楊 霞，馮 鋒,,*，劉荔貞，陳澤忠

（1.山西師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，山西 臨汾 041000；2.山西大同大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，山西 大同 037009）

高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法同時檢測3 個產(chǎn)地沙棘果粉中的活性物質(zhì)

楊 霞1，馮 鋒1,2,*，劉荔貞2，陳澤忠2

（1.山西師范大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，山西 臨汾 041000；2.山西大同大學(xué)化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，山西 大同 037009）

利用高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法，對3 個產(chǎn)地沙棘果粉中的蘆丁、山柰酚、異鼠李素、槲皮素4 種活性物質(zhì)進(jìn)行同時分離測定?？疾觳煌娪緱l件對分離效率的影響，得出最佳電泳條件：緩沖溶液20 mmol/L Na2B4O7-H3BO3（質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL的β-環(huán)糊精），pH 9.55，檢測波長370 nm，分離電壓25 kV，進(jìn)樣時間5 s。在該條件下，蘆丁、山柰酚、異鼠李素、槲皮素4 種活性物質(zhì)在11 min內(nèi)得到分離，線性范圍分別為0.01～0.51、0.05～0.93、0.02～0.65、0.03～0.81 mg/mL，相關(guān)系數(shù)在0.997 1～0.999 1之間，檢出限分別為5.05×10-5、2.10×10-5、3.75×10-5、1.31×10-5mg/mL（RSN=3），各物質(zhì)線性關(guān)系良好。日內(nèi)及日間精密度范圍為0.08%～4.72%，平均回收率在95.51%～104.66%之間，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差不大于3.92%（n=3）。在優(yōu)化條件下，對4 種活性物質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品的混合物進(jìn)行測定，并用相同方法對3 個產(chǎn)地沙棘果粉中活性物質(zhì)的提取液進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：不同產(chǎn)地沙棘中，4 種被檢測化合物的含量各不相同。沙棘中被測4 種化合物總量最高的產(chǎn)自新疆烏魯木齊，最低的產(chǎn)自甘肅武威，而槲皮素含量以產(chǎn)自山西呂梁的最高，山柰酚和異鼠李素以產(chǎn)自新疆烏魯木齊最高。本方法快速簡便、準(zhǔn)確可靠，可用于沙棘果粉中多種活性物質(zhì)的同時檢測。

高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳；蘆丁；山柰酚；異鼠李素；槲皮素；沙棘

沙棘，又名酸刺、醋柳、黑刺，是一種多分布于西北、華北、西南等干旱、貧瘠地區(qū)的落葉性灌木植物。沙棘生命力強(qiáng)，耐寒、耐旱，在我國分布范圍廣，可用于沙漠綠化、防止水土流失。我國是沙棘資源最大、醫(yī)用記載最早的國家[1-2]。在我國古代，沙棘常用于中藥、藏藥、蒙藥中?，F(xiàn)今，則作為一種藥食同源植物被廣泛應(yīng)用。大量文獻(xiàn)報道了沙棘中的化學(xué)成分及其功效，沙棘中含有糖類、維生素、氨基酸、有機(jī)酸、脂肪酸及微量元素等[3-7]多種化學(xué)成分；其中，異鼠李素主要來源于胡頹子科植物沙棘中，它具有止咳祛痰，活血化瘀等功效[8-10]；此外，沙棘中也含有蘆丁、山柰酚和槲皮素等酚類化合物，這些化合物能起到抗輻射氧化[11-13]、抗菌消炎[14-15]、調(diào)節(jié)血脂[16]、保護(hù)肝臟[17]、預(yù)防心腦血管疾病[18]及抗抑郁[19]等多種藥理作用，在食品、保健品、藥品、化妝品等多種領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景和高附加的開發(fā)價值[20-21]。

目前，對沙棘中活性物質(zhì)的測定方法有薄層色譜（thin layer chromatography，TLC）法[22-23]，分光光度法[24]，高效液相色譜（high performance liquid chromatography，HPLC）法[25-26]等，TLC法雖然操作方便，但測定結(jié)果的準(zhǔn)確度低，用該方法測定具有一定的局限性；分光光度法因樣品純化度低，含有雜質(zhì)干擾，導(dǎo)致分析結(jié)果產(chǎn)生較大偏差；HPLC法則具有成本較高，操作過程繁瑣，分析時間較長等弊端。毛細(xì)管電泳技術(shù)具有柱效高，進(jìn)樣量少，靈敏度高，運(yùn)行成本低等優(yōu)點，因而被廣泛應(yīng)用到分離檢測，本實驗采用高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳（high performance capillary zone electrophoresis，HPCZE）法，對3 個產(chǎn)地沙棘果粉中的活性物質(zhì)進(jìn)行分離檢測，在優(yōu)化條件的基礎(chǔ)上，建立了一種同時測定沙棘果粉中多種活性物質(zhì)的新方法，為不同產(chǎn)地沙棘的質(zhì)量評價提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

不同產(chǎn)地沙棘果粉（新疆烏魯木齊、甘肅武威、山西呂梁） 市售。

蘆丁、山柰酚、異鼠李素、槲皮素對照品（純度≥98.0%） 上海阿拉丁生化科技股份有限公司；硼砂、硼酸（均為分析純） 天津市化學(xué)試劑三廠；氫氧化鈉（分析純） 天津市化學(xué)試劑批發(fā)公司；甲醇（分析純） 天津市化學(xué)試劑供銷公司；β-環(huán)糊精 上海化學(xué)試劑采購供應(yīng)站；實驗用水均為超純水。

1.2 儀器與設(shè)備

P/ACETMMDQ高效毛細(xì)管電泳儀（包括二極管陣列檢測器和32Karat7.0數(shù)據(jù)處理軟件） 美國Beckman公司；未涂層柔性石英毛細(xì)管（60 cm×75 μm i.d.，有效長度50 cm） 河北省邯鄲市鑫諾光纖色譜有限公司；KQ5200DA型數(shù)控超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；AP250D型分析天平 美國Ohaus公司；Lambda35型紫外-可見分光光度計 美國PerkinEimer公司；PHS-25型雷磁精密酸度計 上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司；TGL-16C高速離心機(jī) 菏澤石油化工學(xué)校儀器設(shè)備廠；Direct-Q 3UV型超純水機(jī) 美國Millipore公司；0.22 μm一次性針頭過濾器（有機(jī)系、水系）天津津騰實驗設(shè)備廠。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

精密稱量蘆丁、山柰酚、異鼠李素、槲皮素對照品適量，用甲醇溶解并定容配制為1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備液。用0.22 μm的一次性有機(jī)系針孔過濾器過濾，置于冰箱中冷藏保存。

1.3.2 樣品溶液的制備

準(zhǔn)確稱量沙棘果粉5.0 g于50 mL燒杯中，加入20 mL甲醇搖勻并封口，超聲提取30 min，冷卻至室溫后，用甲醇補(bǔ)足減少的質(zhì)量，以8 000 r/min高速離心10 min，取上清液，再加入38%鹽酸溶液0.5 mL于75 ℃水浴水解30 min，冷卻后用0.22 μm一次性有機(jī)系針孔過濾器過濾2 次，置于冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3.3 電泳條件

新毛細(xì)管在使用前，用1 mol/L NaOH溶液、超純水各沖洗30 min；再用背景緩沖溶液沖洗40 min。每天毛細(xì)管首次使用前，用1 mol/L NaOH溶液、超純水和緩沖溶液各沖洗5 min。2 次分析間隔用1 mol/L NaOH溶液沖洗3 min，再用超純水和緩沖溶液分別沖洗5 min，以提高重復(fù)性。所有溶液在進(jìn)樣前用0.22 μm一次性針頭過濾器過濾，并超聲脫氣10 min。實驗結(jié)束后，依次用1 mol/L NaOH溶液和超純水分別沖洗5 min。

電泳條件：進(jìn)樣方式為壓力進(jìn)樣，進(jìn)樣時間5 s；分離及檢測條件：檢測波長370 nm，分離電壓25 kV，毛細(xì)管柱溫25 ℃，運(yùn)行緩沖溶液20 mmol/L Na2B4O7-H3BO3，質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL的β-環(huán)糊精，pH 9.55。

2 結(jié)果與分析

2.1 紫外吸收光譜的測定

取適當(dāng)質(zhì)量濃度的蘆丁、山柰酚、異鼠李素、槲皮素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，分別在波長200～450 nm范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，各組分的吸收波長均不相同，但發(fā)現(xiàn)在波長370 nm處吸收最大。因此，選擇370 nm作為檢測波長。

2.2 電泳分離條件的優(yōu)化

圖1 4 種化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式Fig. 1 Chemical structures of four compounds

高效毛細(xì)管電泳是離子或荷電粒子以高壓電場為驅(qū)動力，在毛細(xì)管中按其淌度或分配系數(shù)的不同進(jìn)行高效、快速分離的一種新型電泳分離技術(shù)。實驗中測到的4 種活性物質(zhì)的結(jié)構(gòu)如圖1所示，這幾種化合物分子內(nèi)都具有酚羥基，本身是電中性的，在電場中不移動，但在堿性條件下可以離解而帶負(fù)電荷，樣品在電解液中泳動，對樣品的分析是基于樣品荷質(zhì)比的差異來進(jìn)行分離，4 種物質(zhì)在毛細(xì)管中的遷移方向與電滲流方向相反，比值越大，向陽極的遷移速度越快，在電滲流的驅(qū)動下，遷移到檢測器端口的時間越長。對這4 種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行混合測定，其出峰的先后順序依次為蘆丁、山柰酚、異鼠李素和槲皮素。

2.2.1 柱溫和分離電壓對分離的影響

控制毛細(xì)管柱溫可以調(diào)節(jié)電滲流（electroosmotic flow，EOF）的大小，可以改善分離效率和分離的重復(fù)性。毛細(xì)管溫度的變化會影響分離效率、黏度、遷移時間和進(jìn)樣體積等。柱溫恒定，可以保證毛細(xì)管內(nèi)產(chǎn)生的焦耳熱及時散失，確保毛細(xì)管的均衡穩(wěn)定。EOF增大，緩沖溶液的黏度降低，管壁SiO2-解離能力增強(qiáng)，EOF增大，遷移速率增大，有利于分析物在較短時間內(nèi)得到分離；但柱溫太高，會產(chǎn)生太多的焦耳熱，會使基線噪音增大，柱效下降，分離效果變差。因此，本實驗選擇在室溫25 ℃條件下，進(jìn)行電泳分析。

圖2 分離電壓對4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品分離的影響Fig. 2 Influence of applied voltage on the separation of four standard compounds

分離電壓決定電場強(qiáng)度，電場強(qiáng)度會影響峰電流和遷移速率。分離電壓增加，峰電流增大，遷移時間有所縮短，分離度增加。但太大的電壓可能會出現(xiàn)受焦耳熱影響而出現(xiàn)的峰展寬或變形現(xiàn)象。本實驗在分離電壓為20、25、28、30 kV條件下，考察了4 種分析物的分離情況，如圖2所示。當(dāng)分離電壓20 kV時，各組分會出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，不利于樣品準(zhǔn)確分析；隨著分離電壓的逐漸增大，遷移時間逐漸縮短，當(dāng)分離電壓為25 kV時，4 種分析物在較短的時間內(nèi)達(dá)到基線分離；分離電壓繼續(xù)增大，蘆丁和山柰酚分離不完全，當(dāng)電壓為30 kV時，基線噪音增加。綜合考慮上述因素，選擇25 kV作為本實驗的分離電壓。

2.2.2 緩沖溶液濃度對電泳的影響

圖3 運(yùn)行緩沖溶液濃度對4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品分離的影響Fig. 3 Influence of running buffer concentration on the separation of four standard compounds

緩沖溶液濃度會影響溶液的黏度，分析物的擴(kuò)散以及Zeta電勢。Zeta電勢的變化會影響到EOF，進(jìn)而影響遷移時間。隨著緩沖溶液濃度增大，高濃度的硼酸鹽會將分析物結(jié)構(gòu)中的—O—轉(zhuǎn)化成帶負(fù)電荷的絡(luò)合物形式，根據(jù)其荷質(zhì)比得以分離，分離度逐漸增大，EOF也增大。但濃度太大，電流過大，焦耳熱效應(yīng)增加，引起峰形展寬，信噪比降低，而且遷移時間延長，分離效率降低。本實驗考察了硼砂（Na2B4O7）-硼酸（H3BO3）緩沖溶液濃度為10、20、30、40 mmol/L時，4 種分析物的分離情況，如圖3所示，當(dāng)緩沖溶液濃度為10 mmol/L時，蘆丁和山柰酚不能很好的分離；緩沖溶液濃度為20、30 mmol/L時，雖然4 種物質(zhì)都能較好的分離，但緩沖溶液濃度為30 mmol/L時，遷移時間相對較長，濃度繼續(xù)增大，當(dāng)濃度為40 mmol/L時，異鼠李素和槲皮素分離度降低。從分離時間和分離度綜合考慮，最終確定20 mmol/L Na2B4O7-H3BO3為最佳緩沖溶液濃度。

2.2.3 緩沖溶液pH值對電泳的影響

圖4 運(yùn)行緩沖溶液pH值對4種化合物標(biāo)準(zhǔn)品分離的影響Fig. 4 Influence of running buffer pH on the separation of four standard compounds

毛細(xì)管電泳法的主要驅(qū)動力是EOF，而緩沖溶液pH值的變化對EOF的影響較大，主要通過影響組分的存在形式、解離程度、離子化程度等，從而改變體系的EOF。本實驗分離這4 種活性物質(zhì)選擇在Na2B4O7-H3BO3緩沖溶液中進(jìn)行，一方面是因為所檢測的活性物質(zhì)在該緩沖溶液中會形成絡(luò)合物；另一方面是由于在堿性條件下，結(jié)構(gòu)中的羥基可以發(fā)生解離。pH值太高，會使分離時間延長，電滲流增大，峰的分辨發(fā)生改變。因此，最佳pH值條件需要通過實驗來優(yōu)選。本實驗考察了硼酸鹽緩沖溶液pH值在9.15～9.65之間對4 種分析物分離的影響。如圖4所示。當(dāng)pH值為9.15時，蘆丁和山柰酚不能分離，pH值為9.35時，蘆丁和山柰酚分離不完全，當(dāng)pH值為9.65時，遷移時間延長，峰形展寬。結(jié)果表明，當(dāng)緩沖溶液pH值為9.55時，分離效果最佳。

2.2.4 β-環(huán)糊精加入量對電泳的影響

圖 5β-環(huán)糊精加入量對4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品分離的影響Fig. 5 Influence of addition of β-cyclodextrin on the separation of four standard compounds

緩沖溶液中適當(dāng)?shù)募尤胩砑觿?，可以改變?nèi)芤旱臉O性，有利于改善峰形，提高分離效率。β-環(huán)糊精以其高度的選擇性和良好的穩(wěn)定性常用作緩沖溶液添加劑。β-環(huán)糊精的加入，會使分析物與β-環(huán)糊精之間通過非價鍵力形成主客體包合物，整個結(jié)構(gòu)外部親水，內(nèi)部形成空腔疏水。這種特殊的結(jié)構(gòu)會降低EOF，增加分離的有效距離，進(jìn)而改變遷移速率，從而實現(xiàn)較好分離。在其他條件一定的情況下，本實驗考察了在添加不同質(zhì)量濃度（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/mL）的β-環(huán)糊精后，4 種分析物的分離情況，如圖5所示。當(dāng)β-環(huán)糊精為0.5 mg/mL時，蘆丁和山柰酚不能完全分離，異鼠李素峰形較差；當(dāng)添加1.0 mg/mL和2.0 mg/mL的β-環(huán)糊精時，4 種分析物均不能完全分離，且峰形都變差。因此，β-環(huán)糊精的最佳質(zhì)量濃度為1.5 mg/mL。

2.2.5 進(jìn)樣時間對電泳的影響

圖6 進(jìn)樣時間對4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品分離的影響Fig. 6 Influence of injection time on the separation of four standard compounds

進(jìn)樣時間會影響樣品的進(jìn)樣量，進(jìn)而影響到樣品在毛細(xì)管中的擴(kuò)散。通過選擇合理的進(jìn)樣時間也可以改善分離效果。進(jìn)樣時間太短，會導(dǎo)致峰面積太小，分析誤差大。本實驗考察了進(jìn)樣時間在3～7 s范圍內(nèi)對4 種分析物分離測定的影響，如圖6所示。進(jìn)樣時間小于5 s時，進(jìn)樣量少，出峰不明顯。隨著進(jìn)樣時間的延長，當(dāng)進(jìn)樣時間大于5 s時，峰形展寬，峰拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重。綜合考慮，選擇5 s作為最佳進(jìn)樣時間。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立及檢出限結(jié)果

表1 4 種化合物的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限Table 1 Linear equations, correlation coefficients, linearity ranges and limits of detection for four compounds

用甲醇分別稀釋4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)液，配制一系列質(zhì)量濃度溶液，在優(yōu)化的實驗條件下依次進(jìn)行電泳分析測定，以各標(biāo)準(zhǔn)品的質(zhì)量濃度（mg/mL）為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)作線性回歸，得到的線性方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限如表1所示，相關(guān)系數(shù)范圍為0.997 1～0.999 1，檢出限的范圍為1.31×10－5～5.05× 10－5mg/mL（RSN=3）。結(jié)果表明，該方法靈敏度較高，線性關(guān)系良好，可用于實際樣品的測定。

2.4 精密度測定結(jié)果

表2 精密度實驗（n=3）Table 2 Relative standard deviations for inter-day and intra-day precision (n=3)

在最佳電泳條件下，對該方法用于檢測4 種化合物的精密度進(jìn)行考察。分別取4 種標(biāo)準(zhǔn)樣品各60 μL均勻混合，日內(nèi)連續(xù)進(jìn)樣3 次，日間進(jìn)樣為每天的同一時間點，3 d完成。根據(jù)所測得結(jié)果，計算日內(nèi)、日間遷移時間精密度（相對標(biāo)準(zhǔn)偏差，relative standard deviation，RSD）和峰面積精密度。如表2所示，日內(nèi)遷移時間RSD不大于0.20%，峰面積RSD不大于1.06%；日間遷移時間RSD不大于1.77%，峰面積RSD不大于4.72%。由此說明，該方法精密度較為良好。

2.5 加標(biāo)回收率測定結(jié)果

按照1.3.2節(jié)的方法制備3 種產(chǎn)地沙棘實際樣品，取一定量的樣品3 份，分別加入低、中、高對應(yīng)含量的標(biāo)準(zhǔn)品，在最佳電泳條件下平行測定3 次，計算加標(biāo)回收率，結(jié)果見表3，回收率在95.51%～104.66%之間，RSD不大于3.92%。說明該方法對于測定沙棘樣品具有較好的可行性。

表3 樣品加標(biāo)回收率實驗（n=3）Table 3 Recoveries for spiked samples (n=3)

2.6 實際樣品分析

2.6.1 定性分析

圖7 4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品混合物（A）、不同產(chǎn)地沙棘樣品（B）和實際樣品（C）電泳圖Fig. 7 HPCZE profiles of mixed standard compounds (A), and unspiked (B) and spiked (C) sea burkthorn from different geographic regions

在最佳測定條件下對實際樣品和4 種化合物標(biāo)準(zhǔn)品混合物測定分析，如圖7A、B所示，根據(jù)遷移時間確定樣品中各成分對應(yīng)的峰。通過對比，證明實際樣品中含有檢測的4 種化合物。進(jìn)一步驗證，本實驗采用標(biāo)準(zhǔn)加入法確定樣品中確實含有要檢測的4 種化合物，如圖7C所示，在實際樣品中分別添加一種標(biāo)準(zhǔn)品后，只有對應(yīng)的電泳峰有明顯的升高而沒有引起其他變化，說明實際樣品中確實含有檢測的4 種化合物。

2.6.2 定量分析

表4 不同產(chǎn)地沙棘樣品中化合物含量的測定結(jié)果（n=3）Table 4 Contents of the compounds in seabuckthorn from different regions (n=3)

按照1.3.2節(jié)的方法分別對產(chǎn)自新疆烏魯木齊、甘肅武威、山西呂梁的沙棘樣品進(jìn)行處理，將處理后的樣品連續(xù)進(jìn)樣3 次，平均測定結(jié)果如表4所示。不同產(chǎn)地沙棘中，4 種被檢測化合物的含量各不相同。沙棘中被測4 種化合物總量最高的產(chǎn)自新疆烏魯木齊，最低的產(chǎn)自甘肅武威，而槲皮素含量以來自山西呂梁的最高，山柰酚和異鼠李素以來自新疆烏魯木齊最高。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)[27-28]報道，沙棘中活性物質(zhì)的含量會因產(chǎn)地、土壤含水量、光照強(qiáng)度以及成熟度的不同而有所差異，其中，土壤含水量是決定中國沙棘種群演替方向的主要因素，它會影響沙棘的光合日變化過程以及光合“午休”。所以，不同產(chǎn)地沙棘成分含量的差異可能與這些因素有關(guān)。

2.7 方法對比分析

表5 4 種化合物測定方法的對比Table 5 Comparison of HPCZE with other methods reported for the determination of four flavonoid compounds

蘆丁、山柰酚、異鼠李素和槲皮素是沙棘中的主要活性物質(zhì)，其中異鼠李素是沙棘中的主要物質(zhì)，同時蘆丁、山柰酚和槲皮素這些化合物也具有一定的藥理價值。因此，建立一種同時測定這幾種物質(zhì)的方法具有重要意義。在現(xiàn)有的研究中，關(guān)于這幾種成分測定的報道較多，結(jié)合本實驗測定結(jié)果，如表5所示。對照表中的數(shù)據(jù)，用不同方法對這幾種物質(zhì)進(jìn)行檢測，對比檢出限，結(jié)果表明，本方法對于分離檢測沙棘中的這幾種活性物質(zhì)較為靈敏。

3 結(jié) 論

本實驗采用HPCZE測定不同產(chǎn)地沙棘中蘆丁、山柰酚、異鼠李素和槲皮素4 種化合物的含量，在篩選所得的最優(yōu)條件下測定，4 種化合物在11 min內(nèi)得到很好分離，蘆丁、山柰酚、異鼠李素和槲皮素的線性范圍依次為0.01～0.51、0.05～0.93、0.02～0.65、0.03～0.81 mg/mL，相關(guān)系數(shù)分別為0.997 5、0.997 1、0.999 1、0.998 4，檢出限分別為5.05×10-5、2.10×10-5、3.75×10-5、1.31× 10-5mg/mL（RSN=3），平均回收率為95.51%～104.66%，RSD不大于3.92%。實驗結(jié)果表明，該方法實現(xiàn)了沙棘中多種化合物的自動分離檢測，操作簡便，分離效果好，可作為沙棘品質(zhì)測定的一種方法。

參考文獻(xiàn)：

[1] 王宏昊, 孫欣, 花圣卓, 等. 我國沙棘要用歷史記載及藥品開發(fā)現(xiàn)狀[J]. 國際沙棘研究與開發(fā), 2012, 10(4): 25-28. DOI:10.3969/ j.issn.1672-4836.2012.04.009.

[2] LI Yingqin, HU Chun. Hippophae rhamnoides L.沙棘(Shaji, Common Sea-buckthorn)[M]//Dietary Chinese Herbs. Vienna: Springer, 2015: 403-415. DOI:10.1007/978-3-211-99448-1-46.

[3] 康健, 王愛芹, 顧晶晶, 等. 新疆沙棘生產(chǎn)性能和主要營養(yǎng)成分研究[J]. 食品科學(xué), 2009, 30(4): 99-102. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2009.04.017.

[4] STOBDAN T, KOREKAR G, B SRIVASTAVA R. Nutritional attributes and health application of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.): a review[J]. Current Nutrition and Food Science, 2013, 9(2): 151-165.

[5] 陸敏, 張紹巖, 張文娜, 等. 高效液相色譜法測定沙棘汁中7 種有機(jī)酸[J]. 食品科學(xué), 2012, 33(14): 235-237.

[6] TELESZKO M, WOJDYLO A, RUDZINSKA M, et al. Analysis of lipophilic and hydrophilic bioactive compounds content in seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries[J]. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 2015, 63(16): 4120-4129. DOI:10.1021/acs.jafc.5b00564.

[7] PILAT B, BIENIEK A, ZADERNOWSKI R. Chemical composition of individual morphological parts of the seabuckthorn fruit (Hippopha? rhamnoides L.)[J]. Producing Sea Buckthorn of High Quality, 2014, 29: 79.

[8] 張根臣, 劉俊寶, 李永路, 等. 淺論沙棘及其功效應(yīng)用[J]. 中國西部科技, 2011, 10(5): 54-55. DOI:10.3969/j.issn.1671-6396.2011.05.023.

[9] WANI T A, WANI S M, AHMAD M, et al. Bioactive profile, health benefits and safety evaluation of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.): a review[J]. Cogent Food and Agriculture, 2016, 2(1): 1128519. DOI: 10.1080/23311932.2015.1128519.

[10] MAKOVICS-ZSOHAR N, HEGEDUS A, REDEI R, et al. The antioxidant capacity of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries depends on the genotype and harvest time[J]. International Journal of Horticultural Science, 2014(3/4): 27-30.

[11] 花圣卓, 許濤, 王宏昊, 等. 沙棘中抗輻射損傷成分及其作用機(jī)理淺析[J]. 國際沙棘研究與開發(fā), 2012, 10(3): 12-15. DOI:10.3969/ j.issn.1672-4836.2012.03.004.

[12] 白生文, 湯超, 田京, 等. 沙棘果渣總黃酮提取工藝及抗氧化活性分析[J]. 食品科學(xué), 2015, 36(10): 59-64. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201510012.

[13] MICHEL T, DESTANDAU E, ELFAKIR C. Evaluation of a simple and promising method for extraction of antioxidants from seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.) berries: pressurised solventfree microwave assisted extraction[J]. Food Chemistry, 2011, 126(3): 1380-1386. DOI:10.1016/j.foodchem.2010.09.112.

[14] 焦翔, 殷麗君, 程永強(qiáng). 沙棘葉黃酮的提取及抑菌作用研究[J]. 食品科學(xué), 2007, 28(8): 124-129. DOI:10.3321/ j.issn:1002-6630.2007.08.026.

[15] MICHEL T, DESTANDAU E, LE FlOCH G, et al. Antimicrobial, antioxidant and phytochemical investigations of seabuckthorn (Hippopha? rhamnoides L.) leaf, stem, root and seed[J]. Food Chemistry, 2012, 131(3): 754-760. DOI:10.1016/j.foodchem.2011.09.029.

[16] 溫中平, 張紅梅, 茹志萍, 等. 百通沙棘茶調(diào)節(jié)血脂作用實驗研究[J].國際沙棘研究與開發(fā), 2004, 2(3): 24-32.

[17] 王家駿, 喻道軍, 劉艷, 等. 沙棘油對汞致急性肝、腎損傷的保護(hù)作用[J]. 環(huán)境與職業(yè)醫(yī)學(xué), 2011, 28(2): 109-116. DOI:10.13213/j.cnki. jeom.2011.02.019.

[18] 程嘉藝, 滕丹, 李偉, 等. 沙棘總黃酮對血管內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用及機(jī)制研究[J]. 中國中西醫(yī)結(jié)合雜質(zhì), 2011, 31(3): 355-358.

[19] 田俊生, 鄭曉芬, 張麗增, 等. 沙棘籽油抗抑郁作用[J]. 食品科學(xué), 2013, 34(19): 279-282. DOI:10.7506/spkx1002-6630-201319057.

[20] CHRISTAKI E. Hippophae rhamnoides L. (sea buckthorn): a potential source of nutraceuticals[J]. Food and Public Health, 2012, 2(3): 69-72. DOI:10.5923/j.fph.20120203.02.

[21] 龔志, 周曉萍. 沙棘的開發(fā)與使用價值探討[J]. 新疆中醫(yī)藥, 2011, 29(2): 78-80. DOI:10.3969/j.issn.1009-3931.2011.02.045.

[22] SINGH A K, DEEP P, DUBEY S, et al. Comparative studies on antioxidant activity, total phenol content and high performance thin layer chromatography analysis of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides L.) leaves[J]. Pharmacognosy Journal, 2014, 6(5): 5-8. DOI:10.5530/pj.2014.5.2.

[23] SNEHAL B, BHANDARE, KIRTI S, et al. Simultaneous quantification of kaempferol and quercetin in medicinal plants using HPTLC[J]. International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2016, 7(6): 2379-2384. DOI:10.13040/IJPSR.0975-8232.7(6).2379-2384.

[24] TELANGE D R, PATIL A T, TATODE A, et al. Development and validation of UV spectrophotometric method for the estimation of kaempferol in kaempferol: hydrogenated soy phosphatidylcholine (HSPC) complex[J]. Pharmaceutical Methods, 2014, 5(1): 34-38. DOI:10.5530/phm.2014.1.6.

[25] 樊鑫梅, 申雪麗, 閆麗麗, 等. 高效液相色譜法同時測定沙棘果中槲皮素、山柰酚和異鼠李素的含量[J]. 中國醫(yī)院藥學(xué)雜志, 2012, 32(17): 1343-1346. DOI:10.13286/j.cnki. chinhosppharmacyj.2012.17.005.

[26] 劉娟, 楊艷麗. HPLC法測定沙棘不同部位槲皮素和異鼠李素的含量[J]. 遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報, 2010, 12(6): 16-17. DOI:10.13194/ j.jlunivtcm.2010.06.18.liuj.079.

[27] 夏宣宣, 吳芹, 張光燦, 等. 土壤水分對沙棘光合日變化的影響[J]. 山東建筑大學(xué)學(xué)報, 2015, 30(5): 441-444. DOI:10.3969/ j.jssn.1003-8981.2014.05.006.

[28] 殷東生, 周志軍, 郭樹平. 光照對沙棘幼苗生長、生物量分配及光合特性的影響[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究, 2014, 32(3): 48-53. DOI:10.3969/ j.jssn.1673-7644.2015.03.008.

[29] 付陽, 王宇坤, 劉明博, 等. UPLC-ESIMS法同時測定沙棘黃酮中5 種主要成分含量[J]. 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版), 2016, 37(3): 129-133.

[30] 任強(qiáng), 吳昊, 聶其婷, 等. HPLC-DAD法同時測定苦蕎麥保健品中蘆丁槲皮素山奈酚含量[J]. 濟(jì)寧醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2016, 39(5): 317-323. DOI:10.3969/j.issn.1000-9760.2016.05.004.

[31] 周逸芝, 劉訓(xùn)紅, 陳菲, 等. 高效液相色譜法同時測定龍柴方中槲皮素、山奈素、異鼠李素[J]. 中成藥, 2013, 35(10): 2164-2167. DOI:10.3969/j.issn.1001-1528..2013.10.023.

Simultaneous Determination of Four Active Compounds in Sea Buckthorn from Three Different Geographic Regions by High Performance Capillary Zone Electrophoresis

YANG Xia1, FENG Feng1,2,*, LIU Lizhen2, CHEN Zezhong2
(1. School of Chemistry and Material Science, Shanxi Normal University, Linfen 041000, China; 2. School of Chemical and Environmental Engineering, Shanxi Datong University, Datong 037009, China)

A high performance capillary zone electrophoresis (HPCZE) method was developed for the simultaneous separation and determination of rutin, kaempferol, isorhamnetin and quercetin in sea buckthorn. The effects of different electrophoresis conditions on separation efficiency were investigated. The running buffer was 20 mmol/L Na2B4O7-H3BO3with 1.5 mg/mL β-cyclodextrin at pH 9.55, the detection wavelength was set at 370 nm, applied voltage 25 kV and injection time 5 s. Under these optimal conditions, rutin, kaempferol, isorhamnetin and quercetin could be fully separated from each other within eleven minutes with good linearity in the range of 0.01 to 0.51, 0.05 to 0.93, 0.02 to 0.65, and 0.03 to 0.81 mg/mL, respectively and correlation coefficients between 0.997 1 and 0.999 1. The lowest detection limits were 5.05 × 10-5, 2.10 × 10-5, 3.75 × 10-5, and 1.31 × 10-5mg/mL, respectively (RSN= 3). The average recoveries of spiked samples were in the range from 95.51% to 104.66%, with a relative standard deviation (RSD) lower than 3.92% (n = 3). Under the optimized conditions, a mixture of four standard compounds and four active compounds in extracts of sea buckthorn from three different producing areas were determined. The results showed that the total content of active compounds was the highest in seabuckthorn from ürümqi, Xinjiang among three different producing regions, and lowest in the sample from Wuwei, Gansu. Furthermore, the sample from Lüliang, Shanxi had the highest quercetin content while the contents of kaempferol and isorhamnetin were the highest in the sample from ürümqi, Xinjiang. This method is rapid, simple, accurate and reliable for the simultaneous detection of active compounds in sea buckthorn.

10.7506/spkx1002-6630-201714022

TS207.3

A

1002-6630（2017）14-0144-07

楊霞, 馮鋒, 劉荔貞, 等. 高效毛細(xì)管區(qū)帶電泳法同時檢測3 個產(chǎn)地沙棘果粉中的活性物質(zhì)[J]. 食品科學(xué), 2017, 38(14): 144-150.

10.7506/spkx1002-6630-201714022. http://www.spkx.net.cn

YANG Xia, FENG Feng, LIU Lizhen, et al. Simultaneous determination of four active compounds in sea buckthorn from three different geographic regions by high performance capillary zone electrophoresis[J]. Food Science, 2017, 38(14): 144-150. (in Chinese with English abstract) DOI:10.7506/spkx1002-6630-201714022. http://www.spkx.net.cn

2016-09-24

國家自然科學(xué)基金面上項目（21375083）

楊霞（1990—），女，碩士研究生，研究方向為毛細(xì)管電泳技術(shù)。E-mail：18634922978@163.com

*通信作者：馮鋒（1964—），男，教授，博士，研究方向為光分析化學(xué)。E-mail：feng-feng64@263.net

Key words:high performance capillary zone electrophoresis (HPCZE); rutin; kaempferol; isorhamnetin; quercetin; sea buckthorn