聶昌平 冉海霞 杜 江

1.遵義醫(yī)藥?？茖W(xué)校，貴州 遵義 563006；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025

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藥物研究

苗藥半截爛不同炮制品種的總黃酮含量測定

聶昌平1冉海霞1杜 江2*

1.遵義醫(yī)藥?？茖W(xué)校，貴州 遵義 563006；2.貴陽中醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽 550025

目的：對比測定不同炮制方法的苗藥半截爛總黃酮的含量。方法：以紫外分光光度法，在波長268nm下測定不同炮制方法的半截爛總黃酮含量。結(jié)果：9種不同炮制方法中總黃酮含量不同，其中以干品石灰炮制法含量最高。結(jié)論：此法操作簡單，精密度高，穩(wěn)定性和重復(fù)性良好，為半截爛的臨床應(yīng)用提供參考，也為半截爛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供了實驗依據(jù)。

半截爛；紫外分光光度法；總黃酮

半截爛為天南星科(Araceae)植物雪里見(ArisaemarhizomatumC.E.C.Fischer)塊莖[1-2]，又名雪里見、大半夏、野包谷、獨角蓮等，是我國特有藥材。其性辛、溫，有毒，具有祛風(fēng)除濕，活血止痛，解毒化瘀的功效，民間常用于治療風(fēng)濕疼痛[3]、跌打損傷、關(guān)節(jié)腫痛、毒蛇咬傷等，具有療效確切、起效快、用量少等特點，是土家族、苗族醫(yī)師常備藥材，被稱為“土家藥四寶”之一[4]。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)半截爛在鎮(zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、抗心律失常等方面有顯著療效，并在風(fēng)濕和類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等方面的活性受到越來越多的重視。但因?qū)︷つび袕娏业拇碳ば?，?？蓪?dǎo)致口唇刺痛、水腫、呼吸困難等[5]，其毒性反應(yīng)與天南星科其他藥物相似。民間常炮制后再進行服用，如將鮮品用灶灰土燙去外皮，再用童便浸泡7天后得到制半截爛后進行使用；或用半截爛泡酒服等[1,6]。研究表明，半截爛中所含的黃酮類成分與風(fēng)濕疼痛的活性成分相關(guān)[7]；胡志平等[8]以芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷作為指標(biāo)性成分進行含量測定；吳曙光等[9]對半截爛不同炮制品種的刺激性研究發(fā)現(xiàn)，不同炮制品種、鮮品及干品的刺激性不同，鮮品刺激性最強，酒制后刺激性最低，但對于總黃酮與炮制方法之間的聯(lián)系并沒有相關(guān)報道。本文通過對不同炮制方法的半截爛之間的總黃酮含量進行測定，比較不同炮制品之間總黃酮含量，確定炮制方法對總黃酮的影響，選取最優(yōu)的炮制方法，為其臨床應(yīng)用提供參考，也為半截爛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定提供實驗依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 UV-1800紫外可見分光光度計(日本島津公司)；AR1140電子分析天平(奧豪斯國際有限公司)；KQ5200E型超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；FW100型高速萬能粉碎機(天津市泰斯特儀器有限公司)。

1.2 材料 蒸餾水(實驗室自制)、甲醇(國藥集團化學(xué)試劑有限公司,批號：20131206)、芹菜素(貴州迪大科技有限責(zé)任公司,98%,批號：20150710)。半截爛藥材經(jīng)貴陽中醫(yī)學(xué)院孫慶文老師鑒定為天南星科植物半截爛的根莖，由炮制實驗室李瑋老師指導(dǎo)炮制得到。

2 藥材炮法

2.1 炮法 取鮮品藥材350g，置于炭火灰中燙去外皮，曬干。

2.2 童便制法 取鮮品藥材350g，將童(男) 便沒過藥材，搖勻，每天更換童(男) 便，浸泡7 d，撈出，曬干。

2.3 蒸法 取鮮品藥材350g，刮去粗皮，將生姜片置于下層，藥材置于上層，蒸制2～3 h，取出曬干。

2.4 酒泡法 取鮮品藥材350g，白酒沒過藥材，浸泡兩天，取出曬干。

2.5 石灰水泡法 取解品藥材350g，石灰水沒過藥材浸泡，密封，每天測量，保持pH值12以上，共浸泡10 d，取出曬干。

2.6 石灰水浸泡后蒸制法 取解品藥材350g，石灰水沒過藥材浸泡，密封，每天測量，保持pH值12以上，共浸泡10 d，取出后蒸制2 h，曬干。

2.7 酒蒸法 取鮮品藥材350g切片，用少量白酒拌勻，待酒被吸盡，放入蒸鍋，蒸制2 h，取出放涼，曬干。

2.8 干品石灰炮法 取干品藥材350g，與生石灰片錯落疊放，多次、少量澆水，待整齊均勻冒出白煙后停止?jié)菜?，至藥材可捏散時取出，曬干。

3 方法與結(jié)果

3.1 對照品溶液的制備 準(zhǔn)確稱取120℃干燥恒重的芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品1.07mg，甲醇溶解，定容至25mL，搖勻，得濃度為0.43 mg/mL的芹菜素標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.2 吸收波長的選擇 分別取芹菜素標(biāo)準(zhǔn)溶液0.5mL，50%甲醇提取的供試品0.5mL，分別于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，取各溶液適量至10mL比色皿中，用甲醇溶液作空白對照，在190～800nm波長范圍內(nèi)分別掃描對照品溶液及供試溶液的吸收曲線。結(jié)果顯示兩者在268nm處均有穩(wěn)定的最大吸收，故選擇此波長作為測定波長。見圖1。

3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別精密吸取芹菜素對照品溶液0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、0.09mg于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得到5個不同濃度的對照品溶液，取各溶液適量至10mL比色皿中，以甲醇溶液作空白對照，在最大吸收波長處測定各溶液的吸光度A值，以濃度C對吸光度A作圖，得回歸方程A=0.07299C+0.12643，R=0.9997(C：μg/mL)。結(jié)果表明芹菜素在3.42～7.70μg/mL的范圍內(nèi)，濃度與吸光度呈良好的線性關(guān)系。

3.4 方法學(xué)考察

3.4.1 重復(fù)性試驗 取同一批藥材(過40目篩)6份，按上述優(yōu)選所得的提取工藝制備供試液，進行測定計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算半截爛總黃酮含量，RSD%為0.66%(n=6)，表明重復(fù)性好。見表1。

3.4.2 穩(wěn)定性試驗 取同一供試液，分別在0、20、30、40、50、60min測定其吸光度，計算RSD%為0.28%，表明樣品在60min內(nèi)穩(wěn)定。見表2。

3.4.3 精密度試驗 取4號芹菜素標(biāo)準(zhǔn)溶液依法連續(xù)測定6次，記錄各吸光度，計算其RSD%為0.01%，表明儀器精密度良好。見表3。

表1 重復(fù)性試驗

表2 穩(wěn)定性試驗

表3 精密度試驗

3.5 回收率試驗 精密稱取半截爛藥材粉末(總黃酮含量為4.0434mg/g，過40目篩)6份，每份0.5g，加入芹菜素對照品適量，依法制得供試液，精密吸取0.2mL供試液于5mL容量瓶中，甲醇定容，測定各供試品溶液的吸光度A值，計算其總黃酮回收率為102.19%，RSD%為1.91，表明回收率良好。見表4。

表4 回收率試驗

3.6 樣品測定 平行取半截爛各炮制品粉末(過40目篩)3份，每份1.0g，加入50%甲醇30mL，靜置30min，超聲提取40min，冷卻后補重，過濾，精密吸取濾液測定其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各總黃酮含量。見表5。

表5 各樣品總黃酮含量測定

續(xù)表5 表5 各樣品總黃酮含量測定

實驗結(jié)果可見，不同炮制方法的苗藥半截爛總黃酮含量不同，并且“干品石灰炮”制法所測得總黃酮含量最高，“蒸法”、“童便制法”等總黃酮含量也較高，而“石灰浸后蒸制”、“石灰水泡”等制法測得半截爛總黃酮的含量則較低。

4 討論

苗藥半截爛，苗族名為Xiex lil janb，主要分布于我國西藏東部、貴州、云南、四川南部、廣西至湖南南部等[7]。對于半截爛的研究主要集中在其活性成分及毒性的研究。冉海霞等[9]對半截爛肝腎毒性的探討，發(fā)現(xiàn)半截爛連續(xù)使用對小鼠肝臟的組織形態(tài)學(xué)有一定影響，對其功能無損傷；對腎的組織形態(tài)學(xué)無影響，但對其功能產(chǎn)生了一定損傷。何康等[11]對半截爛化學(xué)成分進行研究提取8個化合物，其中雪膽甲素、胸苷等4個化合物為首次從該屬植物分離得到。劉育辰等[12]通過對半截爛草酸鈣晶型的觀察，建立了對草酸鈣針晶的含量測定方法。但對其炮制品種的研究少之又少，而半截爛在炮制后其活性成分是否產(chǎn)生變化，則基本無研究。本文通過對半截爛總黃酮含量的測定發(fā)現(xiàn)，干品石灰炮法、蒸法、童便制法含量最高，與民間使用相符，而對于這幾種方法炮制的難易度，可以選用蒸法作為其最佳的炮制方法進行推廣?？傸S酮為天南星藥材中的有效成分之一[13]，半截爛與總黃酮之間也密切相關(guān)，因此建立半截爛炮制品與總黃酮之間的關(guān)系，有助于半截爛的進一步開發(fā)，也可與民間使用相結(jié)合，為未來臨床應(yīng)用及半截爛質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供實驗依據(jù)。

[1]吳紹敏, 楊紅艷.土家名藥半截爛資源調(diào)查及生藥學(xué)研究[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2005, 74(2):177-178.

[2]中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會.中國植物志(第四十五卷)[M].北京：科學(xué)出版社，2004：42.

[3]萬定榮,陳衛(wèi)江,錢赬,等.鄂西土家常用抗風(fēng)濕類植物藥[J].中國中藥雜志,1993(10):581-584.

[4]潘永華.土家藥四寶[J].中國民族醫(yī)藥雜志,1997,(04):35-36.

[5]吳皓,葛秀允,郁紅禮,等.天南星科四種有毒中藥針晶的晶型結(jié)構(gòu)和毒性的比較[C].中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥炮制分會.2009.

[6]萬定榮,陳衛(wèi)江,錢赬,等.鄂西土家常用抗風(fēng)濕類植物藥[J].中國中藥雜志,1993(10):581-584.

[7]陳春霞.民族藥材雪里見的生物活性及化學(xué)成分研究[D].武漢：華中科技大學(xué),2012.

[8]胡志平,杜江.HPLC測定苗藥半截爛中芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量[J].中國民族醫(yī)藥雜志,2015(3):52-53.

[9]冉海霞,趙海,杜江,等.苗藥半截爛對小鼠肝、腎毒性實驗的初步研究[J].實驗動物科學(xué),2015(2):27-30.

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[11]何康,王進喜,殷海,等.苗藥半截爛的化學(xué)成分研究[J].中藥材，2016(10):2274-2276.

[12]劉育辰,劉剛,張勇,等.雪里見中草酸鈣針晶形態(tài)結(jié)構(gòu)與含量[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2015(1):94-96.

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Determination of Total Flavonoids in Different Processed Varieties of the Miao MedicineArisaemarhizomatum

NIE Changping1RAN Haixia1DU Jiang2*

1.Zunyi Medicine and Pharmaceutical College ,Zunyi 563006,China; 2.Guiyang college of Traditional Chinese Medicine, Guiyang 550002, China

Objective Comparison of the determination of different processing methods of Miao medicineArisaemarhizomatum′stotal flavonoids content.Methods Using the method of UV and the wavelength used was 268 nm for the determination of total flavonoids in different processed varieties of the Miao MedicineArisaemarhizomatum.Results The content of total flavonoids in 9 kinds of different processing methods was different, and the content of dry lime was the highest.Conclusion This method is simple, accurate, stable and reproducible, which provides a reference for the clinical application ofArisaemarhizomatumand the experimental basis for the development of the quality standard.

Arisaema Rhizomatum; UV Spectrophotometric ;Total Flavonoids

聶昌平(1987-)，男，漢族，碩士研究生，助教，研究方向為藥物化學(xué)。E-mail:390840895@99.com

杜江(1959-)，男，漢族，本科，教授，研究方向為民族醫(yī)藥理論與民族藥的現(xiàn)代研究與開發(fā)。E-mail:dujiang.g&@163.com

R284.2

A

1007-8517(2017)10-0008-04

2017-03-24 編輯：陶希睿)