羅俊霞范 知賈 冬劉 萃趙建波(河南省鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質量檢測流通中心 450006；河南省鄭州市農(nóng)業(yè)信息中心；河南省鄭州市園藝工作站）

幾個品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測卡的質量評價

羅俊霞1范 知2賈 冬1劉 萃1趙建波3*(1河南省鄭州市農(nóng)產(chǎn)品質量檢測流通中心 450006；2河南省鄭州市農(nóng)業(yè)信息中心；3河南省鄭州市園藝工作站）

為了解市面上銷售的黃曲霉毒素B1膠體金快速檢測卡的質量，對幾個品牌的檢測卡的最低檢測限、操作步驟和膠體金質量以及最終的檢測效果等進行了比較和評價。結果顯示：A公司的產(chǎn)品最好、B公司的產(chǎn)品次之、C公司的產(chǎn)品第三；雖然A公司和C公司的產(chǎn)品顯色效果較好，但在進行氮吹時對檢測人員的身體損害較大；B公司的檢測卡顯色不清晰，究其原因可能是該公司的抗原抗體質量較差或者研發(fā)技術不成熟。

黃曲霉毒素；膠體金快速檢測卡；質量評價

黃曲霉毒素（Afaltoxin，簡寫為AF）是黃曲霉菌和寄生曲霉菌的代謝物，目前已經(jīng)確定黃曲霉毒素有A F B1、AFM1等18種［1，2］，其中以AFB1的致癌性最強［3,4］。黃曲霉毒素廣泛存在于發(fā)霉的玉米、小麥等糧食作物和花生、菜籽等油料作物中以及飼料中［1,5］，牛奶和羊奶中也有發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素［6］。因為黃曲霉毒素強烈的致癌性、致畸性，世界衛(wèi)生組織將其列為Ⅰ類致癌物［7］，世界各國紛紛制定了各類食品（包括飼料）中黃曲霉毒素的限量標準［8-9］。據(jù)聯(lián)合國糧農(nóng)組織調(diào)查，截止1995年，全球已有77個國家和地區(qū)針對真菌毒素設立了限量法令［9］，中華人民共和國衛(wèi)生部于2011年發(fā)布的GB 2761標準中重新修訂了食品中真菌毒素AFB1、AFM1的限量指標，并分別規(guī)定了糧食作物、堅果級油料、油脂、豆類及其他食品中黃曲霉毒素的限量［10］。正因如此，糧食中黃曲霉毒素的檢測也成為了科研工作者的關注焦點。目前，黃曲霉毒素常用的檢測方法有薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質譜聯(lián)用技術、熒光分光光度法［11］、生物學方法、免疫學方法［12-14］等，另外，鄧省亮、陳笑笑、王督等人分別開展了膠體金免疫層析法快速檢測AFB1的研究［15-17］，但上述方法均存在諸多缺陷，如操作復雜，耗費時間長、對檢測人員的要求較高等，且生物學方法還只能用于定性檢測而無法進行定量檢測。

目前，膠體金免疫層析技術已廣泛應用于糧油作物中的黃曲霉毒素檢測，但市場上黃曲霉毒素的膠體金快速檢測卡林林總總，缺乏有效的監(jiān)督監(jiān)管機制來檢查或衡量這些檢測卡的檢測效果，同時也缺乏統(tǒng)一的質量標準，所以，在使用這些檢測卡時有必要對它們進行陰陽性樣品的比較測試，篩選出質量較優(yōu)的檢測卡用于日常檢測。為此，筆者特開展了本次試驗，以期對日常檢測的產(chǎn)品購置有所幫助。

1 材料與方法

1.1 試劑和材料

AFB1標準溶液購于Sigma公司，實驗過程中所用的有機溶劑均為色譜純，實驗用水均為純凈水，黃曲霉毒素B1膠體金免疫層析快速檢測卡分別購于北京、深圳、杭州、無錫、武漢，具體情況見表1。玉米為市場上購買，經(jīng)液相色譜檢測AFB1為陰性的玉米糝。

1.2 儀器和設備

表1 幾種品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測卡的基本情況

天平為余姚紀銘稱重校驗設備有限公司的感量為0.01g、型號為JM 2102的天平；旋渦混合器品牌為華利達，型號為WH-861；離心機是德國生產(chǎn)、品牌為Hettich、型號為Uniwersal 320R；氮吹儀是美國生產(chǎn)、品牌為Organomation Associates、型號為N-EVAPTM 112；移液器為美國熱電的Finnpipette的不同規(guī)格的單道可調(diào)移液器。

1.3 檢測方法

本試驗根據(jù)國標［10］給出的糧食作物的限量標準選取滿足要求的A、B、C、D四家公司的產(chǎn)品，分別就各公司檢測卡說明書所給出的稱樣量于第1天下午稱取玉米糝樣品各40個，其中20個樣品不添加AFB1的標準品，為陰性樣品；20個樣品添加AFB1的標準品，制備成濃度為5?g/kg的陽性添加樣品；于第2天上午根據(jù)各公司說明書中的步驟進行檢測、分析；根據(jù)分析結果計算出假陽性率和假陰性率；判讀后將圖片發(fā)給廠家工程師，讓廠家工程師進行判讀，也據(jù)此計算出假陽性率和假陰性率。同時就各品牌檢測卡的最低檢測限、操作步驟和膠體金質量各方面進行比較和評價。

2 結果與分析

2.1 說明書的檢測限

A、B、C、D四家公司的產(chǎn)品都滿足國家糧食作物中AFB15 μg/kg的限量要求，而E公司的檢測卡的最低檢測限是12 μg/kg，不能滿足國家對糧食作物中AFB1限量的要求。

2.2 從前處理的操作步驟方面評價

A公司、B公司和D公司的檢測卡的操作方法比較簡便，A公司的產(chǎn)品需要提取、離心、取上清液進行稀釋后點卡；B公司的檢測卡提取之后需要與復溶液或緩沖溶液按照一定比例進行混合、混勻后進行點卡；D公司的檢測卡的前處理只需提取、離心就可以點卡；C公司的產(chǎn)品則需要提取、離心、氮吹、復溶、稀釋之后進行點卡。

2.3 膠體金的質量方面

膠體金的質量評價是從T線和C線的顯色效果進行評價的，A公司和C公司的檢測卡顯色均勻、清晰，未出現(xiàn)斷斷續(xù)續(xù)、若隱若現(xiàn)的情況，說明他們的抗原抗體質量好或技術過硬；B公司的檢測卡顯色不清晰，有斷斷續(xù)續(xù)、若隱若現(xiàn)的情況發(fā)生，其原因可能是該公司的抗原抗體質量較差或研發(fā)技術不夠成熟；D公司的檢測卡顯色非常不均勻，質量最差。

2.4 檢測效果方面

由表2及實際檢測效果可知，A公司的產(chǎn)品采用消線法，40個樣品的檢測結果是20個陽性樣品的T線均消線，而20個陰性樣品則呈現(xiàn)T線比C線顏色淺，拍了圖片發(fā)給廠家工程師，廠家工程師判定結果和添加實際完全符合，說明樣品里可能含有黃曲霉毒素，只是含量較低，小于5 ppb，所以陰性樣品均表現(xiàn)為T線比C線顏色淺。

B公司的產(chǎn)品采用T線與C線比較的方法，圖片發(fā)給廠家工程師，廠家的判定結果和添加實際完全符合，符合率是100%；因為有陰性樣品作為對照，筆者自己判定結果有15%的不符合率,也就是說假陰性率為15%。

C公司的產(chǎn)品采用消線法，但從40個樣品的檢測結果看，所采用的不是消線法，而是T線、C線比較的方法，陰性樣品的C線均比T線顏色深，而陽性樣品的T線均比C線顏色淺。如果沒有陰、陽性樣品做對照，單單按照說明書的要求進行判定，5 ppb的添加樣品均是陰性的，廠家工程師的判斷也是如此，也就是說按照試劑盒說明書判斷假陰性率和廠家工程師判定假陰性率均是100%。

D公司的產(chǎn)品采用T線、C線比較的方法，20個陰性樣品的C線均比T線顏色淺，20個添加樣品中有14個樣品的T線和C線顏色一樣深淺，只有6個樣品的T線比C線顏色淺。也就是說有70%的假陰性率。

E公司的產(chǎn)品，因說明書上的檢出限很高，為12μg/kg，同時稱樣量也比較大，所以制備陽性樣品所需要的標準品量很大，未進行測試。

表2 幾種品牌的黃曲霉毒素膠體金快速檢測卡的檢測效果比較

3 結論與討論

檢測結果表明，A公司的產(chǎn)品最好、B公司的產(chǎn)品次之、C公司的產(chǎn)品第3。但這只是一批試劑盒的檢測結果，如果要知道該品牌的試劑盒是否穩(wěn)定，還需要進行穩(wěn)定性試驗，考察多批試劑盒；同時，還應該考察其對實際的陽性樣品的檢測結果。由于每個產(chǎn)品的判定標準不同，因此，有必要請廠家工程師對檢測人員進行專門培訓。

雖然A公司和C公司的產(chǎn)品顯色效果較好，但因前處理步驟較為繁瑣，需要進行氮吹濃縮，需要配置氮吹儀，在進行樣品檢測時，如果樣品里含有黃曲霉毒素B1，在進行氮吹時對檢測人員的身體損害較大，這也應該作為考察產(chǎn)品質量的主要因素。

[1] 柳其芳.酶聯(lián)免疫吸附法和薄層色譜法聯(lián)合分析黃曲霉毒素B1的研究[J].中國熱帶醫(yī)學,2006,6(2)：246-248.

[2] 曲秋穎,鮑蕾,石媛嫄,等.黃曲霉毒素的檢測技術及預防措施[J].農(nóng)產(chǎn)品加工·學刊,2011(8)：85-89.

[3] 記成,趙麗紅.黃曲霉毒素生物降解的研究及前景展望[J].動物營養(yǎng)學報,2010,(22)：241-245.

[4] 高秀潔,鄧中平,焦紅,等.黃曲霉毒素B1快速檢測方法的研究進展[J].熱帶醫(yī)學雜志,2008,8(12)：1297-1300.

[5] 王喜平.糧油食品中黃曲霉毒素的污染及預防措施[J].食品工業(yè)科技,2004(9）：141-142,134.

[6] 閆磊,李卓,張燕.牛奶中黃曲霉毒素的放射免疫法檢測[J].食品研究與開發(fā),2010,31(1)：135-137.

[7] 湯俊琪,龐廣昌.免疫傳感器測定食品中黃曲霉毒素的研究進展[J].食品科學,2009,30(17)：326-329.

[8] 丁曉霞,李培武,周海燕,等.黃曲霉毒素限量標準對我國居民消費安全和花生產(chǎn)業(yè)的影響[J].中國油料作物學報,2011, 33(2)：180-184.

[9] 許艷麗,鮑蕾,梁成珠,等.黃曲霉毒素檢測及其生物防治方法的研究進展[J].安徽農(nóng)業(yè)科學,2007,35(32)：10210-10212,10228.

[10] 中華人民共和國衛(wèi)生部.GB 2761-2011.食品安全國家標準食品中真菌毒素限量[S].北京：中國標準出版社,2011.

[11] 李少暉,任丹丹,謝云峰,等.食品中黃曲霉毒素檢測方法研究進展[J].食品安全質量檢測學報,2015,6(4)：1107-1115.

[12] 高秀芬,計融.黃曲霉毒素的分析方法[J].中國食品衛(wèi)生雜志, 2005,17(4)：347-352.

[13] 李園園,李培武,張奇,等.量子點標記熒光免疫法檢測花生中黃曲霉毒素B1[J].中國油料作物學報,2012,34(4)：438-442.

[14] 費得利,烏帕曼,王宏,等.免疫親和層析凈化高效液相色譜法與酶聯(lián)免疫分析法試劑盒檢測花生及玉米中黃曲霉毒素[C]. 2010年第三屆國際食品安全高峰論壇論文集,77-80.

[15] 鄧省亮,賴衛(wèi)華,許楊,等.膠體金免疫層析法快速檢測黃曲霉毒素B1的研究[J].食品科學,2007,28(2)：232-236.

[16] 陳笑笑,桑麗雅,李康,等.一種快速檢測食用油中黃曲霉毒素B1的膠體金試劑板的研制[J].中國糧油學報,2013,28(7)：99-103.

[17] 王督,張文,李培武,等.膠體金免疫層析法快速定量分析糧油農(nóng)產(chǎn)品中黃曲霉毒素B1[J].中國油料作物學報,2014,36 (4)：529-532.

2016-10-28

*為通訊作者。