孫艷 安扎拉/四川省涼山州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所陳朝喜/西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院

成都地區(qū)犬大腸桿菌的分離鑒定及藥物敏感性試驗(yàn)

孫艷 安扎拉/四川省涼山州畜牧獸醫(yī)科學(xué)研究所陳朝喜/西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院

大腸桿菌是人類和動物常見的腸道微生物，在維持腸道正常生理機(jī)能上起重要作用，也是引起多種疾病的病原體，包括胃腸、泌尿道的感染和敗血癥，給人和動物的生命帶來威脅。在物質(zhì)生活極豐富的現(xiàn)今社會，隨著生活結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)變，越來越多的人將情感寄托在寵物身上，他們已經(jīng)把寵物作為家庭的一員，而寵物中尤以犬最多。犬大腸桿菌病的治療方法很多，關(guān)鍵是要早發(fā)現(xiàn)、早治療，治療常用抗生素和磺胺類以及其它消炎止瀉的藥物。近年來，抗菌藥物的廣泛使用和運(yùn)用不當(dāng)或者是濫用的情況，引起大腸桿菌的耐藥菌株越來越多，因?yàn)榇竽c桿菌對藥物的選擇壓力很敏感，易產(chǎn)生耐藥性，使得臨床工作者對這類疾病的防治越來越難。本試驗(yàn)通過對成都市寵物醫(yī)院和寵物市場采集的犬糞便樣品做分離、培養(yǎng)、純化、生化鑒定大腸桿菌，并進(jìn)行藥敏試驗(yàn)研究，為臨床選擇抗菌藥物治療犬大腸桿菌病和耐藥性監(jiān)測提供有力依據(jù)。

一、材料和方法

1.材料

（1）樣本

2010年采自成都市2家寵物醫(yī)院和2個寵物市場的犬糞便，犬的種類分別為貴賓，博美，松獅，北京犬，牧羊，薩摩耶，哈士奇，藏獒，雜種犬等，年齡在30日齡到十歲不等。

（2）藥物

頭孢曲松購自中諾藥業(yè)有限公司，慶大霉素購自鄭州鈴銳有限公司，妥布霉素購自太極集團(tuán)西南藥業(yè)，左旋氧氟沙星購自德陽華庚藥業(yè)有限公司，小諾霉素購自江西制藥有限公司，氟苯尼考和磺胺間甲氧嘧啶購自南京金盾藥業(yè)有限公司，林可霉素購自江蘇吳中藥業(yè)有限公司。

2.方法

（1）大腸桿菌的分離和鑒定

方法，將純化后的革蘭氏陰性短桿菌的單菌落，接種于LB肉湯，37℃培養(yǎng)16～18 h，取菌液5～10μl，接種于腸桿菌科細(xì)菌生化編碼微量鑒定管中，氨基酸和氨基酸對照滴加石蠟1～2滴，37℃培養(yǎng)24 h后，對菌株的生化結(jié)果進(jìn)行判斷并編碼，按編碼值檢索腸桿菌科細(xì)菌生化編碼表進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

（2）藥敏片的制作

將定性濾紙用普通打孔器打成直徑為6 mm的圓形紙片，取800片分別放入8個干燥的小瓶中（每瓶100片），以單層牛皮紙包扎好，115℃高壓滅菌20 min后，置于37℃培養(yǎng)箱中數(shù)天使其完全干燥；在操作臺中，按照100片紙片吸收0．4μL水的比例加入配好的藥液400μL；不時翻動紙片，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡30 min即可，同時記錄藥物名稱，于37℃培養(yǎng)箱中過夜。

（3）藥物敏感性試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法進(jìn)行藥物敏感性檢測，按照美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CLSI）推薦的操作程序進(jìn)行，參照CLSI的標(biāo)準(zhǔn)判斷耐藥、敏感或中介，同時用大腸桿菌ATCC 25 922 作為質(zhì)控菌株。質(zhì)控菌株大腸桿菌由西南民族大學(xué)藥理實(shí)驗(yàn)室提供

表1 145株犬大腸桿菌對抗菌藥物的敏感性

二、結(jié)果

1.大腸桿菌的分離和鑒定

從200個樣本中共分離鑒定大腸桿菌145株，每只動物僅分離1株大腸桿菌。

2.藥敏試驗(yàn)結(jié)果

145株大腸桿菌對8種抗菌藥物的耐藥情況見表1。如表1所示，大腸桿菌對8種抗菌藥物的耐藥率都高，其中對林可霉素耐藥率最高，達(dá)到84．7%，對左旋氧氟沙星的耐藥率為80．0%，對其余6種藥物耐藥率也超過50%，對頭孢曲松、慶大霉素、妥布霉素、小諾霉素、氟苯尼考和磺胺間甲氧嘧啶的耐藥率分 別 為 57．9%、67．6%、72．4%、、63．4%、79．3%、和56．6%。

145株分離的犬大腸桿菌全部對至少3種藥物耐藥，除7株大腸桿菌對3種抗菌藥耐藥外，其余138株對4種以上抗菌藥有耐藥性，有26株大腸桿菌同時耐8種藥物。4種藥物耐藥菌株為33株（22．76%），5種藥物耐藥菌株為7株（4．83%），6種藥物耐藥菌株為46株（31．72%），7種藥物耐藥菌株為26株（17．93%）。

三、小結(jié)

國內(nèi)已有關(guān)于寵物源細(xì)菌耐藥性的報道，不同地區(qū)的寵物源細(xì)菌耐藥情況不同，但耐藥細(xì)菌呈現(xiàn)多重耐藥，并且對抗菌藥的耐藥呈上升趨勢。本研究藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明，分離的犬大腸桿菌對多種抗菌藥物產(chǎn)生耐藥性，其中大腸桿菌對頭孢曲松、慶大霉素、左旋氧氟沙星和氟苯尼考的耐藥率高于相關(guān)文獻(xiàn)報道，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于歐美國家對寵物源細(xì)菌耐藥性調(diào)查結(jié)果。

目前，動物源細(xì)菌耐藥性問題已引起全世界的廣泛關(guān)注，中國、美國、加拿大、丹麥、日本、韓國、歐盟等國家建立了細(xì)菌耐藥性監(jiān)測系統(tǒng)，但我國只對食源動物細(xì)菌耐藥性監(jiān)測。犬作為伴侶動物，與人接觸親密，他們共同生活的環(huán)境是細(xì)菌傳播的條件，犬作為細(xì)菌儲存庫，是細(xì)菌傳播的中介。已報道的美國有一病例，寵物主人被有抗菌藥物治療史的犬咬后，發(fā)現(xiàn)感染了來自犬的多重耐藥大腸桿菌，也有研究證實(shí)從一3歲兒童分離的大腸桿菌與從他家腹瀉犬分離的大腸桿菌完全一致，還有就是人源氟喹諾酮類藥物耐藥豬霍亂沙門氏菌來源于豬，表明食源動物和人，寵物與人之間發(fā)生了耐藥菌株的克隆傳播，說明耐藥菌株可將耐藥基因轉(zhuǎn)移至人體引發(fā)疾病，對人體健康構(gòu)成潛在危害。因此相關(guān)部門應(yīng)重視寵物耐藥性問題，加強(qiáng)寵物臨床抗菌藥物應(yīng)用的監(jiān)督，制訂藥物使用規(guī)范，以指導(dǎo)臨床合理用藥。

參考文獻(xiàn)（略）