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        桑葉黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

        2017-12-26 08:37:27何東與
        山西農(nóng)經(jīng) 2017年22期
        關(guān)鍵詞:半乳糖桑葉灌胃

        □何東與

        (成都七中萬達(dá)中學(xué) 四川 成都 610036)

        桑葉黃酮對衰老模型小鼠抗氧化能力影響的探究

        □何東與

        (成都七中萬達(dá)中學(xué) 四川 成都 610036)

        研究桑葉中黃酮對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響。采用連續(xù)30天腹腔注射D-半乳糖(200mg/kg)建立小鼠亞急性衰老模型。建模之后,分別灌胃低、高劑量桑葉黃酮(0.3g、0.6g/kg),同時衰老模型組和藥物治療組灌胃同等體積生理鹽水與抗壞血酸(0.5g/kg)。21天后檢測小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量。結(jié)果表明:與正常對照組相比,衰老模型組中SOD水平極顯著降低,MDA含量升高;與衰老模型組比,桑葉黃酮高劑量組可以明顯提高小鼠機(jī)體SOD活性,降低MDA含量。因此,桑葉黃酮能抑制體內(nèi)過氧化物的生成,有效清除體內(nèi)的自由基,提高衰老小鼠的抗氧化能力,為桑葉的開發(fā)與應(yīng)用提供一定依據(jù)。

        桑葉;黃酮;衰老;抗氧化

        機(jī)體的衰老是由多種因素累積而成,隨著分子生物學(xué)和醫(yī)學(xué)的迅速發(fā)展,人們對機(jī)體內(nèi)大量存在的自由基及其產(chǎn)生的危害有了越來越多的認(rèn)識[1;2]。研究表明,過量的自由基是導(dǎo)致機(jī)體衰老和死亡的重要因素之一。因此,如何清除生物體內(nèi)過量的自由基已經(jīng)成為抗衰老研究的核心問題[3]。

        桑葉中富含的多糖、黃酮、蛋白質(zhì)、氨基酸等活性成分具有降血脂、降血糖、抗凝血等作用[4;5]。黃酮類化合物是桑葉的主要功能成分之一,包括槲皮素、異槲皮素、二氫山柰素等[6-8]。目前,對于桑葉黃酮對D-半乳糖致衰老小鼠抗氧化能力的影響尚未見報道。本實(shí)驗(yàn)通過其對D-半乳糖致衰老小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量的影響,觀察其抗衰老作用,為桑葉的開發(fā)與應(yīng)用提供一定科學(xué)依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        桑葉,購自于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場,經(jīng)四川師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院植物學(xué)教研室鑒定??偟鞍诇y定試劑盒(BCA法)、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒、丙二醛(MDA)試劑盒,均購自于北京天根生化科技有限公司;其它石油醚、無水乙醇、抗壞血酸、D-半乳糖、蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品、亞硝酸鈉、硝酸鋁、NaOH等均為國產(chǎn)分析純。電子天平(賽多利斯)、燒杯、玻璃棒、超聲清洗儀(寧波新芝)、溫度計(jì)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(Buchi)、100mL容量瓶、分光光度計(jì)(AJ耶拿)。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 桑葉黃酮的提取。按照文獻(xiàn)方法提取桑葉黃酮:利用建立蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法檢測黃酮含量并配置成生藥濃度1g/mL溶液備用[4;6;9]。

        1.2.2 動物衰老模型建立。25只ICR小鼠,雄性,22-26克,購自四川省成都達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動物有限公司。小鼠自由進(jìn)食、飲水。隨機(jī)分為正常對照組(5只)與D-半乳糖組(20只),D-半乳糖組連續(xù)腹腔注射(200mg/kg)溶液30天,建立小鼠衰老模型,正常對照組腹腔注射同等體積的生理鹽水。

        1.2.3 桑葉黃酮灌胃治療。將注射D-半乳糖的20只小鼠再隨機(jī)分為4組:衰老模型組、藥物治療組、桑葉黃酮低、高劑量組。桑葉黃酮低、高劑量組按體重每天分別灌胃0.3g、0.6g/kg;藥物治療組灌胃按體重灌胃0.5g/kg抗壞血酸;衰老模型組與正常對照組給予等體積的生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥21天。灌胃結(jié)束后禁食1天,眼球采血,分離血清,按試劑盒說明書檢測血清中SOD和MDA含量。

        1.2.4 進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。采用Excel的方差分析與多重比較,數(shù)據(jù)用±s表示。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響

        與正常對照組相比,衰老模型組小鼠在持續(xù)D-半乳糖的作用下,血清的SOD活性顯著降低(P<0. 01),MDA含量升高(P<0.01),表明小鼠衰老模型建立成功。在灌胃桑葉黃酮后,與衰老模型組相比,桑葉黃酮高劑量組在SOD活性顯著升高(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05);低劑量組小鼠無明顯差異(P>0. 05)。藥物治療組小鼠血清中SOD活性較衰老模型組小鼠升高顯著(P<0.01),MDA含量降低(P<0.05),見表1。

        表1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響(±s n=5)

        表1 桑葉黃酮對小鼠血清中的SOD和MDA含量的影響(±s n=5)

        注:與正常對照組相比,** P<0.01;與衰老模型組相比,△P<0.05,△△P<0.01

        3 討論

        機(jī)體抗氧化能力的強(qiáng)弱與健康程度存在密切的關(guān)系。抗氧化酶能夠清除和分解體內(nèi)過量的O2-和H2O2等自由基,作為重要的抗氧化酶之一,SOD活性可以反應(yīng)機(jī)體的抗氧化能力[2;10]。而MDA是一種脂質(zhì)過氧化物,可反映出機(jī)體內(nèi)脂質(zhì)的過氧化程度,MDA含量的高低間接反映了機(jī)體受到自由基攻擊的嚴(yán)重程度。大量研究表明,當(dāng)機(jī)體受到自由基攻擊而被氧化時,抗氧化劑的注射和使用,使得MDA含量下降,機(jī)體抗氧化能力得到明顯增強(qiáng)[11]。

        根據(jù)衰老的代謝紊亂學(xué)說,D-半乳糖的持續(xù)注射導(dǎo)致細(xì)胞代謝紊亂,自由基氧化與抗氧化作用動態(tài)平衡失調(diào),使個體細(xì)胞易受自由基的傷害,最終導(dǎo)致機(jī)體衰老[12]。本研究中,小鼠在注射D-半乳糖后,SOD活性顯著降低,MDA含量升高,說明衰老模型建立成功。在衰老組小鼠灌胃桑葉黃酮后,與衰老模型組比較,高劑量組SOD活性顯著升高,MDA含量顯著降低,表明桑葉黃酮可顯著提高衰老小鼠機(jī)體的抗氧化能力,降低衰老小鼠脂質(zhì)過氧化物MDA含量,有效清除體內(nèi)產(chǎn)生的過量自由基,具有明顯的抗氧化作用,但其抗氧化機(jī)理仍然需要進(jìn)一步的研究。

        [1]武清芳,張秋霞.黃芪穴位注射對D-半乳糖致衰老小鼠皮膚抗氧化酶和羥脯氨酸的影響[J].中國美容醫(yī)學(xué),2012,(12):28-29.

        [2]石娜,蘇潔,楊正標(biāo),等.白術(shù)多糖對D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗氧化作用[J].中國新藥雜志,2014,(05):577-581 +584.

        [3]高璐,王瀅,饒勝其,等.葡萄籽原花青素提取物對衰老模型小鼠抗氧化作用[J].食品科學(xué),2014,(23):253-256.

        [4]陳玲玲,劉煒,陳建國,等.桑葉黃酮對糖尿病小鼠調(diào)節(jié)血糖的作用機(jī)制研究[J].中國臨床藥理學(xué)雜志,2010, (11):835-838.

        [5]孟慶海,殷秋憶,郭靜,等.4種不同桑葉提取物降血糖作用的篩選[J].中成藥,2014,(06):1288-1291.

        [6]朱玉霞,鄒德平,劉學(xué)鵬,等.桑葉黃酮對2型糖尿病大鼠胰島素抵抗影響的研究[J].四川醫(yī)學(xué),2008,(09):1114-1116.

        [7]吳雯,梁凱倫,陳波,等.桑葉提取物對食源性肥胖大鼠的減肥作用及機(jī)制研究[J].中國中藥雜志,2017,(09): 1757-1761.

        [8]呂歡,羅明琍,方飛,等.桑葉提取物抑制α-葡萄糖苷酶活性體系的優(yōu)化及動力學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2012,(01):42-44.

        [9]王珂,王瑞坡,李姣,等.桑葉黃酮對腺嘌呤誘導(dǎo)大鼠高尿酸血癥腎損傷的防治作用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2012,(02):172-175+202.

        [10]王君巧,聶少平,余強(qiáng),等.黑靈芝多糖對免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化作用[J].食品科學(xué),2012,(23):274-277.

        [11]唐靜.不同劑量川牛膝多糖對小鼠抗氧化活性的影響[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2013.

        [12]劉功成.重樓多糖對衰老模型小鼠免疫功能和抗氧化能力的影響[D].四川農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

        10.16675/j.cnki.cn14-1065/f.2017.22.061

        1004-7026(2017)22-0080-02

        R285.5

        A

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