fā)育并且變態(tài)整齊，有利于后期培育。

3總結(jié)

本試驗總結(jié)的單胞藻培育技術(shù)可操作性強，培養(yǎng)速度快，不易污染，但仍需要注意消毒，尤其是接種過程中各個環(huán)節(jié)均需多次消毒。另外，利用蛋白分離器處理過濾海水后可以有效減少橈足類等對單胞藻的造成的生物污染。通過該方法培養(yǎng)的單胞藻投喂紫彩血蛤后，紫彩血蛤幼蟲發(fā)育良好，變態(tài)整齊。