杜 鵑 楊宏昕

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

HPLC法測(cè)定民族藥材天仙子中金絲桃苷的含量

杜 鵑1楊宏昕2

(1.內(nèi)蒙古自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010020； 2.內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010017)

目的：測(cè)定天仙子不同藥用部位中金絲桃苷為含量。方法：HPLC法， C18柱，流動(dòng)相為甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(225∶30011)，流速1.0mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為360nm，柱溫為30℃。結(jié)果：金絲桃苷在0.007～0.464μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，r=0.9999；平均回收率=104.33%，RSD為1.85%。結(jié)論：天仙子籽、花、葉、莖、根金絲桃苷含量分別為<0.01%、0.198%、0.132%、0.061%、<0.01%，花、葉、莖金絲桃苷平均含量為 0.130%。

HPLC法；天仙子；金絲桃苷

天仙子為茄科植物莨菪Hyoscyamus niger·L.的干燥成熟種子。莨菪、小顛茄子、熏牙子，蒙藥名特訥格-烏布斯，藥用種子與葉子，我區(qū)均有分布。蒙醫(yī)用來(lái)驅(qū)蟲，藏醫(yī)用于治療鼻疳、梅毒、頭神經(jīng)麻痹、蟲牙等，中醫(yī)用于胃脘攣痛，喘咳，癲狂。天仙子含莨菪堿、阿托品、東莨菪堿等。藥理實(shí)驗(yàn)提示天仙子可抑制腺體分泌，對(duì)活動(dòng)過(guò)強(qiáng)或痙攣狀態(tài)的平滑肌有馳緩作用，并有擴(kuò)大瞳孔、解除迷走神經(jīng)對(duì)心臟的抑制作用，具有阿托品類藥物的作用特點(diǎn)，故臨床定位有大毒[1]。本文測(cè)定天仙子全草不同部位金絲桃苷的含量，以期作為藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)指標(biāo)之一。

1 儀器與試劑

1100型高效液相色譜儀 (美國(guó)安捷倫公司)，TJ-912型色譜分析平臺(tái)(太極計(jì)算機(jī)公司)。金絲桃苷對(duì)照品(111521-200303)由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；甲醇為色譜純；其他均為分析純?cè)噭?；水為純化水；天仙子采自?nèi)蒙古大青山壩口子村。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：Kromasi -C18柱(20mm×4.6mm,5μm)，流動(dòng)相甲醇-水-磷酸-三乙胺溶液(225：300： 1：1)，流速1mL·min-1，溫度30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)360nm nm，進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備：精密稱取金絲桃苷對(duì)照品適量，加甲醇制成0.058mg·mL-1的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備：取本品,粉碎，過(guò)100目篩，精密稱定0.1g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇10mL， 超聲處理50min ，放冷，濾過(guò)，濾液轉(zhuǎn)移至10mL量瓶?jī)?nèi) ，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.4 專屬性考察： 精密吸取甲醇金絲桃苷陰性溶劑，金絲桃苷對(duì)照品溶液，供試品溶液各10μL注入液相色譜儀，金絲桃苷對(duì)照品色譜峰峰純度尚好；供試品溶液中色譜峰保留時(shí)間與金絲桃苷對(duì)照品一致，甲醇陰性溶劑無(wú)吸收，表明該含量測(cè)定方法專屬性好，陰性溶劑無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 金絲桃苷色譜峰

2.5 線性關(guān)系考察：取對(duì)照品溶液為A溶液。精密吸取對(duì)照品A溶液1.0mL，加到10mL量瓶中，加甲醇稀釋到刻度為對(duì)照品B溶液，分別吸取對(duì)照品B溶液1、2、4μL ，對(duì)照品A溶液1、2、4、8μL，注入高效液相色譜儀，測(cè)定峰面積；以峰面積為縱坐標(biāo)(Y)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)(X)做線性回歸, 回歸方程為Y = 2284159 X +58465，r=0.9999。結(jié)果表明，金絲桃苷在0.007～0.464μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取同一份供試品溶液(葉)，分別在0，2，4，8，12h測(cè)定， RSD為0.85%。

2.7 精密度試驗(yàn)：吸取同一批供試品溶液(葉)，在上述色譜條件下重復(fù)測(cè)定6次，平均峰面積RSD為0.54%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)：取同一批樣品(葉)，按2.3供試品溶液制備方法制備6份樣品溶液，分別測(cè)定并計(jì)算含量，平均含量為0.198%，RSD為1.37%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)：取同一批已知含量的樣品(葉)6份，每份取約50mg，精密稱定，分別精密加入金絲桃苷對(duì)照品溶液0.5ml(0.21mg/ml)，按2.3供試品溶液制備方法制備樣品溶液，同法操作，分別注入液相色譜儀測(cè)定含量，計(jì)算回收率。平均回收率為104.33%，RSD為1.85%。

3 樣品測(cè)定

分別取天仙子不同要用部位，按上述方法測(cè)定。籽、花、葉、莖、根金絲桃苷含量分別<0.01%、0.198%、0.132%、0.061%、<0.01%，花、葉、莖金絲桃苷平均含量 0.130%(n=3)。

3 討論

天仙子主要含莨菪類生物堿，其毒性取決于生物堿含量，對(duì)于其他藥用部位是否含生物堿未見(jiàn)報(bào)道。本文通過(guò)HPLC法測(cè)定天仙子不同要用部位金絲桃苷含量，結(jié)果表明，種子與根金絲桃苷含量較低，主要集中在花葉莖部。天仙子是一個(gè)有深度開(kāi)發(fā)價(jià)值的天然藥材，特別是花葉莖，毒性小產(chǎn)量高。金絲桃苷是一類黃酮類化合物，具有多種生物活性，是目前天然藥物常用的含量檢測(cè)標(biāo)志性化合物，金絲桃苷含量高低在一定程度上決定藥材的質(zhì)量。本研究結(jié)果可為天仙子的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供進(jìn)一步的依據(jù)。

[1]內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生局.內(nèi)蒙古中草藥[M].內(nèi)蒙古自治區(qū)人民出版社，1972，708-709.

2016年8月18日收稿

R291.2

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1006-6810(2017)02-0048-01