卡力比夏提·艾木拉江，哈力旦·阿合買提，況 玲，閆書平，努爾比耶姆·圖爾蓀，趙紅瓊*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052;2.新疆喀什地區(qū)畜牧工作站，新疆喀什 844000))

溫度和中藥對馬離體小腸運動的影響

卡力比夏提·艾木拉江1，哈力旦·阿合買提2，況 玲1，閆書平1，努爾比耶姆·圖爾蓀2，趙紅瓊1*

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)學(xué)院，新疆烏魯木齊 830052;2.新疆喀什地區(qū)畜牧工作站，新疆喀什 844000))

為了探究溫度變化和中藥對馬離體小腸運動的影響，用生物信號處理系統(tǒng)監(jiān)測了浴槽不同溫度、中藥單方(陳皮和枳實)和中藥復(fù)方制劑對馬離體小腸運動的影響。結(jié)果顯示，浴槽溫度從38℃降溫到32℃過程中，小腸收縮頻率和幅度減弱，張力增加(P<0.05)；當(dāng)浴槽溫度從32℃升溫到38℃過程中，小腸收縮逐漸恢復(fù)；當(dāng)浴槽溫度從38℃升溫到41 ℃過程中，小腸收縮幅度增加，收縮頻率減慢(P<0.05)，再降溫到38℃小腸收縮可恢復(fù)。復(fù)方濃度遞增到128 μL/mL時小腸收縮幅度和收縮張力同用藥前指標(biāo)比較，差異顯著(P<0.05)。陳皮單方濃度遞增到32 μL/mL時和64 μL/mL時，小腸收縮張力同用藥前張力比較差異分別顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)；濃度遞增到64 μL/mL時，小腸收縮幅度同用藥前幅度比較，差異顯著(P<0.05)。枳實單方濃度遞增到32 μL/mL時，小腸收縮頻率和張力同用藥前指標(biāo)比較差異分別顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。研究表明，溫度降低可使馬小腸平滑肌收縮加強(qiáng)，單味陳皮和枳實以及復(fù)方中藥對馬離體小腸均有抑制作用，提示這些中藥方劑均有望用于臨床緩解馬匹腸痙攣。

溫度；中藥方劑；馬；小腸

馬屬動物腹痛即急腹癥，是馬屬動物多發(fā)的一種疾病，包括腸痙攣、腸臌脹和腸便秘等[1]。馬急腹癥主要是由于飼養(yǎng)管理粗放、飲水缺乏、氣溫驟變等，如在北方的冬季，由于氣溫低，馬極易發(fā)生腹痛[2-3]。治療該病主要采用鎮(zhèn)痛、補液、胃腸減壓和中成藥進(jìn)行胃腸調(diào)理[4]。中藥陳皮主治食欲減少、腹痛等；枳實主治食積不消、肚脹、糞便秘結(jié)等[5]。溫度及中藥方劑對馬離體小腸運動的影響尚未見報道。因而，本試驗旨在探究溫度、中藥單方和復(fù)方對馬離體小腸收縮運動的影響，以期為探究由環(huán)境溫度變化導(dǎo)致的馬屬胃腸運動異常機(jī)理及中藥治療馬屬動物腹痛病提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試驗用動物 5匹健康待屠宰伊犁公馬，來源于新疆昌吉市牛馬交易市場。

1.1.2 中藥 枳實、陳皮、桂枝、芍藥、生姜、大棗、厚樸和蒼術(shù) ，購自新疆百草堂大藥房。

1.1.3 儀器設(shè)備 四通道離體器官浴槽，美國Radnoti公司產(chǎn)品；張力換能器，MLT0201/RAD型，量程5 mg～25 g，西班牙Panlab公司產(chǎn)品；生物信號處理系統(tǒng)(Power lab 8/30，型號ML870)、橋式放大器(型號ML118)，澳大利亞ADInstruments公司產(chǎn)品。

1.2 方法

1.2.1 單方和復(fù)方中藥水提液的制備 陳皮、枳實和復(fù)方中藥(100 g復(fù)方中藥含枳實8 g、陳皮12 g、桂枝8 g、芍藥12 g、生姜8 g、大棗32 g、厚樸12 g和蒼術(shù)8 g)分別用粉碎機(jī)粉碎，按照1∶12比例浸泡在蒸餾水中6 h后，煮沸，保持微沸1 h，先后用紗布和濾紙過濾，收集濾液。反復(fù)煮沸3次，將3次濾液合并，真空濃縮為1 g生藥/mL藥液，將該水提液110℃ 20 min滅菌，置-20 ℃保存，備用。

1.2.2 溫度變化對馬離體小腸平滑肌運動的影響 放血處死的馬匹，立即剖檢，截取十二指腸，浸入Kerbs液[2](氯化鈉118 mmol/L、氯化鉀4.75 mmol/L、氯化鈣2.54 mmol/L、碳酸氫鈉25 mmol/L、葡萄糖11.1 mmol/L，硫酸鎂1.2 mmol/L，磷酸二氫鈉1.15 mmol/L)中，除去腸系膜，將腸內(nèi)容物沖洗干凈。將腸管剪成3 cm的腸段，剝離出外縱行肌備用。剝離的縱行肌一端結(jié)扎在離體器官浴槽的固定鉤上，另一端掛在張力換能器上，用生物信號處理系統(tǒng)記錄腸段收縮曲線。將浴槽內(nèi)Kerbs液溫度保持在38.0℃±0.5℃，為本試驗標(biāo)準(zhǔn)溫度(健康馬體溫中間值)。給予腸段1.0 g的基礎(chǔ)負(fù)荷，穩(wěn)定約30 min后，記錄正常收縮運動曲線。為了檢測溫度對腸運動的影響，試驗設(shè)計浴槽4個溫度段變化，即從38℃降溫至32℃，從32℃升溫至38℃，從38℃升溫至41℃和從41℃降溫至38℃。計算指標(biāo)包括收縮張力、收縮幅度和收縮頻率。

1.2.3 中藥單方和復(fù)方中藥水提液對馬離體小腸平滑肌運動的影響 將制備的中藥單方和復(fù)方中藥水提液按照濃度遞增(1、2、4、8、16、32、64、128 μL/mL)的方法加入所制備的馬離體十二指腸段浴槽的Kerbs液中，浴槽溫度為38 ℃，每次加液間隔4 min，直到劑量-反應(yīng)關(guān)系無變化后沖洗小腸3次，觀察小腸運動是否恢復(fù)到用藥前水平。計算指標(biāo)包括收縮張力、收縮幅度和收縮頻率。

1.2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計 將生物信號處理系統(tǒng)計算出的小腸收縮張力、收縮幅度和收縮頻率指標(biāo)除以變溫前或用藥前相應(yīng)指標(biāo)，再乘以100%。將百分比結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，用SPSS 21.0軟件對試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析，P<0.05表示差異顯著，P<0.01表示差異極顯著。

2 結(jié)果

2.1 溫度變化對馬離體小腸平滑肌運動的影響

從圖1可以看出，浴槽溫度從38℃降溫到32℃過程中，小腸收縮幅度減弱，張力增加；當(dāng)浴槽溫度從32℃升溫到38℃過程中小腸收縮逐漸恢復(fù)；當(dāng)浴槽溫度從38℃升溫到41℃過程中，小腸收縮幅度增加，收縮頻率減慢，再降溫到38℃小腸收縮可恢復(fù)。

圖1 溫度變化對馬離體小腸運動影響的收縮曲線

從圖2A可見，浴槽溫度從38℃降溫到32℃過程中，小腸平滑肌收縮頻率從35℃開始均較38℃減慢(P<0.05)，收縮幅度在33℃和32℃均較38℃減小(P<0.05)，收縮張力僅在32℃較38℃增加(P<0.05)。從圖2B可見，浴槽溫度從32℃升溫到38℃過程中，小腸平滑肌收縮頻率在37℃較32℃加快(P<0.05)，收縮幅度在37℃和38℃均較32℃增大(P<0.05)，而收縮張力變化不顯著(P>0.05)。從圖2C可見，浴槽溫度從38℃升溫到41℃過程中，小腸平滑肌收縮幅度在41℃較38℃增大(P<0.05)，收縮頻率和張力變化不顯著(P>0.05)。從圖2D可見，浴槽溫度從41℃降溫到38℃過程中，小腸平滑肌收縮幅度在39℃和38℃均較41℃減小(P<0.05)，收縮張力在38℃較41℃減弱(P<0.05)，收縮頻率變化不顯著(P>0.05)。

2.2 單方及復(fù)方中藥對馬離體小腸平滑肌運動的影響

復(fù)方中藥(圖3A)用藥后小腸收縮幅度劑量依賴性減小，頻率減慢，而單味陳皮(圖3B)和枳實(圖3C)濃度遞增中，一次加藥后短時間內(nèi)均出現(xiàn)小腸收縮張力增加，幅度增大，之后抑制的現(xiàn)象，但是陳皮表現(xiàn)出使小腸興奮后的抑制時間更長(圖3B)。

從圖4A可見，小腸收縮幅度和收縮張力在復(fù)方濃度遞增到128 μL/mL時同用藥前比較，差異顯著(P<0.05)。從圖4B可見，小腸收縮張力在陳皮單方濃度遞增到32 μL/mL和64 μL/mL時同用藥前張力比較，差異分別顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)；小腸收縮幅度在濃度遞增到64 μL/mL時同用藥前幅度比較，差異顯著(P<0.05)。從圖4C可見，小腸收縮頻率和張力在枳實單方濃度遞增到32 μL/mL時同用藥前指標(biāo)比較，差異分別顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。

A.38 ℃→32℃;B.32℃→38℃;C.38℃→41℃;D.41℃→38℃，縱坐標(biāo)為收縮指標(biāo)同初始溫度指標(biāo)的百分比；當(dāng)統(tǒng)計指標(biāo)同初始溫度相應(yīng)指標(biāo)差異顯著時標(biāo)記顯示為空白，P<0.05

A.38℃→32℃;B.32℃→38℃;C.38 ℃→41℃;D.41℃→38℃，Ordinate is the percentage of shrinkage index with initial temperature index；When the statistic index is siginificantly different from the corresponding index of the initial temperature, the mark is open(P<0.05)

圖2溫度變化對馬十二指腸平滑肌運動的影響

Fig.2 Effect of temperature changes on the motility of equine duodenum

A.復(fù)方中藥;B.陳皮；C.枳實

A.Compound traditional Chinese medicine;B.Pericarpium citri reticulatae;C.Fructus aurantii immaturus

圖3濃度遞增的中藥單方和復(fù)方提取物對馬離體小腸收縮曲線

Fig.3 Contraction curves of equine small intestines treated by increasing concentrations of traditional Chinese medicine extractinvitro

A.復(fù)方中藥;B.陳皮;C.枳實

A.Compound traditional Chinese medicine;B.Pericarpium citri reticulatae;C.Fructus aurantii immaturus

圖4單方及復(fù)方中藥提取物對馬離體小腸收縮頻率、幅度和張力的影響

Fig.4 Effect of compound traditional Chinese medicine on contractive frequency,amplitude and tension of equine small intestineinvitro

3 討論

本試驗結(jié)果顯示，當(dāng)溫度在32℃和41℃之間變化時，馬離體小腸運動的收縮頻率和幅度同溫度變化呈正相關(guān)，而收縮張力同溫度變化呈負(fù)相關(guān)。胃腸平滑肌的運動屬于一種肌源性活動，當(dāng)機(jī)體外環(huán)境變化，如氣溫降低時，體表感受到的環(huán)境溫度降低，可通過傳入神經(jīng)到達(dá)中樞，中樞通過整合后發(fā)出神經(jīng)沖動，使胃腸平滑肌收縮頻率減慢[3,6]，與本試驗結(jié)果基本一致。在本研究中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)溫度從38℃降溫到32℃時，小腸平滑肌收縮幅度減弱，張力增加。呂錦芳等[7]報道，低溫超過動物機(jī)體的正常溫度調(diào)節(jié)范圍，造成收縮相關(guān)蛋白或酶系統(tǒng)活動力減弱或變形，與本試驗結(jié)果基本相一致。

通過濃度遞增試驗結(jié)果可知，復(fù)方中藥、陳皮和枳實對馬離體小腸收縮均有抑制作用，枳實抑制作用最強(qiáng)。當(dāng)濃度遞增到32 μL/mL時較用藥前指標(biāo)，差異顯著(P<0.05)。陳皮濃度遞增到64 μL/mL時較用藥前指標(biāo)，差異顯著(P<0.05)。中藥復(fù)方濃度遞增到128 μL/mL時較用藥前指標(biāo)，差異顯著(P<0.05)。目前尚未查閱到關(guān)于陳皮、枳實及復(fù)方中藥提取物對馬離體小腸藥效影響的報道，但李慶耀等[8]報道，陳皮對兔離體回腸運動的自發(fā)性抑制率較高，張啟榮等[9]報道，枳實煎劑對兔離體十二指腸運動有抑制作用，與本試驗陳皮、枳實和復(fù)方中藥對小腸收縮運動有抑制作用基本一致。而本研究發(fā)現(xiàn)，單味陳皮和枳實以及復(fù)方中藥對馬離體小腸均有抑制作用。

環(huán)境溫度變化在一定范圍內(nèi)機(jī)體可通過自身代謝活動的調(diào)節(jié)進(jìn)行補償，以維持機(jī)體活動的穩(wěn)態(tài)[10]，但是當(dāng)溫度變化幅度大、時間長時，機(jī)體不能完全自身調(diào)節(jié)，而表現(xiàn)活動異常，甚至表現(xiàn)疾病；當(dāng)動物機(jī)體受寒冷刺激時，引起胃腸平滑肌痙攣收縮，而出現(xiàn)腸痙攣[11]。溫度過高會對動物機(jī)體產(chǎn)生熱應(yīng)激，熱應(yīng)激引起生產(chǎn)性能下降，嚴(yán)重時會使胃腸黏膜受到損傷，導(dǎo)致消化系統(tǒng)的消化和吸收功能障礙[12]。方解分析可知，復(fù)方中藥中的藥物本身單獨對動物消化系統(tǒng)疾病有一定的作用。復(fù)方中藥中的陳皮主治食欲減少、腹痛等；枳實主治食積不消、肚脹、糞便秘結(jié)等；大棗主治脾虛少食、便溏等、厚樸主治宿食不消、食積氣滯、肚脹便秘等；桂枝主治水濕停滯等、蒼術(shù)主治泄瀉、風(fēng)寒濕痹等、生姜主治胃寒嘔吐等[5]。因此，本試驗研究可為分析低溫環(huán)境造成馬屬動物腹痛機(jī)理提供參考，也可為中藥治療馬屬動物腹痛病提供參考。

本研究表明，馬小腸平滑肌收縮頻率隨著溫度升高而加快，但收縮張力和幅度降低；單味陳皮和枳實以及復(fù)方中藥對馬離體小腸均有抑制作用，提示這兩味中藥和復(fù)方中藥均有望用于緩解馬匹腸痙攣的治療。

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EffectsofTemperatureandTraditionalChineseMedicineonMovementofSmallIntestineofHorseinVitro

Kalibixiati·Aimulajiang1,Halidan·Ahemaiti2,KUANG Ling1,YAN Shu-ping1,Nuerbiyemu·Tuersun2,ZHAO Hong-qiong1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine,XinjiangAgriculturalUniversity,Urumqi,Xinjiang,830052,China; 2.XinjiangKashiPrefectureLivestockStation,Kashi,Xinjiang,844000,China)

In order to explore the effects of temperature changes and traditional Chinese medicine prescriptions on intestinal movement of the horseinvitro,the biological signal processing system was used to monitor the effect of different temperature of bath,unilateral (Pericarpium citri reticulatae and Fructus aurantii immaturus) and Chinese herbal compound preparation on the movement of small intestineinvitro.The results showed that the frequency and amplitude of small intestinal contraction decreased and the tension increased with the bath temperature changed from 38℃ to 32℃ (P<0.05).When the bath temperature rose from 32℃ to 38℃,the small intestine contraction gradually recovered;when the trough temperature rose from 38℃ to 41℃,the small intestine contraction amplitude increased,the contraction frequency slowed down (P<0.05),then temperature reduced to 38℃,small intestine contraction may restore.The small intestine contraction amplitude and contraction tension were significantly different from that of 128 μL/mL when the compound concentration increased to the level of the drug (P<0.05).When the concentration of Pericarpium citri reticulatae was increased to the 32 μL/mL and 64 μL/mL,the tension of small intestine promoted significantly(P<0.05) and extremely significantly(P<0.01).But as the concentration of Pericarpium citri reticulatae was increased to 64 μL/mL,the small intestine contraction amplitude was significantly stronger than before(P<0.05).The difference of the small intestine contraction amplitude and contraction tension with the preoperative indexes was significant (P<0.05) and very significant (P<0.01) when the concentration of Fructus aurantii immaturus was increased to 32 μL/mL.The present results demonstrated that the decrease of temperature could strengthen the contraction of horse small intestine smooth muscle.And Pericarpium citri reticulatae,Fructus aurantii immaturus and Chinese herbal compound preparation have inhibitory effect on the horse small intestineinvitro,suggesting that these prescriptions could be used to relieve the horse intestinal spasm.

temperature;Chinese herbal compound preparation;small intestine;horse

2016-09-04

國家科技支撐計劃項目(2012BAD46B02)

卡力比夏提·艾木拉江(1992-)，男，新疆伊寧人，碩士，主要從事生物活性物質(zhì)功能研究。*

S852.33;S853.74

:A

:1007-5038(2017)09-0073-05