趙 鑫， 寇江力， 郭永強， 蒲彥川， 周開升， 南 偉， 汪 靜， 伍亞民， 張海鴻

(1蘭州大學第二醫(yī)院骨科， 2甘肅省骨關節(jié)疾病研究重點實驗室， 甘肅 蘭州 730030； 3第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所三室， 創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室， 重慶 400042)

Ski在大鼠活化星形膠質細胞中表達的變化*

趙 鑫1, 2， 寇江力1, 2， 郭永強1, 2， 蒲彥川1, 2， 周開升1, 2， 南 偉1, 2， 汪 靜2， 伍亞民3， 張海鴻1

(1蘭州大學第二醫(yī)院骨科，2甘肅省骨關節(jié)疾病研究重點實驗室， 甘肅 蘭州 730030；3第三軍醫(yī)大學大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所三室， 創(chuàng)傷、燒傷與復合傷國家重點實驗室， 重慶 400042)

目的： 探究Ski在大鼠正常及活化星形膠質細胞中的表達及隨時間變化的規(guī)律。方法: 提取大鼠大腦皮質，分離星形膠質細胞，體外培養(yǎng)。采用LPS刺激和細胞劃痕損傷2種方法活化星形膠質細胞，均采用Western blot法檢測各個時點2種活化星形膠質細胞中Ski和膠質纖維酸性蛋白(GFAP)蛋白表達情況，利用間接免疫熒光法檢測Ski蛋白在星形膠質細胞中的表達定位。結果: GFAP蛋白在星形膠質細胞中固有表達，LPS活化和劃痕損傷后表達均上調。Ski在正常星形膠質細胞中呈低表達狀態(tài)，1 mg/L LPS活化星形膠質細胞后，Ski表達開始增加，4 d時表達量最高(P<0.05)，6 d時開始下降，但仍高于未活化組；細胞劃痕損傷后Ski蛋白表達情況與上述情況高度一致。Ski在正常及LPS活化6 d星形膠質細胞中表達主要集中在胞核，LPS活化后2和4 d時在胞質中出現(xiàn)明確的Ski表達。結論: Ski蛋白表達于星形膠質細胞，并在活化星形膠質細胞中表達上調。由此，我們推測Ski蛋白可能調控星形膠質細胞的活化、增殖等過程。

Ski； 膠質纖維酸性蛋白； 星形膠質細胞； 膠質瘢痕

脊髓損傷(spine cord injury，SCI)是一種嚴重的中樞神經系統(tǒng)創(chuàng)傷性疾病，該疾病的神經功能修復是目前醫(yī)學所面臨的重大難題[1]。而在中樞神經系統(tǒng)中，星形膠質細胞是數目最多的膠質細胞，是維持中樞神經系統(tǒng)正常結構和功能的基礎細胞[2-3]。有研究指出，活化的星形膠質細胞在脊髓損傷急性修復期中扮演著重要的角色[4]。

近年來研究表明，Ski在創(chuàng)口愈合、肝臟再生、腫瘤的發(fā)生發(fā)展、血管平滑肌的增殖及骨骼肌的分化、神經系統(tǒng)發(fā)育過程、脊髓損傷等領域起至關重要的作用[5-6]。本課題組前期在體實驗研究已報道了Ski在脊髓損傷后脊髓組織中的表達變化規(guī)律[7-8]，但Ski在細胞水平的表達規(guī)律又如何呢？為此，本實驗在細胞水平研究Ski在活化星形膠質細胞中的表達規(guī)律及細胞定位，為進一步探討Ski調控星形膠質細胞的活化、遷移及膠質瘢痕的形成奠定基礎。

材 料 和 方 法

1 動物

1～3天的新生健康SD大鼠，購于甘肅省中醫(yī)藥大學動物實驗中心。

2 主要試劑

DMEM/F12培養(yǎng)基和胰蛋白酶(Gibco)；胎牛血清(PAN-Biotech GmbH)；脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)、多聚甲醛、Trition X-100和SDS(Sigma)；RIPA裂解液和BCA蛋白定量檢測試劑盒(碧云天)；小鼠抗大鼠膠質纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein， GFAP)多克隆抗體和兔抗大鼠GFAP多克隆抗體(Proteintech)；抗Ski抗體(Santa Cruz)；小鼠抗大鼠β-actin單克隆抗體(Proteintech)；山羊抗小鼠IgG和FITC標記山羊抗兔IgG(Solarbio)；辣根過氧化物酶標記山羊抗兔和山羊抗小鼠IgG(北京中杉金橋)；山羊封閉血清、DAPI溶液和PVDF膜(Solarbio)；ECL試劑盒(Millipore)。

3 主要方法

3.1 新生大鼠大腦皮質星形膠質細胞的提取、純化及體外培養(yǎng) 取新生1～2 d內的SD大鼠乳鼠在75%乙醇中浸泡消毒，-20 ℃冰箱中冷凍麻醉5 min。剪斷雙側頸動脈放血，沿“人字縫”將頭皮剪開外翻，再沿頭顱后正中線剪開顱骨，取出雙側大腦皮質，放入D-Hanks液中，漂洗2遍。用眼科尖鑷仔細剝離腦膜。把剝離好的腦皮質放入盛有胰酶的皿器中，剪碎腦皮質，用1 mL移液器輕柔吹打至組織塊消散，置入37 ℃溫箱輔助胰酶充分消化腦皮質3 min。將消化后的腦皮質移至15 mL離心管中，向離心管補加完全培養(yǎng)基4 mL，1 500 r/min離心8 min。棄上清液，再加入12%完全培養(yǎng)基(DMEM/FBS)4 mL，制成細胞懸液，將其移至培養(yǎng)瓶中。放入37 ℃、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育。之后每隔3 d用含12%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基換液，培養(yǎng)6～8 d，待細胞融合貼滿瓶壁，封口后放入37 ℃恒溫旋轉搖床(190 r/min)，除去懸浮細胞和貼壁不牢的細胞，6 h后取出，進行傳代培養(yǎng)即可獲得純化的星形膠質細胞。

3.2 星形膠質細胞鑒定及純度計數 GFAP作為星形膠質細胞特異性標記蛋白[9-10]，采用GFAP細胞免疫熒光染色法對星形膠質細胞進行純度鑒定，在熒光顯微鏡高倍視野(×200)下隨機選取5個視野進行純度計數。星形膠質細胞純度=每一觀察視野內GFAP陽性細胞數/總細胞數。純度達到96%以上的星形膠質細胞符合本實驗要求。

3.3 LPS活化細胞模形的建立及其分組 將處于對數生長期的星形膠質細胞隨機分為2組：空白對照組；LPS單一刺激組。LPS單一刺激組再分6個亞組，采用濃度為0.001、0.01、0.1、1、10和100 mg/L的LPS分別作用于細胞8 h。采用Western blot法檢測各組GFAP蛋白的表達量。將處于對數生長期的星形膠質細胞重新隨機分為2組：空白對照組；LPS單一刺激組。單一刺激組再分4個亞組，取LPS終濃度為1 mg/L，刺激后繼續(xù)培養(yǎng)時間分別為2、4、6和8 d。采用Western blot法檢測各組Ski蛋白的表達量。各組均設3個皿。

3.4 細胞劃痕損傷模形的建立 參考文獻[11-12]建立細胞損傷模形的方法并加以改良。將純化后的原代星形膠質細胞傳代接種于6孔板中培養(yǎng)，直至細胞長滿融合。采用預先設計好的標準模版，其上劃有縱、橫網格線(間距均為3 mm)，將其放置在培養(yǎng)板的底部，吸掉培養(yǎng)板中的培養(yǎng)液并用PBS液輕柔沖洗2遍后，在超凈工作臺中用200 μL微量移液器吸頭嚴格按照預先設計好的標準模版線條均勻用力制成縱、橫損傷路徑。之后，用PBS清洗細胞以去除損傷的細胞碎片，劃傷寬度約為1 mm，補加新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)相應天數(0、1、2、4、6、8和10 d)后在倒置相差顯微鏡下觀察細胞反應，拍照后提取總蛋白。確保同一批次實驗內的星形膠質細胞損傷程度和范圍一致。

3.5 Western blot實驗 觀察上述各組細胞生長情況，收集各組細胞提蛋白。用預冷的PBS沖洗細胞2遍，用RIPA裂解液裂解30 min，細胞刮匙刮下細胞，在4 ℃低溫離心機中以轉速14 000 r/min離心15 min，收集上清，棄沉淀，加入30 μL(上清液的1/3)蛋白上樣液，開水煮沸3 min。BCA試劑盒測定總蛋白濃度，將其存放于-80 ℃冰箱保存待用。提取的蛋白質行10% SDS-PAGE(濃縮膠90 V，分離膠120 V)，將分離好的蛋白電轉至甲醇浸透好的PVDF膜上，采用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，TBST(10 mmol/L Tris-HCl，pH 7.5， 150 mmol/L NaCl， 0.5% Tween 20)洗滌10 min×3次，附加 I 抗 [兔抗大鼠GFAP多克隆抗體(1∶300)、兔抗大鼠Ski多克隆抗體(1∶100)和小鼠抗大鼠β-actin單克隆抗體(1∶5 000)]，4 ℃冰箱中反應過夜；TBST洗膜(方法同前)；附加II 抗[辣根過氧化物標記的山羊抗兔或抗小鼠IgG(1∶5 000)]，室溫下反應2 h；TBST洗膜(方法同前)；滴加ECL發(fā)光液，在GE凝膠成像系統(tǒng)中測量各目的條帶的灰度值，以目的蛋白的灰度值與內參照β-actin蛋白條帶的灰度值之比反應目的蛋白的表達水平。實驗重復3次。

3.6 免疫熒光染色檢測GFAP和Ski蛋白的表達 通過免疫熒光染色法分析各活化時點(0、2、4和6 d)Ski蛋白的表達規(guī)律及細胞亞定位，觀察Ski蛋白細胞亞定位及其是否隨活化時間的延長而發(fā)生改變。用細胞計數板計數細胞懸液的細胞濃度，將原代純化后的細胞以同一細胞濃度接種到蓋玻片上，貼壁后用1 mg/L LPS活化星形膠質細胞，4 d后倒掉舊的培養(yǎng)基，用PBS清洗2遍，多聚甲醛固定30 min，PBS洗滌2遍，Trition X-100通透20 min，PBS洗滌2遍，滴加山羊封閉血清，37 ℃下封閉30 min，然后吸凈封閉液，勿洗，加入 I 抗 [小鼠抗大鼠GFAP多克隆抗體(1∶300)和兔抗大鼠Ski多克隆抗體(1∶100)]，將玻片置于濕盒中，于4 ℃冰箱中孵育過夜。PBS洗滌2遍，避光下加 II 抗 [山羊抗小鼠IgG(1∶300)和FITC標記山羊抗兔IgG(1∶300)]，37 ℃溫箱中避光孵育90 min，PBS洗滌2遍，避光下附加DAPI，室溫孵育20 min，PBS洗滌2遍。甘油封片。熒光顯微鏡下觀察。陰性對照用PBS代替 I 抗。胞核及胞漿中出現(xiàn)紅色或綠色熒光為陽性細胞，陰性對照細胞不出現(xiàn)熒光。

4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 21.0軟件進行統(tǒng)計分析。每組數據來自3次獨立的實驗，數據均采用均數±標準差(mean±SD)表示，均數間比較采用單因素方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 體外培養(yǎng)SD大鼠大腦皮質星形膠質細胞形態(tài)及純度鑒定

首次傳代純化后的星形膠質細胞在倒置相差顯微鏡下觀察可見細胞傳代培養(yǎng)12 h后基本貼壁生長，細胞輪廓清晰，可見細胞突起較多，且胞突之間有交叉連接，胞體形態(tài)多樣，多數呈星形；活化后的細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，如細胞胞體肥大，胞突增粗、形狀不規(guī)則等(圖1)。待正常細胞密度合適，給予免疫熒光化學染色，熒光顯微鏡下可見星形膠質細胞更為清晰的形態(tài)學特征，且胞核呈圓形或橢圓形。通過其純度計算公式，得出星形膠質細胞純度平均值為98%。特異性標記抗原GFAP為紅色熒光，DAPI標記細胞核為藍色熒光，均清晰可辨(圖2)。

Figure 1.Appearance comparison between normal and activated astrocytes (×200).

圖1 星形膠質細胞活化前后形態(tài)的對比

Figure 2.Evaluation of the astrocyte purity by GFAP expression detection (×200).

圖2 通過檢測GFAP表達鑒定星形膠質細胞純度

2 劃痕損傷后星形膠質細胞形態(tài)變化

劃痕造成星形膠質細胞損傷后，劃傷區(qū)域的星形膠質細胞胞體及胞突完全消失，損傷周圍部分細胞的胞突斷裂，并退縮回胞體，遠隔損傷區(qū)域的星形膠質細胞形態(tài)未見明顯改變。隨著損傷時間的延長，損傷區(qū)周圍細胞體積增大，細胞突起增粗，4 d后細胞突起彼此交織，形成網狀聚集，見圖3。

Figure 3.Appearance of astrocytes after scratch injury (×200).

圖3 劃痕損傷后星形膠質細胞的形態(tài)

3 LPS誘導星形膠質細胞中GFAP蛋白表達的最適濃度

如圖4所示，各分組變量為LPS濃度，與正常對照組相比，隨著LPS濃度的升高，GFAP在星形膠質細胞中的表達上調。當濃度為0.01 mg/L時，GFAP蛋白表達少量升高，與對照組相比差異無統(tǒng)計學顯著性；當濃度大于0.01 mg/L時，GFAP表達上調程度與對照組相比差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，且濃度為1 mg/L時，GFAP表達量最高；當LPS濃度為10和100 mg/L時，GFAP蛋白表達量較1 mg/L有所降低，但仍高于對照組。

Figure 4.The effects of different doses of LPS on the protein level of GFAP in the astrocytes. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 mg/L.

圖4 不同濃度LPS對星形膠質細胞中GFAP蛋白表達的影響

4 LPS誘導星形膠質細胞中GFAP和Ski蛋白表達的時相變化

用1 mg/L LPS分別作用于星形膠質細胞0、2、4、6和8 d，經過不同時間的誘導活化，Ski和GFAP的表達量不同。如圖5所示，LPS誘導0～4 d這一時間段，Ski和GFAP蛋白表達量逐步增加，在4 d這一時間點達到峰值(P<0.05)；活化時間4～6 d時，Ski蛋白表達量又呈現(xiàn)快速下降趨勢，但Ski蛋白表達量仍高于對照組，具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，活化時間為8 d時，Ski蛋白表達量仍高于對照組，但差異無統(tǒng)計學顯著性。

Figure 5.The effects of LPS (0.1 mg/L) exposure for different stimulation time on the protein expression of Ski and GFAP in the astrocytes. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 d.

圖5 0.1 mg/L LPS作用不同時間對星形膠質細胞Ski和GFAP蛋白表達的影響

5 劃痕損傷后星形膠質細胞中GFAP和Ski蛋白表達的時相變化

劃痕損傷后經過不同時間(0、1、2、4、6、8和10 d)，星形膠質細胞Ski和GFAP的表達量不同。如圖6所示，劃痕損傷0～6 d這一時段，Ski和GFAP蛋白表達量逐步增加，在6 d這一時點達到峰值(P<0.05)；活化時間6～10 d時， Ski和GFAP蛋白表達量又呈現(xiàn)同步下降趨勢，但兩者蛋白表達量仍高于對照組，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Ski和GFAP表達情況同LPS活化的星形膠質細胞結果高度一致。

Figure 6.The effects of scratch injury for different time on the protein expression of Ski and GFAP in the astrocytes. Mean±SD.n=3.*P<0.05vs0 d.

圖6 不同作用時間的劃痕損傷對星形膠質細胞Ski和GFAP蛋白的影響

6 免疫熒光染色

在免疫熒光化學染色結果顯示，Ski在正常星形膠質細胞及活化星形膠質細胞中均有表達，在對照組中，Ski表達較弱，主要位于胞核，胞質中無明顯表達；在活化時間為2 d時，Ski表達較對照組有所增強，且胞質中出現(xiàn)明顯表達；活化4 d時，胞體明顯增大，胞核和胞質中的表達明顯增加；活化6 d時，Ski表達較4 d有所下降，胞質中的表達信號強度再次減少，隨著活化時間的繼續(xù)延長，Ski蛋白在胞質與胞核中的表達逐漸降低，且胞質降低要先于胞核，見圖7。

討 論

脊髓損傷致癱率極高，因脊髓損傷導致?lián)p傷部位以下運動與感覺功能喪失的患者逐年增多，且預后較差，脊髓損傷的病理變化是由多種因素介導的復雜過程[13]。因此脊髓損傷的修復成為當今醫(yī)學科研及臨床工作者研究的熱點、難點。

一般認為，SCI后膠質瘢痕的形成與損傷刺激、局部缺血微環(huán)境、代謝異常及炎癥反應等因素有關[14]。根據文獻[15-19]采用LPS活化星形膠質細胞，誘導星形膠質細胞中GFAP的上調，模擬脊髓損傷后的活化態(tài)星形膠質細胞。本次研究結果顯示，LPS以濃度依賴的方式上調星形膠質細胞中GFAP蛋白的表達，當濃度為1 mg/L時，GFAP蛋白表達最高；當LPS濃度為10 mg/L時，GFAP蛋白表達量較1 mg/L有所降低，與既往研究相符[20]。

c-Ski 作為進化保守蛋白，與多種細胞的增殖、分化、轉化和腫瘤發(fā)生發(fā)展相關，在多種細胞生長中具有重要的調控作用[6]；有研究發(fā)現(xiàn)，Ski在神經系統(tǒng)中可以調控神經系統(tǒng)胚胎發(fā)育、施萬細胞增殖及膠質母細胞瘤等神經系統(tǒng)病理變化過程[21]。本實驗是在細胞水平上研究Ski在活化星形膠質細胞中的表達規(guī)律及細胞定位，為進一步探討Ski調控星形膠質細胞的活化、遷移及膠質瘢痕的形成奠定基礎。

GFAP是星形膠質細胞特異性標志蛋白[9-10]。有研究報道[22-23]，在正常的CNS中，星形膠質細胞中GFAP蛋白表達水平較低，當星形膠質細胞受到輕微的外界刺激時，GFAP蛋白表達水平開始上升，細胞骨架結構同期開始肥大；當星形膠質細胞受到強烈刺激，并發(fā)嚴重膠質化時，GFAP表達顯著增高，同時伴有細胞的增生；GFAP作為星形膠質細胞重要的細胞骨架結構蛋白，對星形膠質細胞的生物活性起到重要的調節(jié)作用，GFAP表達水平隨著星形膠質細胞活化程度的增高而表達上升。因此GFAP的表達水平可反映星形膠質細胞的活化程度。本研究結果顯示，在通過LPS誘導或細胞劃痕損傷活化后的星形膠質細胞中，GFAP蛋白表達量早期逐步上升的，同以往研究結果一致[22]，標志星形膠質細胞活化成功。

另外，本研究結果顯示Ski蛋白在活化星形膠質細胞中的表達具有時間依賴性。在正常星形膠質細胞中，Ski蛋白處于持續(xù)低表達狀態(tài)；1 mg/L LPS誘導細胞活化后，Ski蛋白表達逐漸增高，4 d時Ski蛋白表達達到高峰，6 d時開始下降，但仍高于未活化組；此規(guī)律與GFAP蛋白在活化星形膠質細胞中的表達規(guī)律高度一致。此外，通過細胞劃痕損傷來進一步體外模擬活化星形膠質細胞，在劃痕損傷0～6 d這一時間段，Ski蛋白表達量逐步增加，在6 d這一時間點達到峰值；活化時間6～10 d時， Ski蛋白表達量又呈現(xiàn)下降趨勢，但Ski蛋白表達量仍高于對照組；同樣，Ski表達規(guī)律與GFAP蛋白在活化星形膠質細胞中的表達規(guī)律高度一致。因此我們推測，Ski可能調控星形膠質細胞的活化、肥大、增殖及膠質瘢痕形成。

通過免疫熒光發(fā)現(xiàn)，正常星形膠質細胞中，Ski蛋白主要聚集在胞核，胞質表達較少；在活化星形膠質細胞中，胞質中開始出現(xiàn)Ski蛋白，6 d時胞質中Ski蛋白又再次減少。我們知道，蛋白質的功能通常與其在細胞內的亞細胞定位相關，因此，通過其活化前后Ski蛋白亞定位的變化，我們可以推斷，Ski在星形膠質細胞活化過程中起重要的調控作用。蛋白在細胞內的亞定位問題，是細胞生物學、分子生物學研究的中心問題，了解Ski蛋白的定位從而有助于我們探索其生物學功能。

Figure 7.The immunolocalization and change of Ski in the astrocytes (×400).

圖7 Ski在星形膠質細胞中的免疫熒光定位及其變化

脊髓損傷后，星形膠質細胞反應性進入活化狀態(tài)，主要表現(xiàn)為胞體增生肥大、突起變粗、分支增多，并向損傷區(qū)域遷移聚集，進而形成膠質瘢痕[24]。膠質瘢痕對脊髓損傷神經修復作用存在雙面性。早期研究表明[25]，脊髓損傷修復的關鍵是提供軸突生長的通道，軸突在脊髓內能夠生長，但生長的軸突必須穿過斷端膠質瘢痕才能到達遠端，獲得運動功能的恢復。相關研究證實[26]，膠質瘢痕的形成對神經功能的恢復是不利的，膠質瘢痕形成后可作為致密的物理屏障，妨礙神經軸突的再生。近期有研究發(fā)現(xiàn)[27]，早期膠質瘢痕的形成發(fā)揮著重要積極的作用，如阻止有害因子的擴散，限制炎癥的擴散，減少損傷區(qū)域面積，保護周圍神經組織，恢復內環(huán)境穩(wěn)定。研究調控膠質瘢痕生成的最佳時間窗，以充分發(fā)揮膠質瘢痕的積極作用，減少其負面影響，是本課題組今后研究的重點。

綜上所述，Ski蛋白表達于星形膠質細胞，且在活化后的星形膠質細胞中表達明顯增高，結合GFAP蛋白在活化星形膠質細胞中的表達規(guī)律與Ski表達規(guī)律的一致性，我們推測Ski可能作為新的信號分子，調控星形膠質細胞的活化、增殖等過程，并以此調節(jié)膠質瘢痕的形成過程。但其活化機制仍需要進一步研究。

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(責任編輯： 陳妙玲， 羅 森)

Changes of Ski expression levels in rat activated astrocytes

ZHAO Xin1, 2, KOU Jiang-li1, 2, GUO Yong-qiang1, 2, PU Yan-chuan1, 2, ZHOU Kai-sheng1, 2, NAN Wei1, 2, WANG Jing1, 2, WU Ya-min3, ZHANG Hai-hong1

(1DepartmentofOrthopedics,SecondHospitalofLanzhouUniversity,2KeyLaboratoryofBoneandJointDiseasesofGansuProvince,Lanzhou730030,China;3StateKeyLaboratoryofTrauma,BurnsandCombinedInjury,TheThirdDepartmentofResearchInstituteofSurgery,DapingHospital,ThirdMilitaryUniversity,Chongqing400042,China.E-mail:zhanghaihong1968@sina.com)

AIM: To explore the time-dependent change of Ski protein expression in normal and activated astrocytes in rats. METHODS: The astrocytes were obtained from rat cerebral cortex and culturedinvitro. The astrocytes were treated with LPS and scratch injury for activation. Western blot analysis was used to determine glial fibrillary acidic protein (GFAP) and Ski protein levels in activated astrocytes at a series of time points. The indirect immunofluorescence staining method was performed to detect the location of Ski protein in the astrocytes. RESULTS: The protein of GFAP was naturally expressed in the astrocytes, beginning to increase after treated with LPS and scratch injury. Little protein expression of Ski in the normal astrocytes was observed. The Ski protein expression began to increase after treated with 1 mg/L LPS, peaked at 4 d (P<0.05) and then deceased, but was stills higher than that in the normal cells. The protein expression level of Ski after scratch injury was highly consistent with above mentioned. Ski was mainly observed in the nucleus of the normal cells and the cells treated with LPS for 6 d, while it was observed in the cytoplasm 2 and 4 d after treated with LPS. CONCLUSION: The protein of Ski is expressed in the astrocytes, and the expression level is increased in activated astrocytes， mainly located in the nucelus. Ski may plays an essential roles in the processes of activation and proliferation of astrocytes.

Ski; Glial fibrillary acidic protein; Astrocytes; Glial scar

1000- 4718(2017)06- 0968- 07

2017- 01- 10

2017- 04- 10

國家自然科學基金資助項目(No. 30772299)

R741； R363.2

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2017.06.002

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